基于通用探针芯片的多重定量PCR检测系统技术方案

本发明专利技术提供了基于通用探针芯片的多重定量PCR检测系统。具体地，本发明专利技术的基于表面探针的定量PCR检测体系包括：(a)一固相载体；(b)待检测序列特异性引物对，包括第一引物和第二引物；(c)淬灭探针。本发明专利技术还提供了相应的检测方法、检测装置和应用。本发明专利技术可快速、简便、高效、同时对多种靶序列进行定量检测。

【技术实现步骤摘要】
基于通用探针芯片的多重定量PCR检测系统
本专利技术涉及核酸检测领域，更具体地涉及基于通用探针芯片的多重定量PCR检测系统。
技术介绍
在常规的Taqman荧光定量PCR(TaqmanqPCR)中，在检测体系中存在用于扩增的引物对以及用于检测的Taqman探针。其中，在溶液里的Taqman探针一侧(或一端)有荧光基团(fluorophore)，另一侧(或另一端)有淬灭基团(quencher)。该探针完好的时候，因为淬灭剂和荧光剂距离足够近，淬灭剂就能有效抑制荧光剂，从而没有(或基本没有)荧光信号。当溶液里存在与该探针序列匹配的核酸样本时，那么在样本被PCR扩增的过程中，该探针被扩增酶剪切，于是荧光剂和淬灭剂会互相脱离开来，导致抑制作用减少或消失，从而使得荧光剂产生荧光信号。扩增方面在多重扩增的情况下，不同的探针和引物容易引起干扰。特别是重数比较高的情况下，一个有效的办法是使用巢式PCR。但是巢式PCR一般需要两步法来做，中间需要添加引物和酶，同时稀释非特异性产物。对于多重qPCR而言，因为每一个待测序列需要一种发光光谱可与其它荧本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于表面探针的定量PCR检测体系，其特征在于，所述检测体系包括：/n(a)一固相载体，所述固相载体的一个主表面设有n个子检测区，其中，n为≥2的正整数，并且至少一个子检测区为表面定量子检测区；/n其中，所述的各表面定量子检测区各自独立地固定有微阵列表面探针，所述微阵列表面探针为单链核酸，并且所述微阵列表面探针的一端固定于所述的固相载体的表面，并且所述微阵列表面探针带有第一可检测标记物，所述的第一可检测标记物选自下组：荧光基团、发光基团、发光标记物、量子点、或其组合；/n(b)待检测序列特异性引物对，包括第一引物和第二引物；/n(c)淬灭探针，所述淬灭探针的一侧或一端或中间连接有淬灭基团...

【技术特征摘要】
1.一种基于表面探针的定量PCR检测体系，其特征在于，所述检测体系包括：
(a)一固相载体，所述固相载体的一个主表面设有n个子检测区，其中，n为≥2的正整数，并且至少一个子检测区为表面定量子检测区；
其中，所述的各表面定量子检测区各自独立地固定有微阵列表面探针，所述微阵列表面探针为单链核酸，并且所述微阵列表面探针的一端固定于所述的固相载体的表面，并且所述微阵列表面探针带有第一可检测标记物，所述的第一可检测标记物选自下组：荧光基团、发光基团、发光标记物、量子点、或其组合；
(b)待检测序列特异性引物对，包括第一引物和第二引物；
(c)淬灭探针，所述淬灭探针的一侧或一端或中间连接有淬灭基团；
并且，所述淬灭探针与至少一个表面定量子检测区的微阵列表面探针可结合从而形成双链结构，并且在所述双链结构中，所述的淬灭探针的淬灭基团使得所述的微阵列表面探针的第一可检测标记物(如荧光基团)的信号被全部或部分淬灭；当检测体系中的所述淬灭探针的浓度降低时，至少一个表面定量子检测区的微阵列表面探针的第一可检测标记物(如荧光基团)的信号的淬灭程度降低。


2.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述部分淬灭指与加入淬灭探针之前相比，加入后的所述的微阵列表面探针的第一可检测标记物(如荧光基团)的信号的淬灭程度≥50％，较佳地，≥70％，更佳地，≥80％。


3.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述淬灭程度降低指随着检测体系中的所述淬灭探针的浓度的降低，微阵列表面探针的第一可检测标记物(如荧光基团)的信号的淬灭程度≤50％，较佳地，≤30％，更佳地，≤20％。


4.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述第一引物具有式I结构：
5’-Tai’-Lai-Ca-Lbi-Pi-Lci-Tbi-Tai-3’(I)
其中，i是多(n’)重检测中的第i重，i为正整数且1≤i≤n’；n’为正整数且1≤n’≤固相载体子检测区数目，较佳地，n’为2-100，更佳地，n’为3-20；
Tai为第i靶向基因的正向特异性序列的a部分；
Tai’为Tai的反向互补序列；
Tbi为第i靶向基因的正向特异性序列的b部分；并且Tai，Tbi直接相邻连接，共同组成靶向基因的正向特异性序列；
Pi为标记第i重基因扩增的标记探针(barcodeindex探针)序列；
Ca为正向通用型扩增引物序列；
Lai、Lbi、Lci各自独立地为无或柔性过渡区，所述柔性过渡区选自下组：长度为1-15nt的柔性过渡核酸片段、长度为1-10nt的柔性过渡聚合物片段、或其组合；
各“-”独立地为键或核苷酸连接序列。


5.如权利要求4所述的检测体系，其特征在于，Tai的长度为6-20bp，较佳地，8-16bp，更佳地，9-12bp。


6.如权利要求4所述的检测体系，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：岳敏，
申请(专利权)人：深圳闪量科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44