用于快速检测烟曲霉的序列、试剂盒、方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种用于快速检测烟曲霉的序列，其包括烟曲霉‑crRNA序列、以及相应的带有T7启动子的RPA扩增引物序列，其中，所述烟曲霉‑crRNA序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述RPA扩增引物序列的正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述RPA扩增引物序列的反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明专利技术能够简易、快速、高特异性、灵敏地检测待测样本中的烟曲霉。

Sequence, kit, method and application for rapid detection of Aspergillus fumigatus

【技术实现步骤摘要】
用于快速检测烟曲霉的序列、试剂盒、方法及应用
本专利技术属于生物化学领域，具体涉及曲霉菌检测方法，特别是一种用于快速检测烟曲霉的序列、试剂盒、方法及应用。
技术介绍
侵袭性肺曲霉病(invasivepulmonaryaspergillosis，IPA)是指曲霉菌菌丝生长侵入肺实质而引起的感染性疾病，具有发病急性、进展迅速、病死率高的特点。烟曲霉是引起IPA最常见的病原菌，文献报道若IPA肺炎症状发生10天后抗真菌治疗，患者死亡率高达90％，而早期抗真菌治疗的死亡率可降低至41％。快速准确鉴定烟曲霉能指导临床选择抗真菌药、争取治疗时间。早期诊断和及时治疗是良好预后的关键。但由于该病缺乏典型的临床表现，早期诊断尤为困难。实验室曲霉菌的鉴定方法主要有病原体分离培养、病理组织鉴定、免疫学检测、核酸检测。但是传统的病原体分离培养耗时长、阳性率低。而病理组织鉴定受到样本采集的限制、免疫学检测灵敏度不高，不能够区分不同的菌种，因此不能鉴定是否烟曲霉感染，而且常常发生假阳性或假阴性。核酸检测方法主要以近就广泛应用的聚合酶链反应(PCR)技术及一些新兴的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于快速检测烟曲霉的序列，其包括烟曲霉-crRNA序列、以及相应的带有T7启动子的RPA扩增引物序列，其中，所述烟曲霉-crRNA序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述RPA扩增引物序列的正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述RPA扩增引物序列的反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于快速检测烟曲霉的序列，其包括烟曲霉-crRNA序列、以及相应的带有T7启动子的RPA扩增引物序列，其中，所述烟曲霉-crRNA序列的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述RPA扩增引物序列的正向引物核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，所述RPA扩增引物序列的反向引物核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。


2.根据权利要求1所述的序列，其特征在于，所述RPA扩增引物序列的终浓度为0.1～1μmol/L，所述烟曲霉-crRNA的终浓度为20～200nmol/L。


3.一种试剂盒，其含有根据权利要求1或2所述的用于快速检测烟曲霉的序列，还含有RPA酶预混液、信号报告探针、LwCas13a蛋白、醋酸镁、T7RNA聚合酶混合液和NTP缓冲液混合液。


4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述RPA酶预混液中含有磷酸肌酸、肌酸激酶、dNTPs、ATP、DTT、醋酸钾、重组酶uxsX、重组酶uxsY、单链结合蛋白和Bsu聚合酶。


5.一种快速检测烟曲霉的方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤一：提取待检测样本的DNA；
步骤二：利用RPA和CRISPR一步法检测体系对烟曲霉核酸进行扩增和信号检测，其中使用根据权利要求1或2所述的用于快速检测烟曲霉的序列。


6....

【专利技术属性】
技术研发人员：叶枫，李征途，李少强，占扬清，成静，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第一医院，广州呼吸健康研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44