一种用于检测乙脑病毒和盖塔病毒的核酸组及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种用于检测乙脑病毒和盖塔病毒的核酸组及检测方法，核酸组包括用于检测乙脑病毒基因的第一引物对以及用于检测盖塔病毒的第二引物对；第一引物对包括：SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物；第二引物对包括：SEQ ID NO.4所示的上游引物和SEQ ID NO.5所示的下游引物。该核酸组可以用于检测样品中的乙脑病毒和盖塔病毒，具有较高的特异性和灵敏度。

A nucleic acid group and detection method for detecting Japanese encephalitis virus and gatavirus

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测乙脑病毒和盖塔病毒的核酸组及检测方法
本专利技术涉及慢病毒检测
，具体而言，涉及一种用于检测乙脑病毒和盖塔病毒的核酸组及检测方法。
技术介绍
流行性乙型脑炎病毒，简称乙脑病毒(JapaneseEncephalitisVirus，JEV)，属于黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属(Flavivirus)成员，分为5种基因型(Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ)。最早于1935年在日本患者脑组织中分离到，因此又称日本脑炎病毒。我国除西部少数省、自治区外，均有报道从蚊子和猪体内分离到乙脑病毒。我国乙脑发病人数占世界总发病人数的80％，是发病率最高的国家，同时，乙脑对养猪业持续高产发展造成了重大威胁，各种年龄、品种、性别的猪均易感染此病，患病种猪可垂直传播传给仔猪。猪主要特征为高热、流产、死胎、仔猪死亡和公猪睾丸炎。猪是乙脑病毒最重要的中间宿主和最主要的传染源，对乙脑病毒有扩增作用，使乙脑病毒形成了“蚊－猪－蚊”的传播模式和“猪－蚊－人”的感染模式。盖塔病毒(GetahVirus，GETV)属于披膜病毒科(Tongaviridae)甲病毒属(Alphavirus)成员。最早于1955年在马来西亚橡胶林中采集的白雪库蚊(雪背库蚊)(Culexgelidus)中分离到，命名为GETV，我国于1964年在海南省分离到第一株GETV(M1)，后从多个省的蚊子、库蠓和猪中分离到多株GETV，表明该病毒在我国分布较为广泛。已证实该病毒对猪、马等脊椎动物影响较大，能够引起马发热伴随发疹和浮肿，猪后肢水肿、淋巴结肿大及流产等症状，严重者还可出现神经症状，甚至衰竭死亡，人群中也存在该病毒感染。乙脑病毒和盖塔病毒在我国已高度流行，具有分布广、发病迅速、传染性强、危害大等特点，尤其侵害了人类的健康，影响了猪、马养殖业的经济发展，而我国还未建立针对乙脑病毒和盖塔病毒的快速检测方法，我们有必要开发新型的、可快速执行的乙脑、盖塔病毒多重荧光PCR检测试剂盒，加强对这两种病毒引起的疾病的监测和快速确诊。鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于检测乙脑病毒和盖塔病毒的核酸组，该核酸组可以用于检测乙脑病毒和盖塔病毒，具有较高的特异性和灵敏度。本专利技术的另一目的在于提供一种检测乙脑病毒和盖塔病毒的方法，该方法可以有效检测样品中的乙脑病毒和盖塔病毒，具有较高的特异性和灵敏度。本专利技术是这样实现的：聚合酶链式反应简称PCR(PolymeraseChainReaction)(又称：多聚酶链式反应)PCR是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促合反应，将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物延伸”三步反应的多次循环，使DNA片段在数量上呈指数增加，从而在短时间内获得我们所需的大量的特定基因片段。一方面，本专利技术提供了一种用于检测乙脑病毒和盖塔病毒的核酸组，其包括用于检测乙脑病毒基因的第一引物对和用于检测盖塔病毒基因的第二引物对，所述第一引物对包括：SEQIDNO.1所示的上游引物和SEQIDNO.2所示的下游引物；所述第二引物对包括：SEQIDNO.4所示的上游引物和SEQIDNO.5所示的下游引物。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，所述核酸组还包括碱基序列如SEQIDNO.3所示的荧光探针，以及碱基序列如SEQIDNO.6所示的荧光探针。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，所述荧光探针一端标记有荧光基团，另一端标记有淬灭基团。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，所述荧光基团选自FAM、HEX、VIC、TET、CY5、CY3、TexasRed、JOE或TFAM。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，所述淬灭基团选自TAMRA、Dabcyl、Eclipse、MGB、BHQ1或BHQ2。本专利技术根据乙脑病毒和盖塔病毒的基因序列，设计出特异性的引物和序列，可以检测样本中的乙脑病毒和盖塔病毒，还可具体检测样本中含有乙脑病毒和盖塔病毒的拷贝数。本专利技术的专利技术人通过对引物和探针序列的合理优化配置，使其检测结果具有更好的特异性和灵敏度，实现对样品中的乙脑病毒和盖塔病毒的有效检测。另一方面，本专利技术还提供了一种检测乙脑病毒和盖塔病毒的方法，其包括：使用如上所述的核酸组对提取自待检样品的DNA待测样品进行PCR扩增。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，在PCR扩增的反应体系中，第一引物对中的上游引物浓度为：5-100pmol/ml，第一引物对中的下游引物浓度为：5-100pmol/ml，第二引物对中的上游引物浓度为：5-100pmol/ml，第二引物对中的下游引物浓度为：5-100pmol/ml。进一步地，在PCR扩增的反应体系中，第一引物对中的上游引物浓度为：10-30pmol/ml，第一引物对中的下游引物浓度为：10-30pmol/ml，第二引物对中的上游引物浓度为：10-30pmol/ml，第二引物对中的下游引物浓度为：10-30pmol/ml。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，PCR扩增的反应体系含有如SEQIDNO.3所示的荧光探针以及如SEQIDNO.6所示的荧光探针，所述荧光探针的浓度为：5-100pmol/ml。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，所述荧光探针的浓度为：10-30pmol/ml。本专利技术的核酸组可以通过实时荧光定量PCR的方法，快速准确的检测样本中乙脑病毒和盖塔病毒的拷贝数，判断样本的阴阳性。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。通过附图所示，本专利技术的上述及其它目的、特征和优势将更加清晰。在全部附图中相同的附图标记指示相同的部分。并未刻意按实际尺寸等比例缩放绘制附图，重点在于示出本专利技术的主旨。图1为本专利技术实验例2中的对JEV的单重荧光扩增曲线结果。图2为本专利技术实验例2中的对GETV的单重荧光扩增曲线结果。图3为本专利技术实验例3中的对JEV和GETV的多重荧光扩增曲线结果。图4为本专利技术实验例4中的对JEV和GETV的多个不同浓度样品的多重荧光扩增曲线结果。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。以下结合实施例对本专利技术的特征和性能作进一步的详细描述。实施例1本实施例提供的用于检测乙脑病毒和盖塔病毒的核酸组，其包括用于检测乙脑病毒基因的第一引物对以及用于检测盖塔病毒的第二引物对；第一引本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测乙脑病毒和盖塔病毒的核酸组，其特征在于，其包括用于检测乙脑病毒基因的第一引物对以及用于检测盖塔病毒的第二引物对；/n所述第一引物对包括：SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物；/n所述第二引物对包括：SEQ ID NO.4所示的上游引物和SEQ ID NO.5所示的下游引物。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于检测乙脑病毒和盖塔病毒的核酸组，其特征在于，其包括用于检测乙脑病毒基因的第一引物对以及用于检测盖塔病毒的第二引物对；
所述第一引物对包括：SEQIDNO.1所示的上游引物和SEQIDNO.2所示的下游引物；
所述第二引物对包括：SEQIDNO.4所示的上游引物和SEQIDNO.5所示的下游引物。


2.根据权利要求1所述的核酸组，其特征在于，所述核酸组还包括碱基序列如SEQIDNO.3所示的荧光探针，以及碱基序列如SEQIDNO.6所示的荧光探针。


3.根据权利要求2所述的核酸组，其特征在于，所述荧光探针一端标记有荧光基团，另一端标记有淬灭基团。


4.根据权利要求3所述的核酸组，其特征在于，所述荧光基团选自FAM、HEX、VIC、TET、CY5、CY3、TexasRed、JOE或TFAM。


5.根据权利要求4所述的核酸组，其特征在于，所述淬灭基团选自TAMRA、Dabcyl、Eclipse、MGB、BHQ1或BHQ2。


6.一种检测乙脑病毒和盖塔病毒的方法，其特征在于，其包括：使用权利要求1-5...

【专利技术属性】
技术研发人员：王静林，孟锦昕，李楠，何于雯，徐天刚，
申请(专利权)人：云南省畜牧兽医科学院，中国动物卫生与流行病学中心，
类型：发明
国别省市：云南;53