【技术实现步骤摘要】
本申请涉及核酸疫苗，尤其涉及一种预防o型口蹄疫的mrna-lnp疫苗及其制备方法。
技术介绍
1、口蹄疫（foot-and-mouth disease，fmd）是由口蹄疫病毒（foot-and-mouthdisease virus，fmdv）引起，可以说是全球最可怕的动物疫病，口蹄疫有7种血清型（a、o、c、asia1、sat1、sat2、sat3）和多达100种血清亚型，不同血清型没有交叉免疫。o型口蹄疫病毒会引起猪、牛、羊等常规大宗家养动物以及偶蹄类野生动物极易感染的急性热性传染性疾病。造成了严重畜牧业生产损失，动物流产和年幼动物受感染的高死亡率，也往往造成严重的经济损失，对区域贸易造成严重影响，被世界动物卫生组织（world organization foranimal health，oie）列为法定上报的动物传染病。
2、长期以来，国内o型口蹄疫的预防和控制主要依赖灭活疫苗，灭活疫苗存在热不稳定，免疫力短，成本高，生产要求苛刻和散毒的风险，与野生菌株重组的风险以及病原体的逆转的可能。灭活疫苗大量使用存在活病毒残留的可能。此外，动物机体在疫苗接种部位有副作用，产生疫苗安全问题和母源性抗体的干扰等。国内外也持续开展o型口蹄疫的灭活疫苗替代研究。口蹄疫多表位合成肽疫苗、重组亚单位疫苗、dna疫苗也相继进入研究和应用研究，然而就目前出现的新型疫苗仍存在诸多弊端，如多肽疫苗、dna疫苗存在保护率不高，保护效果不如灭活苗，注射剂量大等问题，仍不能应对可能爆发的疫情风险，对口蹄疫的防治仍迫切需要更加安全的疫苗。因此，o型口
技术实现思路
1、为了克服上述技术问题，本申请提供一种预防o型口蹄疫病毒mrna-lnp疫苗。本申请提供的mrna-lnp疫苗的制备方法在普通实验室条件下就可以制备完成，具有较高的安全性，免疫保护效果良好的优点。
2、具体包括以下内容：
3、本申请一方面提供了一种预防o型口蹄疫病毒mrna-lnp疫苗，包括mrna分子和脂质纳米颗粒；mrna分子的核苷酸序列如seq id no .1所示。
4、本申请另一方面提供了一种制备预防o型口蹄疫病毒mrna-lnp疫苗的方法，具体步骤为：在mrna分子的抗原序列上依次添加t7启动子、5'utr、kozak序列、sp序列、噬菌体t4纤维蛋白的三聚体基序foldon序列、3'utr、终止序列和polyaa尾，连接到ptntr载体上构建质粒模板；质粒模板经线性化、体外转录、加帽酶加帽、纯化获得mrna分子，mrna分子经脂质纳米颗粒包裹形成mrna-lnp疫苗；mrna分子的抗原序列为o型口蹄疫云南太保毒株vp1（200-213）-vp1（134-161）-vp1（134-161）-3a（21-35）-3d（56-70）。
5、进一步，sp序列位于如seq id no .1所示的序列表中第81-173位。
6、进一步，噬菌体t4纤维蛋白的三聚体基序foldon序列位于如seq id no .1所示的序列表中第624-719位。
7、进一步，纯化是采用氯化锂纯化法。
8、一种预防o型口蹄疫病毒mrna-lnp疫苗和/或一种预防o型口蹄疫病毒mrna-lnp疫苗的制备方法在预防o型口蹄疫病毒上的应用。
9、有益效果：
10、1、本申请以o型口蹄疫病毒云南太保毒株（yntba）（genbank no.ky072818）为抗原序列，确定了vp1蛋白200-213、134-161，3a蛋白21-35，3d蛋白的56-70氨基酸位点。并在抗原序列中添加了polyaa尾，系统地提高其细胞内稳定性和翻译效率，将抗原序列与ptntr载体连接构建重组质粒，重组质粒经线性化、体外转录获得单链mrna模板，而后经脂质纳米颗粒包裹，最终得到了可以预防o型口蹄疫的mrna-lnp疫苗。
11、2、本申请以cathay型（中国型）o型口蹄疫云南太保毒株（yntba）为研究对象。选择其vp1（200-213）-vp1（134-161）-vp1（134-161）-3a（21-35）-3d（56-70）为抗原序列开发的一种mrna-lnp疫苗。
12、3、本申请制备的mrna-lnp疫苗可以诱导较强的体液免疫与细胞免疫应答，免疫原性良好，其在不接触病毒的前提下，直接使用抗原序列进行合成，具有疫苗开发制备速度快，可快速实现规模化量产，也可根据病毒的变异切换抗原序列和设计平台，具有快速应对突发疫情，短时间实现疫苗的制备，为紧急情况下口蹄疫疫苗的研制提供了新的研究思路和策略。
13、4、本申请在制备mrna-lnp疫苗的过程中，在kozak序列之后增加人组织纤溶酶原激活序列（sp序列），在3'utr前加噬菌体t4纤维蛋白的三聚体基序foldon序列。该方法制备出来的疫苗效价高达2.6、抗原匹配性和免疫保护率高的o型口蹄疫mrna-lnp疫苗；同时涉及mrna-lnp疫苗制备的方法和应用。利用该方法制备效价高、抗原匹配性、免疫保护率高和对宿主致病性低的o型口蹄疫mrna-lnp疫苗，提高了疫苗的生物安全性和免疫应答能力，免疫后可有效刺激机体产生免疫应答，并提供动物免疫保护作用，可用于o型口蹄疫病毒的预防和控制。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种预防O型口蹄疫的mRNA-LNP疫苗，其特征在于，包括mRNA分子和脂质纳米颗粒；所述mRNA分子的核苷酸序列如SEQ ID NO .1所示。
2.一种制备预防O型口蹄疫的mRNA-LNP疫苗的方法，其特征在于，具体步骤为：在mRNA分子的抗原序列上依次添加T7启动子、5'UTR、Kozak序列、SP序列、噬菌体T4纤维蛋白的三聚体基序Foldon序列、3'UTR、终止序列和PolyAA尾，连接到pTNTR载体上构建质粒模板；所述质粒模板经线性化、体外转录、加帽酶加帽、纯化获得mRNA分子，所述mRNA分子经脂质纳米颗粒包裹形成mRNA-LNP疫苗；所述mRNA分子的抗原序列为O型口蹄疫云南太保毒株VP1（200-213）-VP1（134-161）-VP1（134-161）-3A（21-35）-3D（56-70）。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述SP序列位于如SEQ ID NO .1所示的序列表中第81-173位。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述噬菌体T4纤维蛋白的三聚体基序Foldon序列位于如SEQ
5.根据权利要求2、3或4所述的方法，其特征在于，所述纯化是采用氯化锂纯化法。
...【技术特征摘要】
1.一种预防o型口蹄疫的mrna-lnp疫苗，其特征在于，包括mrna分子和脂质纳米颗粒；所述mrna分子的核苷酸序列如seq id no .1所示。
2.一种制备预防o型口蹄疫的mrna-lnp疫苗的方法，其特征在于，具体步骤为：在mrna分子的抗原序列上依次添加t7启动子、5'utr、kozak序列、sp序列、噬菌体t4纤维蛋白的三聚体基序foldon序列、3'utr、终止序列和polyaa尾，连接到ptntr载体上构建质粒模板；所述质粒模板经线性化、体外转录、加帽酶加帽、纯化获得mrna分子，所述mrna分子经脂质纳米颗粒包裹形成mrna-ln...
【专利技术属性】
技术研发人员：信爱国，高洪，赵金刚，肖鹏，
申请(专利权)人：云南省畜牧兽医科学院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。