酰化GLP-1化合物及其修饰基团的合成制造技术

本发明专利技术涉及一种酰化GLP‑1化合物及其修饰基团的合成，一种酰化GLP‑1化合物及其修饰基团的合成，其特征在于，包括如下步骤：制备化合物2：将GLP‑1(9‑37)为起始原料，用化合物1在相对序列GLP‑1(9‑37)的位置26的Lys上进行PEG化修饰，并控制反应pH，进行酰化偶联反应得到化合物2；制备化合物4：以化合物2为起始原料，用化合物3进行GLP‑1(9‑37)端位氨基的修饰，并与反应缩合剂、碱进行液相酰化偶联反应得到化合物4；制备Semaglutide：以化合物4为起始原料，进行脱保护到最终的索玛鲁肽；本发明专利技术操作过程简便，副反应减少，大大降低了氨基酸化合物发生消旋的风险，具有广泛的应用前景，便于用于大规模生产。

【技术实现步骤摘要】
酰化GLP-1化合物及其修饰基团的合成
本专利技术涉及一种酰化GLP-1化合物及其修饰基团的合成，属于化学合成领域。
技术介绍
索玛鲁肽(Semaglutide)是诺和诺德(NovoNordisk)公司研发的一种可以每周一次皮下注射的长效GLP-1类似物。从结构上看，索玛鲁肽是GLP-1(7-37)链上8位的Aib取代了Ala，34为的Arg取代了Lys，26位的Lys接上十八烷酸脂肪链。与利拉鲁肽相比，索玛鲁肽的脂肪链更长，疏水性增加。通过短链的聚乙二醇(PEG)修饰，大大增强了索玛鲁肽的亲水性。PEG修饰后不但可以与白蛋白紧密结合，掩盖DPP-4酶水解位点，还能降低肾排泄，可延长生物半衰期，达到长循环的效果。PEG是最常用的一种修饰剂，无毒、无致畸性、无免疫原性、具有非常好的水溶性和生物相容性，且生物相容性已获FDA认可。根据报道，单用索玛鲁肽没有发生严重的低血糖，低血糖发生率跟安慰剂相当，与磺脲类药物或胰岛素合用时低血糖风险会增加，可能需要降低磺脲类药物或胰岛素的剂量。此外，索玛鲁肽与利拉鲁肽类似，在心血管方面也有获益，通过两年治疗，跟安慰剂组相比，心血管高风险2型糖尿病患者主要不良心血管事件减少了26％。目前已报道的索玛鲁肽的制备方法大致可以分为三种：第一种为片段法合成索玛鲁肽。该方法浪费原料，所得反应中间体的需要纯化，并且建立一定的质量标准，由于步骤增多、纯化和检测繁琐等原因，导致最终合成成本增加；第二种为将修饰后的赖氨酸接入索玛鲁肽主链，该方法缺陷在于反应不完全、活性差、生产成本高，需多步纯化等；第三种为完成索玛鲁肽主链合成后进一步完成侧链修饰，该方法很容易产生消旋的组氨酸，作为索玛鲁肽末端结构的组氨酸在后期多步侧链缩合过程中不断消旋，导致最终产品中消旋杂质越来越多，不利于放大和工业生产。因此，现在急需一种操作简便，能够高纯度、高收率、合成成本低的索玛鲁肽及其侧链的合成方法。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术中存在的不足，提供了一种酰化GLP-1化合物及其修饰基团的合成，通过控制pH值酰化GLP-1(9-37)进行制备索玛鲁肽的合成方法，以解决现有技术中存在的问题。一种酰化GLP-1化合物及其修饰基团的合成，包括如下步骤：(1)制备化合物2：将GLP-1(9-37)为起始原料，用化合物1在相对序列GLP-1(9-37)的位置26的Lys上进行PEG化修饰，并控制反应pH，进行酰化偶联反应得到化合物2；(2)制备化合物4：以化合物2为起始原料，用化合物3进行GLP-1(9-37)端位氨基的修饰，并与反应缩合剂、碱进行液相酰化偶联反应得到化合物4；(3)制备Semaglutide：以化合物4为起始原料，进行脱保护到最终的索玛鲁肽；作为本专利技术的一种改进，所述化合物1的合成方法包括以下步骤：以2-氯三苯基氯树脂、Fmoc-AEEA-OH以及碱为起始原料，进行偶联和脱保护；再与Fmoc-AEEA-OH进行偶联和脱保护；再与Fmoc-Glu(OH)-OtBu进行偶联和脱保护；最后与十八烷二酸单叔丁酯进行偶联至固相合成结束；用对2-氯三苯基氯树脂进行裂解得到化合物5，将化合物5进行活化得到化合物6，然后水解酯得到修饰GLP-1(9-37)的位置26的脂肪酸链，即可得到化合物1，作为本专利技术的一种改进，所述化合物3的合成方法包括以下步骤：以保护过的His和Aib以及碱的酯为起始原料，进行液相偶联，然后水解酯得到修饰GLP-1(9-37)端位氨基的寡肽，即可得到化合物3，作为本专利技术的一种改进，所述步骤(1)中反应的pH值为7-13。作为本专利技术的一种改进，所述步骤(1)中控制pH值所用的试剂为三乙胺/水体系、N，N’-二异丙基乙胺/水体系、磷酸/三乙胺/水体系、磷酸氢二钠/磷酸二氢钠水体系或磷酸氢二钾/磷酸二氢钾水体系。作为本专利技术的一种改进，所述偶联试剂为DCC、EDCI、CDI、HATU、HBTU、TBTU、PyBOP、DIC、DCC/HOBt、EDCI/HOBt或DIC/HOBt。作为本专利技术的一种改进，所述碱为有机碱或无机碱，所述有机碱为三乙胺、N，N’-二异丙基乙胺、N-甲基吗啉、4-二甲氨基吡啶、2，6-二甲吡啶、四甲基乙二胺、1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯、吡啶、哌啶、苯胺或三异丙胺；所述无机碱为碳酸钾、甲醇钠、氢氧化钠、氢氧化锂、碳酸铯、氢氧化钾、叔丁醇钾、氢化钠或氟化钾。作为本专利技术的一种改进，所述脱保护试剂为三氟乙酸、三氟乙醇、苯甲硫醚、苯甲醚、苯酚、1，2-乙二硫醇、水以及三异丙基硅烷中任意一种及以上的组合。作为本专利技术的一种改进，所述水解酯为三氟乙酸、盐酸、氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾或叔丁醇钾。作为本专利技术的一种改进，所述反应温度为-10℃-50℃。本专利技术提供了通过控制pH值酰化GLP-1(9-37)进行制备索玛鲁肽的合成方法。本专利技术以GLP-1(9-37)为起始原料，用化合物1进行修饰26位Lys，并控制反应pH值进行酰化偶联反应，大大提高了合成效率，降低了反应副产物。本专利技术还以化合物1修饰过的GLP-1(9-37)为起始原料，用化合物3进行端位氨基的修饰，通过控制反应碱的用量进行液相酰化偶联反应，然后再进行脱保护得到最终的索玛鲁肽。该操作过程简便，副反应减少，大大降低了氨基酸化合物发生消旋的风险，具有广泛的应用前景，便于用于大规模生产。本专利技术所用术语氨基酸和等同表达是指通常在天然存在的蛋白质中发现的L-氨基酸以及部分非天然氨基酸。天然氨基酸的实例包括但不限于丙氨酸(Ala)，半胱氨酸(Cys)，天冬氨酸(Asp)，谷氨酸(Glu)，苯丙氨酸(Phe)，甘氨酸(Gly)，组氨酸(His)，异亮氨酸(Ile)，赖氨酸(Lys)，亮氨酸(Leu)，甲硫氨酸(Met)，天冬酰胺(Asn)，脯氨酸(Pro)，谷氨酰胺(Gln)，精氨酸(Arg)，丝氨酸(Ser)，苏氨酸(Thr)，色氨酸(Trp)，酪氨酸(Tyr)，缬氨酸(Val)。非天然氨基酸的实例包括但不限于2-氨基异丁酸(Aib)等。本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现，包括如下步骤：步骤1：取Fmoc-AEEA-OH采用固相合成法与2-氯三苯基氯树脂，获得AEEA-树脂，采用顺序偶联的方法合成化合物5，再进行脱保护偶联直至固相合成结束，然后进行裂解、纯化。步骤2：取步骤1制得的化合物5进行活化得到化合物6然后水解得到修饰GLP-1(9-37)的位置26的脂肪酸链----化合物1。步骤3：取步骤2制得的化合物1对GLP-1(9-37)进行26位Lys的修饰，并控制反应pH值，进行酰化偶联反应得到化合物2。步骤4：取保护过的His和Aib的酯为起始原料，进行液相偶联，重结晶得到二肽的酯。步骤5：取步骤4制得的二肽的酯进行水解，得到修饰GLP-1(9-37)端位氨基的寡肽----化合物3。步骤6：取步骤3制得的化合物2与步骤5制得的化合物3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种酰化GLP-1化合物及其修饰基团的合成，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)制备化合物2：将GLP-1(9-37)为起始原料，用化合物1在相对序列GLP-1(9-37)的位置26的Lys上进行PEG化修饰，并控制反应pH，进行酰化偶联反应得到化合物2；/n(2)制备化合物4：以化合物2为起始原料，用化合物3进行GLP-1(9-37)端位氨基的修饰，并与反应缩合剂、碱进行液相酰化偶联反应得到化合物4；/n(3)制备Semaglutide：以化合物4为起始原料，进行脱保护到最终的索玛鲁肽；/n

【技术特征摘要】
1.一种酰化GLP-1化合物及其修饰基团的合成，其特征在于，包括如下步骤：
(1)制备化合物2：将GLP-1(9-37)为起始原料，用化合物1在相对序列GLP-1(9-37)的位置26的Lys上进行PEG化修饰，并控制反应pH，进行酰化偶联反应得到化合物2；
(2)制备化合物4：以化合物2为起始原料，用化合物3进行GLP-1(9-37)端位氨基的修饰，并与反应缩合剂、碱进行液相酰化偶联反应得到化合物4；
(3)制备Semaglutide：以化合物4为起始原料，进行脱保护到最终的索玛鲁肽；





2.根据权利要求1所述的一种酰化GLP-1化合物及其修饰基团的合成，其特征在于，所述化合物1的合成方法包括以下步骤：以2-氯三苯基氯树脂、Fmoc-AEEA-0H以及碱为起始原料，进行偶联和脱保护；再与Fmoc-AEEA-0H进行偶联和脱保护；再与Fmoc-Glu(OH)-OtBu进行偶联和脱保护；最后与十八烷二酸单叔丁酯进行偶联至固相合成结束；用对2-氯三苯基氯树脂进行裂解得到化合物5，将化合物5进行活化得到化合物6，然后水解酯得到修饰GLP-1(9-37)的位置26的脂肪酸链，即可得到化合物1，





3.根据权利要求1所述的一种酰化GLP-1化合物及其修饰基团的合成，其特征在于，所述化合物3的合成方法包括以下步骤：以保护过的His和Aib以及碱的酯为起始原料，进行液相偶联，然后水解酯得到修饰GLP-1(9-37)端位氨基的寡肽，即可得到化合物3，





4.根据权利要求1所述的一种酰化GLP-1化合物及其修饰基团的合成，其特征在于：所述步骤(1)...

【专利技术属性】
技术研发人员：辛中帅，王琦芳，文良柱，钟远广，张先勇，李夷平，
申请(专利权)人：万新医药科技苏州有限公司，江苏万邦医药科技有限公司，江苏万邦生化医药集团有限责任公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32