一种胞内PB基因残留检测的方法及检测试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种引物对组合，包括引物对1和选自引物对2、3和4中的任意一个、两个或三个；本发明专利技术还提供了探针或探针组合以及包含前述引物对组合和/或探针或探针组合的试剂盒；本发明专利技术还提供了一种测定CAR质粒拷贝数的方法和一种对CAR质粒残留进行质量控制的方法。本发明专利技术提供的引物对组合、探针或探针组合和试剂盒操作方便，特异性好，灵敏性高，反应效率高，反应体系可重复性好，能够用于含PB基因的CAR质粒拷贝数的定量检测或者CAR‑T细胞回输治疗患者外周血细胞中含有PB基因的CAR质粒的残留水平的定量检测。

【技术实现步骤摘要】
一种胞内PB基因残留检测的方法及检测试剂盒
本专利技术属于生物
，具体的，涉及一种胞内PB基因残留检测的方法及检测试剂盒。
技术介绍
嵌合抗原受体T细胞(ChimericAntigenReceptorT-Cell，CAR-T)免疫疗法是目前肿瘤治疗领域中极具前景的方法之一，其在血液肿瘤的治疗中疗效显著。CAR-T是利用基因编辑技术，使T细胞表达肿瘤特异性嵌合抗原受体，以非主要组织相容性复合体(MHC)限制的方式结合肿瘤抗原，对肿瘤起到杀伤作用。CAR的结构主要包括四部分：细胞外的抗体单链可变区(可特异性结合肿瘤相关抗原)，胞外铰链区，跨膜结合区和活化T细胞的胞内信号区。目前CAR已经发展到第三代CAR，通过增加了多种不同的信号分子结构提高了T细胞的细胞毒性、体内增值活性、持续存活时间和增加细胞因子释放功能。与普通的免疫细胞治疗相比，CAR-T技术具有许多独特的优势，如CAR不需要经过APC，能非MHC依赖性识别肿瘤抗原；肿瘤表面蛋白类和脂类抗原都可以作为靶点；有共刺激分子，能有效增强T细胞增殖。目前，CAR-T免疫治疗已在许多临床本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.引物对组合，其包含以下引物对中的引物对1和选自引物对2、3和4中的任意一个、两个或三个：/n引物对1，SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物对；/n引物对2，SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7所示的引物对；/n引物对3，SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示的引物对；/n引物对4，SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11所示的引物对。/n

【技术特征摘要】
1.引物对组合，其包含以下引物对中的引物对1和选自引物对2、3和4中的任意一个、两个或三个：
引物对1，SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示的引物对；
引物对2，SEQIDNO:6和SEQIDNO:7所示的引物对；
引物对3，SEQIDNO:8和SEQIDNO:9所示的引物对；
引物对4，SEQIDNO:10和SEQIDNO:11所示的引物对。


2.探针或探针组合，其包含以下探针中的任意一个、两个或三个：
探针A，其核酸序列如SEQIDNO:3所示；
探针B，其核酸序列如SEQIDNO:4所示；
探针C，其核酸序列如SEQIDNO：5所示。


3.根据权利要求2所述的探针或探针组合，其中，所述探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团；优选地，所述荧光报告基团选自FAM、Hex、VIC、ROX和Cy5；优选地，所述荧光淬灭基团选自BHQ1、TAMRA、JOE、BHQ2和BHQ3。


4.根据权利要求2或3所述的探针或探针组合，其中，
探针A和/或探针B中的一个或多个位置的碱基被锁核酸修饰。


5.根据权利要求4所述的探针或探针组合，其中，
探针A的5’端起第4位、第7位、和第10位中的任意1个、2个、或3个碱基被锁核酸修饰。


6.一种试剂盒，其包含权利要求1所述的引物对组合，和/或权利要求2至5中任一权利要求所述的探针或探针组合。


7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，其还包含PCR反应所需的试剂，优选地，所述PCR反应所需的试剂选自Mg2+、反应缓冲液、dNTP和DNA聚合酶中的一种或多种。


8.一种测定C...

【专利技术属性】
技术研发人员：金华君，郝方元，张喜艳，经荧萍，刘相岑，钱其军，
申请(专利权)人：上海细胞治疗集团有限公司，上海细胞治疗研究院，
类型：发明
国别省市：上海;31