一种利用高效液相色谱法测定人参皂苷Rb制造技术

本发明专利技术采用不同色谱柱和色谱条件，得到了一种科学的测定方法。色谱柱为Acchrom XAmide(5μm,100A,4.6×250mm)酰胺柱，流动相为乙腈(B)和水(A)，梯度洗脱条件：0～30min，10～18％A；30～60min，18～15％A；流速1.0mL/min；柱温30℃；检测波长：203nm。

【技术实现步骤摘要】
一种利用高效液相色谱法测定人参皂苷Rb1、Rc含量的方法
本专利技术涉及采用HPLC法测定人参、人参属植物及其相关制品中人参皂苷Rb1、Rc含量的方法，属于中医药领域的专利技术创造。
技术介绍
人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd为最早被发现的人参皂苷类化合物，在人参属植物化学成分及生物活性研究中一直占据着非常重要的位置。我国2015年版药典一部中人参、西洋参和红参的含量测定项下测定的是人参皂苷Rg1、Re和Rb1；人参叶的含量测定项下测定的是人参皂苷Rg1和Re；三七的含量测定项下测定的是人参皂苷Rg1、Re和三七皂苷R1；人参茎叶总皂苷和人参总皂苷的含量测定项下测定的是人参皂苷Rg1、Re、和Rd；三七三醇皂苷的含量测定项下测定的是人参皂苷Rg1、Re和三七皂苷R1；三七总皂苷的含量测定项下测定的是三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1和Rd。另外2003年2月由当时的中华人民共和国卫生部发布的《保健食品检验与评价技术规范》中的《保健食品中人参皂甙高效液相色谱测定》中测定的是人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rb2、Rc、Rd共6种人参皂苷。近期国家市场监管总局特殊食品安全监督管理司于2019年6月14日公告的《保健食品卫生学理化检验规范(征求意见稿)》中的《保健食品中人参皂苷的测定》中测定的仍然是人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rb2、Rc、Rd共6种人参皂苷。除了上述法定的含量测定方法外关于以人参属植物为基源(主要是人参、西洋参及三七)的药材、复方制剂、不同药用部位中人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd的含量测定的文献更是不胜枚举。但是不论是何种人参皂苷的含量测定方法，其中绝大部分采用的是高效液相色谱法，而且固定相采用的是十八烷基硅烷键合硅胶(C-18或ODS)，流动相一般是乙腈-水、乙腈-0.1％磷酸水溶液或甲醇-水梯度洗脱。2015年版药典一部中人参和红参的含量测定项下固定相是十八烷基硅烷键合硅胶；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱。2015年版药典一部中西洋参的含量测定项下固定相是十八烷基硅烷键合硅胶；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液B，按下表进行梯度洗脱。2015年版药典一部中人参茎叶总皂苷和人参总皂苷的含量测定项下固定相是十八烷基硅烷键合硅胶；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液B，按下表进行梯度洗脱。2015年版药典一部中三七总皂苷的含量测定项下固定相是十八烷基硅烷键合硅胶；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱。2003年2月发布的《保健食品检验与评价技术规范》中的《保健食品中人参皂甙高效液相色谱测定》中固定相是十八烷基硅烷键合硅胶；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱。近期国家市场监管总局特殊食品安全监督管理司于2019年6月14日公告的《保健食品卫生学理化检验规范(征求意见稿)》中的《保健食品中人参皂苷的测定》中固定相是十八烷基硅烷键合硅胶；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱。按照上述在
技术介绍
中描述的已有方法利用HPLC法对人参皂苷Rb1和Rc进行含量测定的话，由于现有方法无法将人参皂苷Rb1和Ra3、人参皂苷Rc和Ra1进行分离，其结果必然导致测定结果偏高。对于与人参有关的含量测定其结果最为严重，因为人参中的人参皂苷Ra1、Ra2、Ra3的含量比同属植物三七及西洋参高。本专利技术的目的就是要解决由本专利技术人首次发现的现有技术的上述缺陷，提供新的人参皂苷Rb1和Rc的含量测定方法。
技术实现思路
本专利技术人20多年前就开始了人参皂苷的提取分离、结构鉴定及含量测定方法等方面的研究，并在此过程中不断收获新的惊喜。其中之一就是本专利技术涉及到的一个重大发现，即如果按照上述在
技术介绍
中描述的已有方法利用HPLC法对人参皂苷Rb1和Rc进行含量测定的话，由于现有方法无法将人参皂苷Rb1和Ra3、人参皂苷Rc和Ra1进行分离，其结果必然导致测定结果偏高。对于与人参有关的含量测定其结果最为严重，因为人参中的人参皂苷Ra1、Ra2、Ra3的含量比同属植物三七及西洋参高。本专利技术的目的就是要解决由本专利技术人首次发现的现有技术的上述缺陷，提供新的人参皂苷Rb1和Rc的含量测定方法。为了解决现有技术中存在的上述重大缺陷，本专利技术筛选了多种不同固定相的色谱柱及流动相对人参皂苷Rb1、Rc、Ra1、Ra3的分离效果，结果最终发现酰胺色谱柱对人参皂苷Rb1、Rc、Ra1、Ra3具有很好的分离效果，即专利技术了以下新的含量测定方法。本专利技术采用不同色谱柱和色谱条件，得到了一种科学的测定方法。供试品溶液的配制方法为取人参药材粉末2g，甲醇回流提取3次，提取时间依次为1.5h、1h、0.5h，甲醇用量均为20mL，将3次提取液合并后过滤，减压浓缩，以水稀释，过D101大孔吸附树脂柱吸附，乙醇解吸，收集洗脱液，减压浓缩至干，甲醇溶解后定容至10mL容量瓶中，摇匀。色谱柱为AcchromXAmide(5μm,100A,4.6×250mm)酰胺柱，流动相为乙腈(B)和水(A)，梯度洗脱条件：0～30min，10～18％A；30～60min，18～15％A；流速1.0mL/min；柱温30℃；检测波长：203nm。附图说明图1AgilentZORBAXSB-C18色谱柱的HPLC图图2TnatureC18(4.6×250mm,5μm)色谱柱的HPLC图图3UnitaryC18(4.6×250mm,5μm,100A)色谱柱的HPLC图图4COSMOSILC18-AR-II(4.6×250mm,5μm)色谱柱的HPLC图图5AgilentEclipseXDB-C18(4.6×250mm,5μm)色谱柱的HPLC图图6AgilentZORBAXSB-C18色谱柱的HPLC图图7TnatureC18(4.6×250mm,5μm)色谱柱的HPLC图图8UnitaryC18(4.6×250mm,5μm,100A)色谱柱的HPLC图图9COSMOSILC18-AR-II(4.6×250mm,5μm)色谱柱的HPLC图图10AgilentEclipseXDB-C18(4.6×250mm,5μm)色谱柱的HPLC图图11AcchromXAmide(5μm,100A,4.6×250mm)色谱柱的HPLC图图12人参皂苷Ra1、Ra2、Ra3、Rb1、Rc标准品的HPLC图，其中1为人参皂苷Rc；2为人参皂苷Rb1；3为Ra2；4为Ra1；5为Ra3图13人参提取物的HPLC图，其中1为人参皂苷Rc；2为人参皂苷Rb1；3为Ra2；4为Ra1；5为Ra3实施例1按照2015版中国药典中人参皂苷含量测定的高效液相色谱条件，即色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶(AgilentZORBAXSB-C18本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用高效液相色谱法测定人参皂苷Rb

【技术特征摘要】
1.一种利用高效液相色谱法测定人参皂苷Rb1、Rc含量的方法，其特征在于所用色谱柱为酰胺柱。


2.权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于所用流动相为流动相为乙腈(B)和水(A)，梯度洗脱条件：0～30min，10～18％A；30～60min，18～15％A。流速1.0mL/min。


3.权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于柱温为30℃。


4.权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于检测器为紫外检测器。


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【专利技术属性】
技术研发人员：金永日，李绪文，王紫琪，张佳音，马双成，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22