一种利用固定化微球生产γ-氨基丁酸的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用固定化微球生产γ‑氨基丁酸的方法，具体涉及从L.plantarum Yll.03染色体基因组中克隆得到目的基因gadB，构建重组载体，并将该重组载体电击转入如乳酸乳球菌细胞中，用于重组GAD的表达及获取；以结冷胶为材料，利用固定化酶技术实现GAD的包埋；最终，将固定化微球投入米醋和味精混合液中，用于催化生成GABA。

A method of producing \u03b3 - aminobutyric acid by immobilized microspheres

【技术实现步骤摘要】
一种利用固定化微球生产γ-氨基丁酸的方法
本专利技术属于微生物发酵与固定化酶领域，涉及一种利用固定化微球生产γ-氨基丁酸的方法。
技术介绍
γ-氨基丁酸(γ-aminobutyricacid，GABA)是一种在动物、植物及微生物体内广泛存在的非蛋白质氨基酸，又称氨酪酸、哌啶酸。GABA是哺乳动物体内主要的抑制性神经递质，具有延缓大脑衰老、降血压、治疗神经疾病、抗心律失常等多种生理功能；且在改善糖尿病人的生理状况、改善脂质代谢、防止动脉硬化、改善肝肾机能和抑制癌细胞生长等方面展现出较高的功能价值；因而，在食品、医药及化工等领域具有广阔的应用前景。目前，GABA的制备方法主要有化学合成法和生物合成法两大类。化学合成法反应速度快、产量高，但其普遍存在能耗高、反应条件苛刻、副产物多以及环境污染大等问题；且所制备的GABA不能用于食品工业和饲料领域，应用范围较窄。生物合成法由细胞中谷氨酸脱羧酶(GAD)所介导，其催化L-谷氨酸脱羧生成GABA。研究显示，GAD广泛存在于细菌、酵母和丝状真菌等各种微生物中。利用GAD或含有GAD的微生物转化制备GA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生产γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，包括步骤：/n1)构建含谷氨酸脱羧酶基因的重组菌株，诱导表达谷氨酸脱羧酶；/n2)分离纯化表达的谷氨酸脱羧酶；/n3)制备谷氨酸脱羧酶的固定化微球；/n4)使用固定化微球催化谷氨酸钠产生γ-氨基丁酸。/n

【技术特征摘要】
1.一种生产γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，包括步骤：
1)构建含谷氨酸脱羧酶基因的重组菌株，诱导表达谷氨酸脱羧酶；
2)分离纯化表达的谷氨酸脱羧酶；
3)制备谷氨酸脱羧酶的固定化微球；
4)使用固定化微球催化谷氨酸钠产生γ-氨基丁酸。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中重组菌株的构建包括：
1)将植物乳杆菌的谷氨酸脱羧酶基因连接至载体上，构建重组质粒；
2)将重组质粒转染到乳酸乳球菌中，构建重组菌株；
优选的，1)中所述的载体为pNZ8148；优选的，2)中所述的乳酸乳球菌为LactococcuslactisNZ9000；更为优选的，构建重组质粒的引物序列如SEQIDNO.1～2所示。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中采用nisin进行诱导表达，优选的，nisin的终浓度为10ng/mL。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中分离纯化步骤包括：
1)离心收获菌体细胞；
2)超声破碎菌体细胞；
3)收获细胞破碎上清液；
4)采用Ni-NTA亲和层析分离纯化谷氨酸脱羧酶；
优选的，超声条件为：功率400W，工作3s，间歇6s，超声30min。


5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹宏伟，姚丽莉，李钰昌，郭德轩，
申请(专利权)人：黑龙江八一农垦大学，
类型：发明
国别省市：黑龙;23