BLK基因在预测癌症患者预后的工具中的应用制造技术

本发明专利技术公开了BLK基因在预测癌症患者预后的工具中的应用，所述癌症包括子宫内膜癌、肺腺癌、黑色素瘤。本发明专利技术实验证明BLK基因表达量高的患者比BLK基因表达量低的患者预后好，因此可以根据BLK表达量高低来预测癌症患者的预后。

Application of BLK gene in predicting the prognosis of cancer patients

【技术实现步骤摘要】
BLK基因在预测癌症患者预后的工具中的应用
本专利技术属于生物医药领域，涉及BLK基因在预测癌症患者预后的工具中的应用。
技术介绍
癌症是一类以不受控制的细胞增长为表现的复杂疾病，目前，癌症已是人类死亡最主要的原因之一。对癌症病人来说，化疗是一种常规的治疗手段，但是很多癌症病人接受了不必要的化疗，以乳腺癌为例，大约有有70％到80％的乳腺癌病人接收了不必要的化疗，这大大影响了癌症病人的生存质量。因此，准确预测癌症病人的预后，对于癌症病人的治疗具有指导性的意义。同时，知道癌症病人的预后以后，准确预测某种药物对该病人的药效，对个体化治疗来说至关重要。目前医生对于癌症病人的预后判断主要是基于癌症病人的分期和分级。癌症分期指的是医生根据原发肿瘤的大小、向周围浸润的程度与范围、是否累及邻近器官、有无附近或远处淋巴结或器官转移等因素来确定肿瘤目前己发展到什么程度。当前国际上最常用的是TNM标准。该方法虽然具有一定的临床意义，但是却并不准确，同一分期的癌症病人可能具有不同的预后。而癌症分级是组织学概念，主要包括了细胞核分级和组织学分级。细胞核分级主要是观察细胞的分化状况，通常来说分化越底，预后也越差，因此该方法根据细胞核的大小、核仁、核膜和染色质等情况将肿瘤分为1到3级。组织学分级主要是根据肿瘤细胞的细胞特征和侵润情况来做分级。目前常用的方法是将细胞核分级和组织学分级结合起来，把细胞核分裂计数，细胞核多样性和腺管形成三项指标累计计数，按照数值的高低分成I,II,III级，级数越高，说明远端转移风险越高，预后越差。该分级方法独立于肿瘤大小，相对于癌症分期具有更好的预后价值，但它依然不能满足实际的需要。因此对于新的癌症预后预测方法的研究迫在眉睫。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种可用于预测子宫内膜癌等癌症患者预后的分子标志物。使用基因标志物来预测子宫内膜癌等癌症预后，具有特异性和灵敏性，在临床上具有广泛的应用前景。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了检测BLK基因表达的产品在制备预测癌症患者预后的工具中的应用。进一步，上面所提到的检测BLK基因表达的产品包括：通过反转录PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测BLK基因表达水平以预测癌症患者预后的产品。进一步，通过反转录PCR检测BLK基因表达水平以预测癌症患者预后的产品至少包括一对特异扩增BLK基因的引物；通过实时定量PCR检测BLK基因表达水平以预测癌症患者预后的产品至少包括一对特异扩增BLK基因的引物；通过免疫检测检测BLK基因表达水平以预测癌症患者预后的产品包括：与BLK蛋白特异性结合的抗体；通过原位杂交检测BLK基因表达水平以预测癌症患者预后的产品包括：与BLK基因的核酸序列杂交的探针；通过芯片检测BLK基因表达水平以预测癌症患者预后的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与BLK蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与BLK基因的核酸序列杂交的探针。进一步，所述工具包括芯片、试剂盒、试纸或高通量测序平台。其中，高通量测序平台是一种特殊的诊断工具，检测BLK基因表达的产品可以应用于该平台实现对BLK基因的表达情况的检测。随着高通量测序技术的发展，对一个人的基因表达谱的构建将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的基因表达谱，容易分析出哪个基因的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知BLK基因的异常与癌症预后相关也属于BLK基因的用途，同样在本专利技术的保护范围之内。其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测BLK基因转录水平的针对BLK基因的寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的BLK蛋白的特异性抗体；所述基因芯片可用于检测包括BLK基因在内的多个基因(例如，与癌症预后相关的多个基因)的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括BLK蛋白在内的多个蛋白质(例如与癌症预后相关的多个蛋白质)的表达水平。通过将多个与癌症预后的标志物同时检测，可大大提高预测癌症预后的准确率。其中，所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测试剂盒包括用于检测BLK基因转录水平的试剂。进一步，所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片方法检测BLK基因表达水平过程中所需的试剂。优选度，所述试剂包括针对BLK基因的引物和/或探针。根据BLK基因的核苷酸序列信息容易设计出可以用于检测BLK基因表达水平的引物和探针。与BLK基因的核酸序列杂交的探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其它衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结合，任何长度都可以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探针自身互补序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。作为本专利技术的基因检测试剂盒的实例，所述基因检测试剂盒包含SYBRGreen聚合酶链式反应体系、用于扩增BLK基因和管家基因的引物对。SYBRGreen聚合酶链式反应体系包含PCR缓冲液、dNTPs、SYBRGreen荧光染料。上述技术方案中，PCR缓冲液为本领域技术人员公知的现有技术，优选地，PCR缓冲液包含：25mMKCl，2.5mMMgCl2，200mM(NH4)2SO4。本专利技术的基因检测试剂盒还包含RNA提取试剂，RNA酶提取试剂包含Trizol、氯仿、异丙醇、75％乙醇。本专利技术的所述蛋白免疫检测试剂盒包括BLK蛋白的特异性抗体。所述试剂盒还包括在本领域中通常用于免疫分析的工具和试剂。通常用于免疫分析的试剂包括二级抗体结合物，该二级抗体结合物与通过与基质的反应而显色的标记物结合；与所述标记物进行显色反应的显色基质溶液；清洗液；及酶反应终止液。本专利技术的用于免疫分析的试剂可进一步包含含有BLK标准抗原的阳性对照和含有未导入所述抗原的动物的抗血清的阴性对照组。本专利技术的蛋白免疫检测试剂盒可通过抗原-抗体结合反应定量或定性分析。可通过利用常用的酶联免疫吸附分析法(ELISA)、放射免疫分析法(RIA)、夹心法、免疫印迹法、免疫沉淀法、免疫组织化学染色法、荧光免疫分析法、酶基质着色法、抗原抗体聚集法等来检测所述抗原-抗体结合反应。这里使用的用于所述抗原-抗体结合反应的固定体可包括硝酸纤维素膜、PVDF膜、由聚乙烯醇树脂或聚苯乙烯树脂合成的孔板、由玻璃制成的载玻片等。所述二抗标记物优选为用于显色反应的常用显色剂。这里使用的标记物可包含荧光素和染料，该荧光素和染料包括辣根过氧化物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测BLK基因表达的产品在制备预测癌症患者预后的工具中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.检测BLK基因表达的产品在制备预测癌症患者预后的工具中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括：通过反转录PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测BLK基因表达水平以预测癌症患者预后的产品。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，通过反转录PCR检测BLK基因表达水平以预测癌症患者预后的产品至少包括一对特异扩增BLK基因的引物；通过实时定量PCR检测BLK基因表达水平以预测癌症患者预后的产品至少包括一对特异扩增BLK基因的引物；通过免疫检测检测BLK基因表达水平以预测癌症患者预后的产品包括：与BLK蛋白特异性结合的抗体；通过原位杂交检测BLK基因表达水平以预测癌症患者预后的产品包括：与BLK基因的核酸序列杂交的探针；通过芯片检测BLK基因表达水平以预测癌症患者预后的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与BLK蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与BLK基因的核酸序列杂交的探针。


4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述工具包括芯片、试剂盒、试纸或高通量测序平台。


5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱海利，张颖，王婷，马飞，林晨，李春晓，赵振国，郭建宾，
申请(专利权)人：中国医学科学院肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：北京;11