诸葛菜种子提取的生物碱类化合物及其提取方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种诸葛菜种子提取的生物碱类化合物及其提取方法与应用。该生物碱类化合物是从诸葛菜的种子中提取得到，化学结构式如式(1)所示：

【技术实现步骤摘要】
诸葛菜种子提取的生物碱类化合物及其提取方法与应用
本专利技术涉及天然药物化学
，特别是涉及一种从诸葛菜种子中提取出的生物碱类化合物及其提取方法与应用。
技术介绍
诸葛菜(Orychophragmusviolaceus(L.)O.E.Schulz)是十字花科(Brassicaceae)诸葛菜属植物，一年生或越年生草本植物，主要分布在亚洲中部及东部，在我国分布广泛，别名二月兰。诸葛菜作为一种历史悠久的民间用药，具有抑制肿瘤、抗菌消炎、保护肝脏等生理活性。祖国医学对其药性疗效自古就有记载：“性温、味辛、苦、甘，入胃经”。《药性论》中论述到该植物具有温脾开胃、消食、下气及利小便等功效。现代临床试验证实，诸葛菜可治疗黄疸、乳痈、热毒风肿、疱痈疥肿等病症，且效果甚佳，此外，诸葛菜还有抑菌作用，对多种病菌，如细菌、真菌及寄生虫等均具有抑制作用。国内外对诸葛菜已有的研究报道表明，诸葛菜种子中含有多种生物活性成分，包括生物碱类、黄酮类、酚酸类、三萜皂苷、挥发油、多糖、氨基酸等，具有多种药理活性，包括抗氧化、抗肿瘤、抗急性肝损伤以及细胞保护作用等。其中生物碱类是诸葛菜种子中一大类活性成分，目前已报道的已经确定化学结构的生物碱类成分有OrychophraginesA-C(见式Ⅰ中的化合物A、B、C)，OrychophragmuspineA-I(见式Ⅰ中的化合物1-9)。目前从诸葛菜种子中分离出来的化合物大多数是已知的，且结构系统性较低(结构系统性是指一种植物中每一类化合物都不仅仅只有几个，而是应该呈现系统性，数目多，系统性低是指每一类成分都只有几个，不成系统)。说明该植物中大量的化合物还未得到分离和鉴定，反映出该植物还未得到充分的开发和利用，因此对诸葛菜中新化合物的分离和开发是亟需的。目前有从诸葛菜中提取生物碱的报道，如公开号为CN108261435A的专利技术专利申请公开了一种诸葛菜生物碱类提取物及其在制备保肝制品中的应用，提取对象为诸葛菜全草，分离得到的生物碱类骨架类型为环肽类生物碱，提取工艺为先用0-60％乙醇回流提取，然后通过大孔吸附树脂进行粗分离，即得到所述生物碱类成分，是混合物，不是纯净的化合物。
技术实现思路
本专利技术的目的，第一方面，是提供一种从诸葛菜种子中提取出的生物碱类化合物，是从诸葛菜的种子中提取得到，分子式为C16H18O4N6，命名为诸葛菜碱D，化学结构式如式(1)所示：进一步，还包括式(1)所示生物碱类化合物其衍生物和其药学上可接受的盐。其提取过程包括依次进行的乙醇水回流提取、正丁醇萃取、层析和半制备高效液相色谱等；优选的，所述层析为依次进行的硅胶柱层析、ODS柱层析和SephadexLH-20层析。所述SephadexLH-20层析中使用三氯甲烷、乙酸乙酯和甲醇的溶剂系统进行洗脱；进一步的，三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇的体积比为(1-5)：(1-5)：(1-5)，优选(1-3)：(1-3)：(1-3)，更优选(1-2)：(1-2)：(1-2)，更优选1︰1︰1。所述乙醇水回流提取具体为：取干燥的诸葛菜种子(含水量1-10％，优选3-8％，更优选4-6％，最优选5％)，采用乙醇水混合溶剂(其中乙醇和水的体积比为(1-10)：(1-10)，优选(3-9)：(1-7)，更优选(5-8)：(2-5)，最优选70︰30)在65-90℃(优选70-85℃，更优选75-80℃，最优选78℃)下回流提取0.5-5h(优选1-4h，更优选1.5-3h，最优选2h)，减压浓缩至无乙醇，放至室温，得回流提取液备用；种子与混合溶剂的加入质量比为(1-6)：(1-6)，优选(1-4)：(2-6)，更优选(1-2)：(4-6)，最优选1︰6)。所述正丁醇萃取具体为：将乙醇水回流提取得到的回流提取液用正丁醇反复萃取(回流提取液与正丁醇的混合比例为(1-5)：(1-5)，优选(1-3)：(1-3)，更优选(1-2)：(1-2)，最优选1︰1，一般萃取5-8次)，减压回收正丁醇至压力为-0.1MPa、50℃下没有正丁醇产出，得到正丁醇萃取物。所述硅胶柱层析具体为：将正丁醇萃取得到的正丁醇萃取物经硅胶柱层析，依次用三氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到若干洗脱部位，经薄层色谱检测，乙醇-浓硫酸加热显色，合并薄层色谱中显色比移值相同的洗脱部位，将合并后的洗脱部位经减压浓缩，得到一次柱层析分离物。所述ODS柱层析具体为：将硅胶柱层析得到的一次柱层析分离物经ODS(十八烷基硅烷键合硅胶)柱层析分离，采用甲醇-水梯度洗脱，得到若干洗脱部位，经薄层色谱检测，乙醇-浓硫酸加热显色，合并薄层色谱中显色比移值相同的洗脱部位，将合并后的洗脱部位经减压浓缩，得到二次柱层析分离物。所述SephadexLH-20层析具体为：将ODS柱层析得到的二次柱层析分离物经SephadexLH-20(羟丙基葡聚糖凝胶)层析，采用三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(体积比为(1-5)：(1-5)：(1-5)，优选(1-3)：(1-3)：(1-3)，更优选(1-2)：(1-2)：(1-2)，更优选1︰1︰1)溶剂系统洗脱，得到若干洗脱部位，经薄层色谱检测，乙醇-浓硫酸加热显色，合并薄层色谱中显色比移值相同的洗脱部位，将合并后的洗脱部位经减压浓缩，得到三次柱层析分离物。所述半制备高效液相色谱具体为：将SephadexLH-20层析得到的三次柱层析分离物进行半制备高效液相色谱分离，以甲醇-水作为流动相进行洗脱，收集电脑显示器显示出峰时的洗脱液，经减压浓缩，得到所述生物类碱化合物，所述生物碱类化合物为黄色粉末。第二方面，提供一种上述生物碱类化合物的提取方法，包括依次进行的乙醇水回流提取、正丁醇萃取、层析和半制备高效液相色谱等；优选的，所述层析为依次进行的硅胶柱层析、ODS柱层析和SephadexLH-20层析；更优选的，所述SephadexLH-20层析中使用三氯甲烷、乙酸乙酯和甲醇的溶剂系统进行洗脱；其中，三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇的体积比为(1-5)：(1-5)：(1-5)，优选(1-3)：(1-3)：(1-3)，更优选(1-2)：(1-2)：(1-2)，更优选1︰1︰1。所述乙醇水回流提取具体为：取干燥的诸葛菜种子(含水量1-10％，优选3-8％，更优选4-6％，最优选5％)，采用乙醇水混合溶剂(其中乙醇和水的体积比为(1-10)：(1-10)，优选(3-9)：(1-7)，更优选(5-8)：(2-5)，最优选70︰30)在65-90℃(优选70-85℃，更优选75-80℃，最优选78℃)下回流提取0.5-5h(优选1-4h，更优选1.5-3h，最优选2h)，减压浓缩至无乙醇，放至室温，得回流提取液备用；种子与混合溶剂的加入质量比为(1-6)：(1-6)，优选(1-4)：(2-6)，更优选(1-2)：(4-6)，最优选1︰6)。所述正丁醇萃取具体为：将乙醇水回流提取得到的回流提取液用正丁醇反复萃取(回流提取液与正丁醇的混合比例为(1-5)：(1-5)，优选(1-3)：(1-3)，更优选(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种诸葛菜种子提取的生物碱类化合物，其特征在于，是从诸葛菜的种子中提取得到，分子式为C

【技术特征摘要】
20181228 CN 20181162132031.一种诸葛菜种子提取的生物碱类化合物，其特征在于，是从诸葛菜的种子中提取得到，分子式为C16H18O4N6，命名为诸葛菜碱D，化学结构式如式(1)所示：



进一步，还包括式(1)所示生物碱类化合物其衍生物和其药学上可接受的盐。


2.根据权利要求1所述生物碱类化合物，其特征在于，其提取过程包括依次进行的乙醇水回流提取、正丁醇萃取、层析和半制备高效液相色谱等；优选的，所述层析为依次进行的硅胶柱层析、ODS柱层析和SephadexLH-20层析。


3.根据权利要求2所述生物碱类化合物，其特征在于，所述SephadexLH-20层析中使用三氯甲烷、乙酸乙酯和甲醇的溶剂系统进行洗脱；进一步的，三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇的体积比为(1-5)：(1-5)：(1-5)，优选(1-3)：(1-3)：(1-3)，更优选(1-2)：(1-2)：(1-2)，更优选1︰1︰1。


4.一种权利要求1-3任一所述生物碱类化合物的提取方法，其特征在于，包括依次进行的乙醇水回流提取、正丁醇萃取、层析和半制备高效液相色谱等；优选的，所述层析为依次进行的硅胶柱层析、ODS柱层析和SephadexLH-20层析；更优选的，所述SephadexLH-20层析中使用三氯甲烷、乙酸乙酯和甲醇的溶剂系统进行洗脱；
其中，三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇的体积比为(1-5)：(1-5)：(1-5)，优选(1-3)：(1-3)：(1-3)，更优选(1-2)：(1-2)：(1-2)，更优选1︰1︰1。


5.根据权利要求4所述提取方法，其特征在于，所述乙醇水回流提取具体为：取干燥的诸葛菜种子(含水量1-10％，优选3-8％，更优选4-6％，最优选5％)，采用乙醇水混合溶剂(其中乙醇和水的体积比为(1-10)：(1-10)，优选(3-9)：(1-7)，更优选(5-8)：(2-5)，最优选70︰30)在65-90℃(优选70-85℃，更优选75-80℃，最优选78℃)下回流提取0.5-5h(优选1-4h，更优选1.5-3h，最优选2h)，减压浓缩至无乙醇，得回...

【专利技术属性】
技术研发人员：董俊兴，张广杰，李彬，田瑛，刘士军，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11