五味子药材及灯盏生脉胶囊的指纹图谱的建立方法技术

本发明专利技术提供了一种五味子药材及灯盏生脉胶囊的指纹图谱的建立方法，所述方法共分为五味子供试品处理、灯盏生脉供试品处理、对照品溶液制备、分别进行液相检测，所述液相条件为：流动相A为乙腈，流动相B为水，梯度洗脱：0～50min：35％→85％A，65％→15％B；柱温30‑40℃，检测波长：240‑260nm，流速：0.6‑1.5ml/min，通过指纹图谱比对，获得五味子药材与灯盏生脉胶囊的相关性，有利于产品的质控和追溯。

【技术实现步骤摘要】
五味子药材及灯盏生脉胶囊的指纹图谱的建立方法
本专利技术属于中药材及制剂检测领域，特别涉及一种五味子药材及其灯盏生脉胶囊中木脂素类指纹图谱的建立方法
技术介绍
五味子为木兰科植物五味子Schisandrachinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实，习称“北五味子”。有收敛固涩，益气生津，补肾宁心。用于久咳虚喘，梦遗滑精，遗尿尿频，久泻不止，自汗盗汗，津伤口渴，内热消渴，心悸失眠。五味子属木脂素类化合物是以1，2，3，4一联苯一1，3一环辛二烯为母核的木脂素，是五味子中最主要的药理活性成分，国内外学者已经从五味子属中分离得到的木脂素类单体化合物有150多种，具有多种药理活性：对肝脏的保护作用；对心血管保护作用；对中枢神经系统抑制作用；对神经元的保护作用；抗氧化；抗肿瘤；抗HIV；降血脂，增强记忆等。灯盏生脉胶囊是以灯盏细辛，五味子，人参，麦冬入药的一个复方中成药。以灯盏细辛为君药，配以生脉饮的方子。可益气养阴，活血健脑。用于气阴两虚，瘀阻脑络引起的胸痹心痛、中风后遗症，症见痴呆，健忘，手足麻木症，冠心病心绞痛，缺血性心脑血管疾病，高脂血症见上述证候者。五味子药材和灯盏生脉胶囊在临床上使用多年，且防治效果突出。但《中国药典》2015版只对五味子木脂素中的五味子醇甲含量进行控制，不能全面反映五味子中木脂素成分的质量情况，灯盏生脉胶囊中由于五味子非君药，其中有效成分群木脂素类是否能较好地提取并转移到成药中无法判断。因而无法全面反映灯盏生脉胶囊的质量情况。指纹图谱是一种可以一测多评的现代分析手段，能够较全面的反映复杂体系中成分群的关系。通过构建五味子药材中木脂素成分及灯盏生脉胶囊中木脂素成分的指纹图谱，可以较好地反映五味子药材中木脂素类成分的全貌，也可以较好地反映五味子中木脂素类成分转移至灯盏生脉胶囊中的情况。
技术实现思路
基于上述技术问题，本专利技术提供了一种五味子药材及灯盏生脉胶囊的指纹图谱的建立方法，所述建立方法包括以下步骤：(1)取五味子药材粉末精密称定，置于容器，加甲醇超声处理后，加甲醇补足，滤过，取续滤液，即得五味子药材供试液；(2)称取灯盏生脉胶囊的供试品内容物加入水溶解，经三氯甲烷萃取，萃取液浓缩，加入有机溶剂，过滤，即得灯盏生脉胶囊供试品；(3)取五味子醇甲对照品，精密称定，加入甲醇制得对照品溶液；(4)色谱条件，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相A为乙腈，流动相B为水，流动相A和流动相B为梯度洗脱，检测波长240-260nm，流速：0.6-1.5ml/min，柱温30-40℃；(5)分别精密吸取对照品溶液、五味子药材供试液和灯盏生脉胶囊供试品，注入液相色谱仪，测定，记录0-50分钟的色谱峰，分别得到五味子药材及灯盏生脉胶囊的木脂素类指纹图谱。申请人检索发现，在药典中，所有五味子药材及以五味子入药的成药中均以五味子醇甲作为含量指标。而均未对五味子药材及成药中五味子成分贡献进行指纹图谱测定及溯源。药典中测定五味子醇甲含量的HPLC方法所用的流动相包括了甲醇，乙腈，磷酸水等。测定含量时仅需要五味子醇甲的峰分离度足够即可，而测定五味子木脂素这一有效成分群时，需要多个峰均有好的分离度才行。由于五味子在不同的成药中地位不同，且成药过程的制备方法不同，因而其中五味子药材的贡献的检测方法也需要因品而定。从五味子药材到灯盏生脉胶囊的指纹图谱可追溯性成为质控的必须指标，但却是目前国内药典的技术空白。五味子药材中主要成分为木脂素成分，因而供试品的处理仅需要用纯甲醇超声处理即可将其中脂溶性较大的木脂素类成分萃取出来，以供测试；灯盏生脉胶囊由四味药材灯盏细辛，人参，麦冬，五味子，通过提取精制后，喷雾干燥获得喷干粉，填充成胶囊。其中五味子在灯盏生脉胶囊入药工艺是通过水煮后，弃去水溶性有机酸部分；用85％的乙醇回流提取，回流提取也浓缩后加水，用乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯萃取液浓缩后喷雾干燥入药。鉴于五味子在灯盏生脉胶囊中特殊提取性，灯盏生脉胶囊成分又比五味子药材成分复杂，且五味子在其中并非君药，含量较低，因此前处理采用将灯盏生脉内容物加入纯化水使其溶解，用三氯甲烷萃取，萃取液合并浓缩，加入既有一定水溶性又有一定脂溶性的溶剂于容量瓶。加入既有一定水溶性又有一定脂溶性的溶剂是基于木脂素类成分的脂溶性较强，要达到转移完全所必须；同时考虑又要有一定的水溶性则是基于用HPLC检测时对于C-18键合的色谱柱和流动相的考虑，需要有一定的水溶性。由于所设的检测波长在240-260nm，因而有些末端吸收的溶剂也不受影响，例如丙酮和N，N-二甲基甲酰胺。在上述的五味子药材及灯盏生脉胶囊的指纹图谱的建立方法中，所述步骤(1)的超声优选功率250W，频率20kHz，超声10-30分钟。在上述的五味子药材及灯盏生脉胶囊的指纹图谱的建立方法中，所述三氯甲烷萃取2-5次。在上述的五味子药材及灯盏生脉胶囊的指纹图谱的建立方法中，步骤(2)所述有机溶剂为丙酮、四氢呋喃或N，N-二甲基甲酰胺。在上述的五味子药材及灯盏生脉胶囊的指纹图谱的建立方法中，步骤(4)色谱条件，色谱柱为InertsilODS-3，5μm4.6×250mm或AgilentZORBAXSB-C18，5μm4.6×250mm，检测波长250nm，流速：0.8-1.2ml/min，其中流动相A与流动相B之间的比例为体积比：0min，流动相A：流动相B＝35％：65％；50min，流动相A：流动相B＝85％：15％。在上述的五味子药材及灯盏生脉胶囊的指纹图谱的建立方法中，所述色谱柱优选AgilentZORBAXSB-C18，5μm4.6×250mm。在上述的五味子药材及灯盏生脉胶囊的指纹图谱的建立方法中，所述五味子药材木脂素类指纹图谱包括顺序的11个共有峰，其中1号峰为五味子醇甲对照峰，各特征峰的相对保留时间为：1号峰，1.00±10％、2号峰，1.09±10％、3号峰，1.14±10％、4号峰，1.19±10％，5号峰，1.44±10％、6号峰，1.68±10％、7号峰，1.75±10％、8号峰，2.28±10％、9号峰，2.31±10％、10号峰，2.39±10％、11号峰，2.43±10％。所选择的11个共有峰指认了其中六个峰(1，3，4，5，8，11)，此六个峰是通过分离得到其中化合物，根据其核磁共振数据及其高分辨质谱数据鉴定，并且与文献对比后确定其结构，再通过对比高效液相图的保留时间和PDA图谱，以及加样回收等方法确定其名称。在上述的述的五味子药材及灯盏生脉胶囊中木脂素指纹图谱的建立方法中，所述五味子药材木脂素类指纹图谱包括指认的特征峰：1号峰为五味子醇甲，3号峰为戈米辛，4号峰为戈米辛A，5号峰为当归酰基戈米辛，8号峰为五味子甲素，11号峰为五味子乙素。在上述的五味子药材及灯盏生脉胶囊的指纹图谱的建立方法中，所述建立方法包括分析五味子药材的HPLC指纹图谱和灯盏生脉胶囊的HPLC指纹图谱相关性步骤，以五味子醇甲为对照峰，分别得出五味子药本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种五味子药材及灯盏生脉胶囊的指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述建立方法包括以下步骤：/n(1)取五味子药材粉末精密称定，置于容器，加甲醇超声处理后，加甲醇补足，滤过，取续滤液，即得五味子药材供试液；/n(2)称取灯盏生脉胶囊的供试品内容物加入水溶解，经三氯甲烷萃取，萃取液浓缩，加入有机溶剂，过滤，即得灯盏生脉胶囊供试品；/n(3)取五味子醇甲对照品，精密称定，加入甲醇制得对照品溶液；/n(4)色谱条件，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相A为乙腈，流动相B为水，流动相A和流动相B进行梯度洗脱，检测波长240-260nm，流速：0.6-1.5ml/min，柱温30-40℃；/n(5)分别精密吸取对照品溶液、五味子药材供试液和灯盏生脉胶囊供试品，注入液相色谱仪，测定，记录0-50分钟的色谱峰，分别得到五味子药材及灯盏生脉胶囊的木脂素类指纹图谱。/n

【技术特征摘要】
1.一种五味子药材及灯盏生脉胶囊的指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述建立方法包括以下步骤：
(1)取五味子药材粉末精密称定，置于容器，加甲醇超声处理后，加甲醇补足，滤过，取续滤液，即得五味子药材供试液；
(2)称取灯盏生脉胶囊的供试品内容物加入水溶解，经三氯甲烷萃取，萃取液浓缩，加入有机溶剂，过滤，即得灯盏生脉胶囊供试品；
(3)取五味子醇甲对照品，精密称定，加入甲醇制得对照品溶液；
(4)色谱条件，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相A为乙腈，流动相B为水，流动相A和流动相B进行梯度洗脱，检测波长240-260nm，流速：0.6-1.5ml/min，柱温30-40℃；
(5)分别精密吸取对照品溶液、五味子药材供试液和灯盏生脉胶囊供试品，注入液相色谱仪，测定，记录0-50分钟的色谱峰，分别得到五味子药材及灯盏生脉胶囊的木脂素类指纹图谱。


2.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述步骤(1)的超声优选功率250W，频率20kHz，超声10-30分钟，所述甲醇为纯甲醇。


3.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述三氯甲烷萃取2-5次。


4.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，步骤(2)所述有机溶剂为丙酮、四氢呋喃或N，N-二甲基甲酰胺。


5.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，步骤(4)色谱条件，色谱柱为InertsilODS-3，5μm4.6×250mm或AgilentZORBAXSB-C18，5μm4.6×250mm，检测波长250nm，流速：0.8-1.2ml/min，其中流动相A与流动相B之间的比例为体积比：0min，流动相A：流动相B＝35％：6...

【专利技术属性】
技术研发人员：林艳和，唐琼，涂栩秀，苏海霞，杜江，
申请(专利权)人：云南生物谷药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53