一种测定维生素K1原料药有关物质的方法技术

本发明专利技术公开了一种测定维生素K1原料药有关物质的方法，该方法包括取维生素K1原料药样品，以体积比为1：99‑10:90的四氢呋喃和95％乙腈水混合液为溶剂溶解，采用高效液相色谱法，以一定液相梯度程序进行，并分别按照外标法和主成份自身对照法计算维生素K1中各杂质含量。本发明专利技术操作简单，省时省力，易于掌握，专属性强，准确度高，精密度高，测定结果准确，可用于维生素K1原料药有关物质质量控制。

【技术实现步骤摘要】
一种测定维生素K1原料药有关物质的方法
本专利技术属于药物分析
，具体而言，涉及一种用于质量控制的维生素k1原料药有关物质的方法。
技术介绍
维生素k1，英文名phylloquinone，化学名为2-甲基-3-(3,7,11,15-四甲基-2-十六碳烯基)-1,4-萘二酮的反式和顺式异构体的混合物。本品为维生素类药,是肝脏合成因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ所必须的物质。维生素k1缺乏可引起这些凝血因子合成障碍或异常，临床可见出血倾向和凝血酶原时间延长。目前，维生素K1国内外药典标准均有收载，主要有中国药典2015版、美国药典USP40版、日本药典JP17版、欧洲药典EP9.2版以及英国药典2017版等。对比各国标准发现对于其有关物质只有欧洲药典标准有收载，其他各国标准中均只有特异杂质甲萘醌和顺式异构体，而对于其有关物质没有提及。在欧洲药典标准中有关物质采用的是正相液相系统来研究，在此系统中对于合成维生素K1的起始物料以及中间体体均未做说明，且正相液相系统平衡时间长，色谱柱使用寿命短，耐用性差。而查阅相关文献对于维生素K1的有关物质有所报道，但是均采用一般的反相系统，对于维生素K1合成中一些有机杂质无法检测出，不利于维生素K1的质量控制，特别是现今对于药品越来越严格的杂质研究而言。
技术实现思路
鉴于维生素K1的合成工艺特点，为了保证对维生素K1研发和生产质量的有效质量控制，本专利技术的目的在于通过大量试验研究，提供一种采用高效液相反相色谱技术测定维生素K1原料药有关物质的方法。该检测方法可用于维生素K1原料药的有关物质检测，准确可靠，专属性强，省时省力，易于操作。为了实现本专利技术的目的，专利技术人通过大量试验研究并不懈努力，最终获得了如下技术方案：一种测定维生素K1原料药有关物质的方法，取维生素K1原料药样品，采用如下色谱方法测定其有关物质含量。避光操作，照高效液相色谱法(《中国药典》2015年版通则0512)测定以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(推荐使用色谱柱为Luna5μmC18(2)100A250*4.6mm或效能相当的色谱柱)，柱温：40℃；检测波长为254nm；以65％乙腈水为流动相A，以乙腈：四氢呋喃＝90：10为流动相B，总流速为1.0ml/min，梯度程序如下：时间(min)0813455060B相％00959500取甲萘醌对照品、维生素K12，3环氧化物对照品、中间体A((4-羟基-2-甲基萘-1-基)乙酸酯)对照品、醋酸甲萘氢醌对照品以及维生素K1对照品，用一定比例的四氢呋喃和95％乙腈水稀释每ml中含甲萘醌对照品、维生素K12，3环氧化物对照品、中间体A((4-羟基-2-甲基萘-1-基)乙酸酯)对照品、醋酸甲萘氢醌对照品以及维生素K1对照品分别为0.3μg、4μg、0.3μg、0.3μg以及0.15mg的混合溶液作为系统适用性溶液，取50μl注入液相色谱仪，记录液相色谱图，理论板数按维生素K1峰计算应不低于4000，维生素K1峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。测定法取本品适量，精密称定，先加1ml四氢呋喃溶解再用95％乙腈水稀释制成每1ml中约含0.15mg样品的溶液，作为供试品溶液。另取甲萘醌对照品适量，精密称定，加95％乙腈水溶解并定量稀释制成每1ml中分别约含0.3μg的甲萘醌作为对照品溶液(1)。取供试品溶液，用95％乙腈水稀释成每1ml含0.15μg样品的溶液，作为对照品溶液(2)。精密量取对照品溶液(2)50μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰峰高为满量程的10％-25％。再精密量取供试品溶液及对照品溶液(1)各50μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液中如有甲萘醌峰，按外标法计算含量，其他单杂，扣除空白溶剂峰，按主成分自身对照法计算各杂质含量。与现有技术方法相比，本专利技术涉及的维生素K1原料药有关物质测定方法具有如下优点和显著的进步性：专属性强，准确度高，易于掌握，精密度高，有关物质测定结果准确，重复性好，可用于维生素K1原料药样品的有关物质质量控制。附图说明图1维生素K1原料药有关物质测定的系统适用性图；图2维生素K1原料药有关物质测定的供试品溶液典型色谱图。具体实施方式以下通过实施例形式，对本专利技术涉及的维生素K1原料药有关物质测定方法作进一步的详细说明，但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。实施例1本专利技术测定方法的精密度研究试验(1)重复性取本品适量，照有关物质的试验方法测定本品的杂质含量，重复测定6次，考察方法的精密度。结果见下表1。表1供试品溶液重复性结果实验结果表明，重复测定6次，各杂质含量及总杂质含量的测定偏差均小于10％，方法的精密性较好。实施例2本专利技术测定方法的准确度研究试验(2)回收率取各已知杂质适量，按各杂质限度(甲萘醌0.2％，醋酸甲萘氢醌0.15％，维生素K12，3环氧化物杂质4.0％)的80％～120％比例，加入维生素K1原料中，以测得量扣除原维生素K1中上述已知杂质量后与加入的比值计算各杂质的回收率。结果见下表2-表4。表2甲萘醌的回收率试验表3醋酸甲萘氢醌的回收率试验表4维生素K12，3环氧化物杂质的回收率试验综上所述，各杂质平均回收率均在90％—110％之间，各已知杂质的回收率较好，方法的准确度较高。实施例3本专利技术测定方法的线性研究试验(3)线性取甲萘醌、醋酸甲萘氢醌、维生素K12，3环氧化物对照品适量，精密称定，分别加95％乙腈水溶解并稀释制成各杂质对照品母液，同时取维生素K1对照品适量，精密称定，先用1ml四氢呋喃助溶后用95％乙腈水稀释定容至刻度，制成主成分的对照品母液；分别从各杂质对照品母液以及主成分对照品母液中各分别精密移取1ml，3ml，5ml，7ml，10ml到100ml量瓶中，用95％乙腈水稀释定容至刻度，作为各梯度浓度溶液，依次精密量取50μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以各峰面积A为纵坐标，对应浓度C为横坐标，绘制各成分标准曲线，计算回归方程。结果见表5表5已知杂质的线性回归(4)样品测定避光操作，照高效液相色谱法(《中国药典》2015年版通则0512)测定以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(推荐使用色谱柱为Luna5μmC18(2)100A250*4.6mm或效能相当的色谱柱)，柱温：40℃；检测波长为254nm；以65％乙腈水为流动相A，以乙腈：四氢呋喃＝90：10为流动相B，总流速为1.0ml/min，梯度程序如下：...

【技术保护点】
1.一种测定维生素K1原料药有关物质的方法，其特征在于：/n避光操作，照高效液相色谱法(《中国药典》2015年版通则0512)测定/n以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(推荐使用色谱柱为

【技术特征摘要】
1.一种测定维生素K1原料药有关物质的方法，其特征在于：
避光操作，照高效液相色谱法(《中国药典》2015年版通则0512)测定
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(推荐使用色谱柱为Luna5μmC18(2)100A250*4.6mm或效能相当的色谱柱)，柱温：40℃；检测波长为254nm；以65％乙腈水为流动相A，以乙腈：四氢呋喃＝90：10为流动相B，总流速为1.0ml/min，梯度程序如下：













时间(min)
0
8
13
45
50
60


B相％
0
0
95
95
0
0






取甲萘醌对照品、维生素K12，3环氧化物对照品、中间体A((4-羟基-2-甲基萘-1-基)乙酸酯)对照品、醋酸甲萘氢醌对照品以及维生素K1对照品，用一定比例的四氢呋喃和95％乙腈水稀释每ml中含甲萘醌对照品、维生素K12，3环氧化物对照品、中间体A((4-羟基-2-甲基萘-1-基)乙酸酯)对照品、醋酸甲萘氢醌对照品以及维生素K1对照品分别为0.3μg、4μg、0.3μg...

【专利技术属性】
技术研发人员：何凌云，何凤琴，
申请(专利权)人：南京艾德凯腾生物医药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32