一种Actin内参基因高灵敏检测方法及试剂盒技术

本发明专利技术提供了定量PCR扩增人Actin基因的引物对、探针及包含所述引物对和探针的试剂盒。本发明专利技术的引物对、探针和包含所述引物对和/或探针的试剂盒在定量PCR检测Actin基因中的重复性好，灵敏度高，特异性好，能够区分基因组中的Actin基因和其假基因，而且对人源Actin基因具有检测的通用性，为检测其他功能性基因的相对定量或绝对定量提供可靠地基础。

【技术实现步骤摘要】
一种Actin内参基因高灵敏检测方法及试剂盒
本专利技术属于分子生物学
，具体地，涉及一种Actin内参基因高灵敏检测方法及试剂盒。
技术介绍
荧光定量PCR(real-timePCR)因其对核酸分子定量准确、特异性高、灵敏度高和重复性好的特点，已成为定量分析基因表达水平最广泛使用的的技术之一。该技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时,探针结合在DNA任意一条单链上；PCR扩增时，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。或者使用荧光染料SYBR，SYBR可以结合到双链DNA上面，当体系中的模板被本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.引物对，其包含如下的4个引物对中的任意一个、两个、三个活或四个：/n引物对1，SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物对/n引物对2，SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的引物对/n引物对3，SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的引物对；和/n引物对4，SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的引物对。/n

【技术特征摘要】
1.引物对，其包含如下的4个引物对中的任意一个、两个、三个活或四个：
引物对1，SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示的引物对
引物对2，SEQIDNO:3和SEQIDNO:4所示的引物对
引物对3，SEQIDNO:5和SEQIDNO:6所示的引物对；和
引物对4，SEQIDNO:7和SEQIDNO:8所示的引物对。


2.探针，其包含如下的2个探针中的任意一个、两个或三个：
探针A，其核酸序列如SEQIDNO:9所示
探针B，其核酸序列如SEQIDNO:10所示；和
探针C，其核酸序列如SEQIDNO:11所示。


3.根据权利要求2所述的探针，其中，所述探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团；
优选地，所述荧光报告基团选自FAM、Hex、VIC、ROX和Cy5；
更优选地，所述荧光报告基团选自Hex；
优选地，所述荧光淬灭基团选自BHQ1、TAMRA、JOE、BHQ2、BHQ3和MGB；
更优选地，所述荧光淬灭基团选自MGB。


4.一种试剂盒，其包含权利要求1所述的引物对，和/或权利要求2至3中任一权利要求所述的探针。


5.根据权利要求4所述的试剂盒，其包含：
引物对1和探针A；
和/或
引物对2和探针A；
和/或
引物对3和探针A；
和/或
引物对4和探针C；
优选地，所述试剂盒还包含PCR反应所需的试剂，例如Mg2+、反应缓冲液、dNTP和Taq酶。


6.一种特异性检测人源a...

【专利技术属性】
技术研发人员：金华君，郝方元，张喜艳，经荧萍，刘相岑，钱其军，
申请(专利权)人：上海细胞治疗集团有限公司，上海细胞治疗研究院，
类型：发明
国别省市：上海;31