一种基因抑制剂在制备治疗肝癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种基因抑制剂在制备治疗肝癌药物中的应用。本发明专利技术通过检测肝癌组织和癌旁组织中的LINC01988的表达差异发现，LINC01988在肝癌组织中异常表达，因此，可以使用LINC01988制备实时荧光定量试剂盒去实现肝癌患者的早期诊断。同时，本发明专利技术通过细胞划痕实验，Transwell小室实验，Western Blot实验证明，通过LINC01988基因抑制剂能够有效的抑制肝癌细胞的EMT转化和细胞迁移和侵袭，从而有效的抑制肝癌的转移。因此，LINC01988基因抑制剂可以用于制备治疗肝癌药物，从而为肝癌药物的开发开辟了新的途径。

Application of a gene inhibitor in the preparation of drugs for the treatment of liver cancer

【技术实现步骤摘要】
一种基因抑制剂在制备治疗肝癌药物中的应用
本专利技术属于生物医学
，尤其涉及一种基因抑制剂在制备治疗肝癌药物中的应用。
技术介绍
肝癌是目前临床上最为常见的癌症之一。肝癌每年的死亡率居全世界恶性肿瘤中的第三位，新发病率居全世界恶性肿瘤中的第五位，且肝癌的发生呈现出迅猛增加的趋势。肝癌的发病与病毒感染、非酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、遗传和环境因素等有关。大多数的肝癌患者是在晚期阶段被确诊治疗，所以患者的生存率较低。早诊断、早治疗是提高肝癌患者生存率的关键。人类基因组中只有少量的基因能够编码蛋白质，而98％的基因虽然可以转录形成RNA，但是这些RNA无法进一步的最终形成蛋白质，这些基因转录所形成的RNA被称之为非编码RNA.之前，人们将这些非编码RNA视为转录噪音，并没有实际的具体功能。但是，最新的研究显示这些非编码RNA具有基因调控功能。长链非编码RNA是指长度大于200个碱基的非编码RNA，而且其广泛存在于多种组织中，长非编码RNA能够参与到细胞发育和代谢等多种生命功能调控途径中，包括基因重组、基因印记、细胞周期调控、染色质修饰、转录、翻译、mRNA降解等。现有的研究表明，长链非编码RNA的表达差异通常与癌症的发生、发展以及患者的术后恢复有着紧密的联系。一些异常表达的长链非编码RNA能够作为癌症的基因诊断靶标，并且可以作为癌症患者早期诊断以及为判断癌症类型提供新的依据。因此，寻找新的肝癌相关LncRNA基因标志物，对于实现肝癌患者的早期诊断和治疗具有重要的意义，并且也有助于肝癌药物的开发和利用。<br>
技术实现思路
本专利技术的目的在于一种在肝癌组织中高表达，且具有诊断价值的长链非编码RNA，同时，本专利技术的目的在于提供一种用于制备治疗肝癌药物的长链非编码RNA基因抑制剂。为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：本专利技术提供了一种肝癌相关的生物标志物，所述标志物为LINC01988，所述LINC01988在肝癌中高表达。优选地，所述LINC01988的转录本为NR_144436.1，所述LINC01988的序列如SEQIDNO.1所示。其次，本专利技术提供了LINC01988在制备用于诊断肝癌的试剂盒中的应用。优选地，所述试剂盒为实时荧光定量PCR试剂盒；所述实时荧光定量PCR试剂盒包括用于检测LINC01988表达量的引物对；所述引物对的正向引物序列如SEQIDNO.2所示，所示引物对的反向引物序列如SEQIDNO.3所示。此外，本专利技术提供了LINC01988基因抑制剂在制备治疗肝癌药物组合物中的应用。优选地，所述基因抑制剂为siRNA，化学修饰siRNA，shRNA中的一种。优选地，所述基因抑制剂为siRNA，所述siRNA的正义链为SEQIDNO.6，所述siRNA的反义链为SEQIDNO.7。优选地，所述药物组合物还包括药学上可接受的药物载体。除此之外，本专利技术提供了一种LINC01988基因抑制剂，所述基因抑制剂用于制备治疗肝癌药物组合物。本专利技术的有益效果在于：本专利技术首次证明，长链非编码RNALINC01988在肝癌组织中高表达，且检测LINC01988癌旁和肝癌组织中的差异表达具有优异的诊断价值，因此，LINC01988检测试剂盒可以用于肝癌患者的早期诊断。其次，本专利技术通过细胞划痕实验，Transwell小室实验，WesternBlot实验证明，通过LINC01988基因抑制剂能够有效的抑制肝癌细胞的EMT转化，从而有效的抑制肝癌的转移。因此，LINC01988基因抑制剂可以用于制备治疗肝癌药物，从而为肝癌药物的开发开辟了新的途径。附图说明图1是LINC01988在肝癌组织和癌旁组织中的表达情况。图2是LINC01988在肝癌组织和癌旁组织中表达情况的ROC曲线。图3是LINC01988转染LINC01988的siRNA对于肝癌HepG2细胞中LINC01988表达的影响情况。图4是划痕实验检测干扰LINC01988对肝癌HepG2细胞迁移的影响情况。图5是Transwell实验检测干扰LINC01988对肝癌HepG2细胞迁移和细胞侵袭的影响情况。图6是干扰LINC01988对肝癌HepG2细胞EMT相关蛋白N-cadherin和Vimentin蛋白表达的影响情况。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。如无特别说明，本专利技术所涉及的技术均为分子生物学或细胞生物学常规技术手段，其中涉及的酶、试剂以及反应条件均可根据本领域技术人员的经验进行合理选择，其中涉及试剂耗材属于市售的普通产品，其中涉及的检测手段以及仪器也均为本领域技术人员所熟知并熟练掌握。实施例1检测LINC01988在肝癌组织和癌旁组织中的表达情况1.研究对象选取20例肝癌组织以及相应的癌旁组织进行实验，组织来源于青岛市肿瘤医院，所有组织标本均通过医院伦理委员会审查和批准，所有组织标本来源患者均签署知情同意书。肝癌组织经病理检测证实为肝癌(肝癌组织切除时，患者尚未进行化疗，放疗等治疗)。具体标本如下：2.组织RNA提取(1)从-80℃冰箱中取出组织标本，取约50mg组织标本放入到研钵中，加入少量的液氮，迅速的进行研磨，待组织变软后，再次加入少量液氮进行研磨，重复三次；(2)加入1mLTrizol，使用自动匀浆器匀浆2分钟，匀浆结束后，将组织标本转移至离心管中，室温放置5min；(3)12000rpm离心5min，取上清，去除沉淀；(4)加入0.2mL氯仿，震荡混匀后，室温放置15分钟；(5)4℃12000rpm离心15min；(6)取上清转移至另一个离心管中，加入等体积预冷的异丙醇混匀，混匀后冰上静置8分钟；(7)4℃12000rpm离心10分钟，去除上清，保留沉淀；(8)在沉淀中加入1ml75％乙醇，温和震荡离心管，悬浮沉淀；(9)4℃8000rpm离心5分钟，使用移液器小心的去除上清；(10)室温静置10分钟干燥RNA，之后使用50μLDEPC水溶解沉淀；(11)使用微量紫外分光光度计测定组织总RNA的纯度和浓度。3.逆转录获取cDNA逆转录反应参照TaKaRa逆转录试剂盒说明书(1)去除基因组DNA反应试剂：反应条件：42℃2分钟，4℃。(2)逆转录反应反应试剂：反应条件：37℃15分钟，85℃5秒，4℃。4.荧光定量PCR检测反应试剂:反应条件：95℃10min；95℃15s，60℃60s40个循环；75℃5min。采用2-△△Ct方法处理实时定量PCR数据，计算LINC01988的表达变化。LINC01988引物序列为正向引本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肝癌相关的生物标志物，其特征在于，所述标志物为LINC01988，所述LINC01988在肝癌中高表达。/n

【技术特征摘要】
1.一种肝癌相关的生物标志物，其特征在于，所述标志物为LINC01988，所述LINC01988在肝癌中高表达。


2.根据权利要求1所述的生物标志物，其特征在于，所述LINC01988的序列如SEQIDNO.1所示。


3.LINC01988在制备用于诊断肝癌的试剂盒中的应用。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂盒为实时荧光定量PCR试剂盒；所述实时荧光定量PCR试剂盒包括用于检测LINC01988表达量的引物对；所述引物对的正向引物序列如SEQIDNO.2所示，所示引物对的反向引物序列如SEQIDNO.3所示。


5.LINC01988基因抑制剂在制备治疗肝癌药物组合物中的应...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹爱华，
申请(专利权)人：青岛思拓新源细胞医学有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37