非小细胞肺癌的生物标志物、检测方法及应用技术

本发明专利技术涉及对于非小细胞肺癌的生物相关联的生物标志物的检测，具体提供了一种非小细胞肺癌生物标志物、检测方法及其应用，生物标志物为BLMH或VAT1，可通过检测生物标志物的蛋白质或蛋白质片段或编码生物标志物的mRNA的表达水平来确定该生物标志物的表达水平，同时还提供了一种能够检测所述的非小细胞肺癌生物标志物存在的物质在制备用于指示对象中非小细胞肺癌的试剂盒或诊断试剂或检测系统中的应用。本发明专利技术已鉴定非小细胞肺癌与BLMH或VAT1表达上调之间的关系，BLMH或VAT1作为非小细胞肺癌的特异性生物标志物，具有重要的临床意义。

Biomarkers, detection methods and application of non-small cell lung cancer

【技术实现步骤摘要】
非小细胞肺癌的生物标志物、检测方法及应用
本专利技术涉及生物
，更具体的说，本专利技术涉及非小细胞肺癌的生物标志物、检测方法及应用。
技术介绍
肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高，男性肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位，女性发病率占第二位，死亡率占第二位。肺癌的病因至今尚不完全明确，城市居民肺癌的发病率比农村高，这可能与城市大气污染和烟尘中含有致癌物质有关。肺癌可以分为小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)，其中后者占大约80％。非小细胞肺癌又可以分为三类：(i)鳞状细胞癌，其在鳞状细胞中开始，所述鳞状细胞是看起来象鱼鳞的薄的、扁平细胞。鳞状细胞癌也称为表皮样癌；(ii)大细胞癌，其在几个类型的大肺细胞中开始；(iii)腺癌，其在内衬肺的肺泡并且制备物质例如粘液的细胞中开始。其他较不常见类型的NSCLC包括多形性癌、类癌瘤和未分类的癌。导致肺癌发生的因素有很多，吸烟、遗传因素，放射性氡气、石棉等都是风险因素。肺癌的死亡率高，五年生存率不足15％。一个重要的原因是早期诊断率低，不足2％，80％以上患者就诊时已在晚期。目前的诊断方法有X-射线检查、CT扫描、支气管镜检、痰细胞学检查以及肺癌生物标志物检测等。这些方法都存在各自的缺陷，如影像学技术难以发现瘤体较小的肿瘤，早期普查的漏检率较高。已有的肺癌标志物是广谱的，无法确诊肺癌，因此寻找特异性的肺癌生物标志物具有重要的意义。到目前为止，肺癌的早期诊断率仍有待提高。此外，在我国传统的肺癌手术加化疗以及近年来配合使用的多种基因治疗方法仍没有明显提高肺癌患者的生存率，因而寻找新的肺癌相关基因尤其是肺癌高表达基因对于探讨肺癌的发病机制和早期诊断具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术目的在于解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点，本专利技术还有一个目的是提供非小细胞肺癌的生物标志物、检测方法及应用，该生物标志物为BLMH(博来霉素水解酶)或VAT1(重组人小泡胺运输蛋白1同源物)，BLMH的HGNC登录号为1059；EntrezGene登录号为642；Ensembl登录号为ENSG00000108578；OMIM登录号为602403；UniProtKB登录号为Q13867，VAT1的HGNC登录号为16919；EntrezGene登录号为10493；Ensembl登录号为ENSG00000108828；OMIM登录号为604631；UniProtKB登录号为Q99536。为了实现上述目的和其他优点，本专利技术通过筛选在人类非小细胞肺癌组织及相应的癌旁组织中差异表达的蛋白质，本申请的专利技术人找到了两种在非小细胞肺癌组织及相应的癌旁组织中存在差异表达的蛋白质(在癌组织中上调表达)，经质谱鉴定为BLMH和VAT1，可作为非小细胞肺癌的生物标志物。作为本专利技术的一个目的，提供了一种用于检测非小细胞肺癌生物标志物表达的物质在制备用于指示对象中非小细胞肺癌的试剂或试剂盒或检测系统中的应用。所述的生物标志物即为BLMH或VAT1。优选的，试剂或试剂盒或检测系统用于包括如下步骤的方法：(a)检测该对象中生物标志物的表达水平；(b)将所述对象中的生物标志物的表达水平与生物标志物的参比表达水平相比较；(c)基于所述比较来指示所述对象中的非小细胞肺癌；(d)所述对象中生物标志物的表达水平高于生物标志物的临界值时指示所述对象为非小细胞肺癌。优选的，在获自所述对象的检测样品中检测所述生物标志物的表达水平。优选的，所述检测样品为对象的血清样品或组织样品。一种检测所述的生物标志物表达水平的方法，通过检测所述生物标志物的蛋白质或编码生物标志物的mRNA测定。此处所述蛋白质既包括完整的蛋白质分子，也包括肽段。优选的，所述的肽段的长度为5-50个氨基酸，优选8-30个氨基酸，更优选为8-25个氨基酸。优选的，使用能够与所述的生物标志物蛋白质特异性结合的物质测定生物标志物的表达水平。优选的，能够与所述的生物标志物蛋白质特异性结合的物质为抗体或与酶分子结合的抗体。优选的，所述的抗体为单克隆抗体或多克隆抗体或多特异性抗体(例如双特异性抗体)或完整分子的片段(例如能够结合响应抗原的Fab和F(ab')2)。此处所述的单克隆抗体包括全长的单克隆抗体。采用本专利技术至少具有如下有益效果：本专利技术所提供的生物标志物的表达水平的高低可以为非小细胞肺癌的早期诊断提供更可靠和灵敏的检测依据，有助于提高肺癌的早期诊断率。本专利技术的其他优点、目的和特征将通过下面的实施例具体说明体现。附图说明图1实施例2BLMH差异蛋白验证结果图图2实施例3VAT1差异蛋白验证结果图图3实施例4BLMH差异蛋白进一步验证结果图图4实施例5VAT1差异蛋白进一步验证结果图具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的详细说明。应理解，以下实施例仅用于说明本专利技术而非用于限定本专利技术的范围。通过筛选在人类肺癌组织及相应的癌旁组织中差异表达的蛋白质，本申请的专利技术人找到了两种在肺癌组织及相应的癌旁组织中存在差异表达的蛋白质(在癌组织中上调表达)，经质谱鉴定为BLMH和VAT1。免疫印迹实验证实，BLMH和VAT1的确在肺癌组织及相应的癌旁组织中存在差异表达(在癌组织中表达上调)。通过对55对人肺癌的癌组织与癌旁组织进行的免疫组织化学实验进一步证实了BLMH和VAT1在人类肺癌的癌组织与癌旁组织中存在差异表达(在癌组织中表达上调)，并且血清的免疫学实验也显示了BLMH和VAT1在人类非小细胞肺癌患者中高表达。实施例中，专利技术人用酶解样品制备法(enzymaticsamplepreparation,ESP)制备的肺癌的癌组织与癌旁组织蛋白质样品，以非标记定量的方法鉴定差异蛋白质。结果发现BLMH和VAT1在肺癌癌组织中高表达。免疫印迹实验和免疫组织化学实验进一步证实BLMH和VAT1的确在肺癌的癌组织与癌旁组织中存在差异表达。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆:实验室手册(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。下列实施例中所用组织样品和血清样品均来自临床医生提供。在本专利技术的下述实施例中，尿素、3-[(3_胆酰胺丙基)_二乙铵]-1-丙磺酸(CHAPS)、十二烷基磺酸钠(SDS)、二硫苏糖醇(DTT)、三(羟甲基)氨基乙烷(Tris)、碘代乙酰胺(IAA)购自Bio-Rad公司；β-巯基乙醇等化学试剂购自Sigma公司；胰蛋白酶(Trypsin,sequencinggrade)购自Promega公司；SCX柱和SAX柱以及pH缓冲液试剂盒购自waters公司。在本专利技术的下述实施例中，使用的溶液配方如下:裂解液:8m本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.非小细胞肺癌生物标志物，其中所述的生物标志物为BLMH或VAT1。/n

【技术特征摘要】
1.非小细胞肺癌生物标志物，其中所述的生物标志物为BLMH或VAT1。


2.一种能够检测权利要求1所述的非小细胞肺癌生物标志物存在的物质在制备用于指示对象中非小细胞肺癌的试剂或试剂盒或检测系统中的应用。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂或试剂盒或检测系统用于包括如下步骤的方法：
(a)检测对象中生物标志物的表达水平；
(b)将所述的对象中生物标志物的表达水平与生物标志物的临界值相比较；和
(c)基于所述比较来指示所述对象中的非小细胞肺癌；
(d)所述对象中生物标志物的表达水平高于生物标志物的临界值时指示所述对象为非小细胞肺癌。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的生物标志物将在对象的检测样品中被检测。


5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘冬平，张宏涛，周建华，孙婷，
申请(专利权)人：中科院上海巴斯德研究所麒麟创新研究院，
类型：发明
国别省市：江苏;32