一种从大豆卵磷脂中提取分离α-GPC的方法技术

本发明专利技术属于甘油磷脂酰胆碱的制备技术领域，具体涉及一种从大豆卵磷脂中提取分离α‑GPC的方法，为提供一种适用于大规模生产α‑GPC的新工艺，提高α‑GPC的得率和转化率，并缩短其反应时间，本发明专利技术提供一种从大豆卵磷脂中提取分离α‑GPC的方法，将大豆卵磷脂添加到水‑有机溶剂混合体系中，然后加入氯化钴、氯化锰、磷脂酶A1、磷脂酶A2和脂肪酶Bakezyme LFP，混匀后置于多频超声‑微波协同处理下经反应后制备得到，α‑GPC得率和反应时间的统计实验表明，采用本发明专利技术方法制备α‑GPC，α‑GPC的得率和转化率均较高，而且反应时间短，可以大大缩短α‑GPC的提取时间，适用于大规模工业生产中。

【技术实现步骤摘要】
一种从大豆卵磷脂中提取分离α-GPC的方法
本专利技术属于甘油磷脂酰胆碱的制备
，具体涉及一种从大豆卵磷脂中提取分离α-GPC的方法。
技术介绍
α-甘油磷脂酰胆碱(α-Glycerylphosphorylcholine，α-GPC)又称甘油磷酸胆碱、甘磷酸胆碱，是动物体内天然存在的水溶性磷脂代谢产物，经口服后，能到达胆碱突触末梢并增加乙酰胆碱的合成和释放。α-GPC不仅可以作为保健品，促进大脑中乙酰胆碱和磷脂酰胆碱的生物合成，提高人的记忆能力和认知能力，也能有效治疗老年痴呆类疾病如阿尔茨海默病，被医药界称为“大脑的防衰老营养素”。α-GPC还可以保护肝脏，抵抗高脂蛋白的脂肪渗透，起到抗类风湿、抗高血脂和抗动脉硬化的作用。另外α-GPC在一定程度上能够增强人体肌肉力量，提高反应敏捷度。目前，国内外有关α-GPC的制备主要有直接萃取法、化学合成法和甲醇钠催化醇解法。随着生物酶技术在医药工业和食品工业中的广泛应用，近年来出现了酶法制备α-GPC。近年来，虽然α-GPC的制备取得了不错的进展，但目前国内有关α-GPC制备的技术均不是十分成熟，仍普遍存在α-GPC的得率和转化率低、反应时间长等缺陷，难以满足大规模生产α-GPC的要求。由于医药、食品、保健品等领域对α-GPC都具有很大的需求，并且在未来将有更大的市场。所以研发适用于大规模生产α-GPC的新工艺，提高α-GPC的得率，并缩短其反应时间具有重要的意义。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的不足，本专利技术所要解决的技术问题是提供一种从大豆卵磷脂中提取分离α-GPC的方法，该方法不仅可以提高α-GPC的得率和转化率，而且可以大大缩短α-GPC的提取时间，适用于大规模工业生产中。为实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案为：本专利技术提供一种从大豆卵磷脂中提取分离α-GPC的方法，包括以下步骤：S1、将大豆卵磷脂添加到水-有机溶剂混合体系中，经搅拌混匀后制备得到反应混合液A，所述有机溶剂为亲水性有机溶剂；S2、往反应混合液A中加入氯化钴和氯化锰，经均质处理后制备得到反应混合液B；S3、往反应混合液B中加入磷脂酶A1、磷脂酶A2和脂肪酶BakezymeLFP，经混匀后制备得到反应混合液C；S4、将反应混合液C的pH调节至6.0-7.0，然后将其置于多频超声-微波协同处理下进行反应，最后经分离得到α-GPC。大豆卵磷脂中含有疏水性的脂肪酸链和亲水基团(磷酸基、胆碱式乙醇胺)，将水相介质与亲水性有机溶剂混合，可以增加底物的溶解度，有利于反应的平衡向产物合成方向移动，不仅可以缩短反应的时间，而且可以提高α-GPC的得率；脂肪酶BakezymeLFP与磷脂酶A1、磷脂酶A2复配，可以提高脱酰基的效率，加快中间产物酰基转移的速率，从而缩短了反应体系所用的时间，并提高底物的利用率和产品的得率；氯化钴和氯化锰的加入可以提高酶的催化活性，加快反应的进度，从而缩短了反应体系所用的时间；采用多频超声-微波协同处理反应体系时，可以使体系迅速发生乳化，促进了底物的分散，迅速增大反应界面，从而促使反应速度加快，并提高α-GPC的得率。优选的，S1步骤中，所述有机溶剂在水-有机溶剂混合体系中的体积浓度为5％-20％。在该浓度范围的混合体系中，大豆卵磷脂可以得到充分的溶解，更有利于α-GPC的提取分离。优选的，S1步骤中，所述亲水性有机溶剂选自乙腈、丙酮、异丙醇、正丙醇、丙二醇和叔丁醇中的至少一种。上述亲水性有机溶剂均为低沸点有机溶剂，容易分离。优选的，S3步骤中，磷脂酶A1的添加量为10-13U/mL，磷脂酶A2的添加量为10-13U/mL，脂肪酶BakezymeLFP的添加量为5-10U/mL。在该酶浓度下，可以使底物(大豆卵磷脂)得到彻底的酶解分离。优选的，S4步骤中，多频超声-微波协同处理的温度为45-55℃，多频超声采用20/50kHz双频模式，超声功率为150-250W，超声的脉冲模式为10s，间隔5s，微波的功率为200-400W。在上述多频超声-微波协同处理条件下可以最大限度的增加底物的分散度，加快酶促反应的速度，缩短反应时间，节约生产成本。优选的，S2步骤中，氯化钴和氯化锰的添加量均为50-80ug/L。上述金属离子的添加可以加快酶促反应的速度，缩短反应时间，节约生产成本，并且所添加的金属离子均为人体所必需的微量元素，对人体无危害。优选的，S1步骤中，所述大豆卵磷脂在水-有机溶剂混合体系中的质量分数为10-20％。在该底物浓度下可以使α-GPC取得最佳的纯度和得率。优选的，为得到纯的α-GPC，S4步骤的反应结束后，反应混合液经旋转蒸发得到粗α-GPC，粗α-GPC经硅胶柱色谱纯化后得到纯α-GPC。优选的，为使大豆卵磷脂得到充分的溶解，S1步骤中，搅拌的速率为230-260r/min，时间为20-30min。优选的，为使金属离子均匀分散在底物中，S2步骤中，均质处理的转速为10000r/min，时间为3-7min。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术提供一种从大豆卵磷脂中提取分离α-GPC的方法，将大豆卵磷脂添加到水-有机溶剂混合体系中，然后加入氯化钴、氯化锰、磷脂酶A1、磷脂酶A2和脂肪酶BakezymeLFP，混匀后置于多频超声-微波协同处理下经反应后制备得到，α-GPC得率和反应时间的统计实验表明，采用本专利技术方法制备α-GPC，α-GPC的得率和转化率均较高，而且反应时间短，可以大大缩短α-GPC的提取时间，本专利技术α-GPC的得率为97.5％-98.7％，比现有技术(96.25％)提高1.30％-2.55％，α-GPC的转化率为86.7％-89.1％,比现有技术(70.65％)提高22.72％-26.11％，反应时间为50-60min，比现有技术(90min)缩短33.33％-44.44％。可见，本专利技术方法不仅可以提高α-GPC的得率和转化率，而且可以大大缩短α-GPC的提取时间，适用于大规模工业生产中。具体实施方式下面对本专利技术的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本专利技术，但并不构成对本专利技术的限定。此外，下面所描述的本专利技术各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。下述实验例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。实施例1一种从大豆卵磷脂中提取分离α-GPC的方法，包括以下步骤：S1、将大豆卵磷脂添加到水-异丙醇混合体系(异丙醇的体积浓度为12％)中，使大豆卵磷脂的质量分数为15％，以245r/min的速率搅拌混匀25min，制备得到反应混合液A；S2、往反应混合液A中加入氯化钴和氯化锰，氯化钴的添加量为225ug/L，氯化锰的添加量为225ug/L，以10000r/min的转速均质处理5min，制备得到反应混合液B；S3、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从大豆卵磷脂中提取分离α-GPC的方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、将大豆卵磷脂添加到水-有机溶剂混合体系中，经搅拌混匀后制备得到反应混合液A，所述有机溶剂为亲水性有机溶剂；/nS2、往反应混合液A中加入氯化钴和氯化锰，经均质处理后制备得到反应混合液B；/nS3、往反应混合液B中加入磷脂酶A1、磷脂酶A2和脂肪酶Bakezyme LFP，经混匀后制备得到反应混合液C；/nS4、将反应混合液C的pH调节至6.0-7.0，然后将其置于多频超声-微波协同处理下进行反应，最后经分离得到α-GPC。/n

【技术特征摘要】
1.一种从大豆卵磷脂中提取分离α-GPC的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将大豆卵磷脂添加到水-有机溶剂混合体系中，经搅拌混匀后制备得到反应混合液A，所述有机溶剂为亲水性有机溶剂；
S2、往反应混合液A中加入氯化钴和氯化锰，经均质处理后制备得到反应混合液B；
S3、往反应混合液B中加入磷脂酶A1、磷脂酶A2和脂肪酶BakezymeLFP，经混匀后制备得到反应混合液C；
S4、将反应混合液C的pH调节至6.0-7.0，然后将其置于多频超声-微波协同处理下进行反应，最后经分离得到α-GPC。


2.根据权利要求1所述的一种从大豆卵磷脂中提取分离α-GPC的方法，其特征在于，S1步骤中，所述有机溶剂在水-有机溶剂混合体系中的体积浓度为5％-20％。


3.根据权利要求1所述的一种从大豆卵磷脂中提取分离α-GPC的方法，其特征在于，S1步骤中，所述亲水性有机溶剂选自乙腈、丙酮、异丙醇、正丙醇、丙二醇和叔丁醇中的至少一种。


4.根据权利要求1所述的一种从大豆卵磷脂中提取分离α-GPC的方法，其特征在于，S3步骤中，磷脂酶A1的添加量为10-13U/mL，磷脂酶A2的添加量为10-13U/mL，脂肪酶BakezymeLFP的添加量为5-10U/mL。


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【专利技术属性】
技术研发人员：赵勇彪，李佳莲，危志刚，易娜，
申请(专利权)人：湖南中茂生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43