一种miRNA的检测方法技术

本发明专利技术公开一种miRNA的检测方法，属于化学和生物检测技术领域。本发明专利技术所述方法为：肽核酸先与荧光染料标记的DNA（FAM‑DNA）杂交形成双链，当目标miRNA出现时，由于链置换反应将FAM‑DNA置换下来，与PNA形成双链结构，此过程荧光染料的荧光强度会发生变化，从而检测出miRNA的含量。本发明专利技术所述方法具有快速、经济、简单方便的特点，不需借助大型仪器设备，也不需要精确的温度控制和严格的洗涤步骤。该方法对目标miRNA的检测限较低，可应用于肿瘤细胞裂解液中miRNA的检测与肿瘤细胞总RNA提取后含量检测，并且该检测体系具有良好的特异性。

A detection method of miRNA

【技术实现步骤摘要】
一种miRNA的检测方法
本专利技术涉及一种miRNA的检测方法，属于化学和生物检测

技术介绍
MicroRNA(miRNA)是一类内生的、长度约为20-24个核苷酸的小RNA，其在真核基因表达调控中有着广泛的作用，miRNA不仅在基因位置上保守，序列上也呈现出高度的同源性，其调节着人类三分之一的基因，miRNA参与生命过程中一系列的重要进程，它是肿瘤细胞主动分泌的，随着肿瘤细胞的生成、凋零，miRNA的表达量一直在变化，所以每种miRNA的表达量代表了在某一刻人类体内健康或者疾病的信息，这使miRNA成为肿瘤标志物之一。因此对miRNA的检测不仅使我们了解其在生命过程中的调节作用还可以实现对疾病的早期诊断。miRNA传统的检测方法主要有逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、miRNA测序法、原位杂交法等，以上方法存在检测耗时长，需要昂贵的检测设备以及专业的检测人员等缺点，因此开发快速，灵敏度高，特异性强，操作简单方便的miRNA检测方法具有重要意义，近年来，开发了许多新的miRNA分析方法，这些方法引入了分子信标，生物发光，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种miRNA的检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：/n（1）使肽核酸与碳量子点通过酰胺化学键共价偶联，得到CQDs-PNA；采用FAM标记DNA，得到FAM-DNA；/n（2）将CQDs-PNA和FAM-DNA加入到盐溶液体系中进行杂交，杂交得到混合溶液I，I混合溶液中CQDs-PNA生物探针浓度为3~4μg/mL，FAM-DNA的浓度为180~200nmol/L；/n（3）向所述混合溶液I中加入目标miRNA，室温孵育20~30min，得到混合溶液II；/n（4）采用已知浓度的待检测目标miRNA为样品，测定检测体系的荧光强度，建立标准曲线，所述标准曲线为y=－0.062x+0.9...

【技术特征摘要】
1.一种miRNA的检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
（1）使肽核酸与碳量子点通过酰胺化学键共价偶联，得到CQDs-PNA；采用FAM标记DNA，得到FAM-DNA；
（2）将CQDs-PNA和FAM-DNA加入到盐溶液体系中进行杂交，杂交得到混合溶液I，I混合溶液中CQDs-PNA生物探针浓度为3~4μg/mL，FAM-DNA的浓度为180~200nmol/L；
（3）向所述混合溶液I中加入目标miRNA，室温孵育20~30min，得到混合溶液II；
（4）采用已知浓度的待检测目标miRNA为样...

【专利技术属性】
技术研发人员：高婷婷，裴和中，张国亮，杨秀华，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：云南;53