大黄*虫丸中水蛭检测及正伪品鉴定用试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种大黄䗪虫丸中水蛭检测及正伪品鉴定用试剂盒，包括2×Taq master Mix、无菌去离子水、引物LC01490和LC02198、引物COI924F和COI924R；通过大黄䗪虫丸中成药的DNA提取、COI通用引物对大黄䗪虫丸中成药DNA的PCR扩增、COI924引物对COI通用引物PCR产物进行二轮扩增、扩增产物琼脂糖凝胶电泳检测、扩增产物Sanger测序、对测序结果峰图采用seqman软件进行序列拼接，将拼接后的DNA序列在NCBI中用BLAST相似性搜索，同时与相似性搜索分值较高的水蛭品种进行单独COI序列的比对，完成大黄䗪虫丸中水蛭检测及正伪品鉴定。本发明专利技术试剂盒提高了PCR检测的敏感性和特异性，从而可以实现对多种正伪品水蛭的鉴定，为简便快速的方法，填补了大黄䗪虫丸水蛭成分质量控制的空白。

【技术实现步骤摘要】
大黄䗪虫丸中水蛭检测及正伪品鉴定用试剂盒
本专利技术属于大黄䗪虫丸中成药水蛭种属鉴定技术，更具体的说是采用大黄䗪虫丸中水蛭检测及正伪品鉴定用试剂盒对大黄䗪虫丸中成药的DNA进行扩增后，对扩增产物测序鉴定水蛭种属的一种方法。
技术介绍
大黄䗪虫丸是一种由熟大黄、土鳖虫、水蛭、虻虫、蛴螬（炒）、干漆、桃仁、苦杏仁、黄芩、地黄、白芍、甘草等按一定剂量混合而制成的处方药。其功能主治活血破瘀，通经消症瘕。用于瘀血内停所致的症瘕、闭经，盆腔包块、子宫内膜异位症、继发性不孕症，症见腹部肿块、肌肤甲错、面色黯黑、潮热羸瘦、经闭不行。水蛭作为大黄䗪虫丸臣药之一，其功能主治破血通经，逐瘀消症。用于血瘀经闭，症瘕痞块，中风偏瘫，跌扑损伤。迄今为止医学研究的水蛭越来越多，但是中国药典（2015版）收录的药用水蛭只有宽体金线蛭（Whitmaniapigra）、柳叶蚂蟥（Whitmaniaacranulata）和日本医蛭（Hirudonipponia）。近年来随着水蛭中药制剂的不断开发，水蛭已成为畅销中药材之一。随之而来的是水蛭伪品比如菲牛蛭、石蛭等在市场流通，急本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.大黄䗪虫丸中水蛭检测及正伪品鉴定用试剂盒，包括第一轮PCR扩增引物LC01490和LC02198、第二轮PCR扩增引物COI924F和COI924R。/n

【技术特征摘要】
1.大黄䗪虫丸中水蛭检测及正伪品鉴定用试剂盒，包括第一轮PCR扩增引物LC01490和LC02198、第二轮PCR扩增引物COI924F和COI924R。


2.根据权利要求1所述大黄䗪虫丸中水蛭检测及正伪品鉴定用试剂盒，其特征在于，LC01490为GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG；LC02198为TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA；COI924F为GCTAAAACTGGTAATGATAA；COI924R为TAATTGGTGGGTTTGGTAA。


3.根据权利要求1所述大黄䗪虫丸中水蛭检测及正伪品鉴定用试剂盒，其特征在于，所述大黄䗪虫丸中水蛭检测及正伪品鉴定用试剂盒还包括2×TaqmasterMix、无菌去离子水。


4.根据权利要求1所述大黄䗪虫丸中水蛭检测及正伪品鉴定用试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于大黄䗪虫丸中水蛭检测及正伪品鉴定时，采用两轮PCR反应，第一轮PCR扩增为25μL反应体系；第二轮PCR扩增为25μL反应体系；第一轮PCR扩增时，模板浓度为10-50ng/μL；第二轮PCR扩增时，第一轮PCR反应液为1μL。


5.根据权利要求4所述大黄䗪虫丸中水蛭检测及正伪品鉴定用试剂盒，其特征在于，第一轮PCR扩增的程序为94℃预变性5min，94℃变性1min，45℃退火1min30s，72℃延伸1min30s，循环5次；94℃变性1min，50℃退火1min30s，72℃延伸1min，循环40次；最后72℃延伸...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙万平，陶静，韩蓉，丁威，
申请(专利权)人：苏州普瑞姆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32