一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法技术

本发明专利技术涉及农药残留检测领域，提供了一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法。本发明专利技术样品经过碳酸氢钠溶液和乙腈提取，Fmoc‑Cl衍生溶液的衍生，使用高效液相色谱测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线，外标法定量，测得平均回收率为68%‑117%，平均相对标准偏差（RSD）为0.7%‑8.2%，灵敏度高、重复性好。检出限为0.001mg/kg，浓缩苹果汁的定量检出限0.01 mg/kg，苹果粉、番茄酱、番茄粉和油菜籽的定量检出限为0.05mg/kg，相比GB 2763‑2016食品中农药最大残留限量中对辛菌胺在番茄、苹果和棉籽中的限量要求分别是0.5mg/kg、0.1mg/kg和0.1mg/kg，本发明专利技术的检出限和定量限更低。本发明专利技术的技术方案具有快速、简单，实用性高的特点，完全能够满足农药残留检测要求。

【技术实现步骤摘要】
一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法
本专利技术涉及农药残留检测领域，具体而言，特别涉及一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法。
技术介绍
辛菌胺的化学名称为N，N-二正辛基二乙烯三胺，是我国开发的广谱、低毒杀菌剂，对导致作物病害的多种植物真菌、细菌和病毒均有显著的杀灭和抑制作用。适用于烟草、苹果、水稻、辣椒、棉花的多种病害，尤其是病毒类病害的防治。GB2763-2016食品中农药最大残留限量中对辛菌胺在番茄、苹果和棉籽中的限量要求分别是0.5mg/kg、0.1mg/kg和0.1mg/kg。目前还没有食品中辛菌胺的残留检测标准，文献资料也不多。辛菌胺是一种烷基多胺类杀菌剂，其结构式如图1所示，含有三个仲胺，在水中易电离，具有很强的正电性，使其具有很大的亲水性。两侧各有一个直链辛烷基，又具有很大的疏水性，具有“双亲结构”，是一种“双亲分子”。本工作提出了采用HPLC，柱前衍生，荧光检测器检测苹果、番茄和菜籽中辛菌胺残留量的方法，该方法快速、简单，实用性高，完全能够满足农药残留检测要求。
技术实现思路
本专利技术为了弥补现有技术的不足，本专利技术提供了一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法。本专利技术是通过如下技术方案实现的：一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法，方法包括以下步骤：（1）试样的称取：称取浓缩苹果汁、苹果粉、番茄酱、番茄粉和油菜籽样品，然后加入碳酸氢钠，摇晃使样品完全润湿、分散，苹果粉和番茄粉样品需浸泡过夜；（2）试样的提取：向步骤（1）中样品加入碳酸氢钠溶液和乙腈，充分振摇，超声提取；（3）衍生反应：加入Fmoc-Cl衍生溶液，充分振摇，当乙腈层小于4mL，往提取液中加入氯化钠，静置10min，中间振摇2次，离心；将有机相通过0.22µm的滤膜过滤到进样小瓶中待测；（4）标准曲线的配置：称取辛菌胺标准物质，用少量二甲基亚砜（DMSO）后，用乙腈定容，配成标准储备液和标准中间液，用移液枪移取适量乙腈稀释定容，得到0mg/L-1.0mg/L的一系列校准溶液，加入碳酸氢钠溶液和Fmoc-Cl衍生溶液进行衍生反应，移取上层乙腈，过0.22μm有机系滤膜过滤到进样小瓶中待测；（5）测定和结果计算：将步骤（4）系列校准溶液进行HPLC测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤（3）中的待测液进行HPLC测定，测得样品液中辛菌胺的色谱峰面积，代入标准工作曲线，得到样品液中辛菌胺含量，根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中辛菌胺残留量。作为优选方案，步骤（1）试样的称取中浓缩苹果汁称取2g，苹果粉、番茄酱、番茄粉和油菜籽称取1g，然后加入2mL1mol/L碳酸氢钠，摇晃使样品完全润湿、分散，苹果粉和番茄粉需浸泡过夜。作为优选方案，步骤（2）试样的提取中向步骤（1）中样品加入4mL1mol/L碳酸氢钠溶液和4mL乙腈，充分振摇，超声提取30min。作为优选方案，步骤（3）衍生反应：加入0.3mL0.1%Fmoc-Cl衍生溶液，充分振摇。若发现乙腈层小于4mL，应往提取液中加入2g左右的氯化钠。静置10min，中间振摇2次，3500rpm/min下离心3min，将有机相通过0.22µm的滤膜过滤到进样小瓶中待HPLC分析。进一步地，步骤（3）中当样品为番茄酱、番茄粉及菜籽时，离心后把提取液转入另一塑料离心管中，加入12mL正己烷，涡旋液液萃取，移取6mL正己烷层到15mL离心管内，40℃水浴氮吹至干，1mL乙腈溶剂残渣，将有机相通过0.22µm的滤膜过滤到进样小瓶中待HPLC分析。作为优选方案，步骤（4）标准曲线的配置包括以下步骤：（1）标准储备液：准确称取10mg辛菌胺标准物质，用少量二甲基亚砜溶解后，用乙腈定容至10.0mL，配成1000mg/L标准储备液，于-20℃避光存储；（2）标准中间液：用移液枪准确移取0.01mL标准储备液，用乙腈定容到10.0mL，得到1.0mg/L中间标准混合溶液，-4℃避光存储，有效期1个月；（3）系列校准溶液：用移液枪分别准确移取0、0.005mL、0.01mL、0.025mL、0.05mL、0.1mL、0.5mL、1.0mL标准中间液到15mL塑料离心管中，用移液枪移取适量乙腈补充至1mL，得到0、0.005mg/L、0.01mg/L、0.025mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L的一系列校准溶液，该校准溶液现用现配；（4）系列校准溶液的衍生：以上系列校准溶液中用移液枪各加入1mL1.0mol/L碳酸氢钠溶液，涡旋混匀，再加入0.075mL0.1%Fmoc-Cl丙酮溶液，涡旋混匀；静置10min，加入2g氯化钠，涡旋溶解，3500rpm/min离心3min，移取上层乙腈过0.22μm有机系滤膜过滤到进样小瓶中待测。作为优选方案，步骤（5）中高效液相色谱的条件如下：色谱柱为ThermoHypersilGOLDC18（4.6×100mm，5μm，P/N：25005-154630），柱温：40℃，流动相：乙腈-水=95+5，流速：1.5mL/min，进样体积：50μL，荧光检测器激发波长为265nm，发射波长为304nm，增益值为100。进一步地，0.1%Fmoc-Cl衍生溶液的配制方法为准确称取0.1gFmoc-Cl用100mL丙酮溶解后即可，4℃避光保存。本专利技术由于采用了以上技术方案，与现有技术相比使其具有以下有益效果：1、本专利技术采用HPLC高效液相色谱法测定浓缩苹果汁、苹果粉、番茄酱、番茄粉和油菜籽等食品中残留辛菌胺残留含量，采用外标法定量，平均回收率为68%-117%；平均相对标准偏差（RSD）为0.7%-8.2%，灵敏度高、重复性好。2、本专利技术检出限为0.001mg/kg，浓缩苹果汁的定量检出限0.01mg/kg，苹果粉、番茄酱、番茄粉和油菜籽的定量检出限为0.05mg/kg，相比GB2763-2016食品中农药最大残留限量中对辛菌胺在番茄、苹果和棉籽中的限量要求分别是0.5mg/kg、0.1mg/kg和0.1mg/kg，本专利技术的检出限和定量限更低，因此，能够简便、快速、定性定量准确的食品中辛菌胺残留量，为保障我国人民食品安全及对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。3、建立了采用HPLC荧光检测器检测苹果、番茄和菜籽中辛菌胺残留量的方法，本专利技术简便、快速并能有效避免样品中基质干扰的样品。该方法快速、简单，实用性高，完全能够满足农药残留检测要求。本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述部分中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。附图说明本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：图1为辛菌胺的结构式；图2为Fmoc-辛菌胺衍生产物Massscan质谱图；图3为辛菌胺与芴甲氧羰酰氯衍生反应方程式；图4为Em=304nm，Ex=200-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：/n（1）试样的称取：称取浓缩苹果汁、苹果粉、番茄酱、番茄粉和油菜籽样品，然后加入碳酸氢钠，摇晃使样品完全润湿、分散，苹果粉和番茄粉需浸泡过夜；/n（2）试样的提取：向步骤（1）中样品加入碳酸氢钠溶液和乙腈，充分振摇，超声提取；/n（3）衍生反应：加入Fmoc-Cl 衍生溶液，充分振摇，当乙腈层小于4 mL，往提取液中加入氯化钠，静置10min，中间振摇2次，离心；将有机相通过0.22 µm的滤膜过滤到进样小瓶中待测；/n（4）标准曲线的配置：称取辛菌胺标准物质，用少量二甲基亚砜溶解后，用乙腈定容，配成标准储备液和标准中间液，用移液枪移取适量乙腈稀释定容，得到0 mg/L-1.0 mg/L的一系列校准溶液，加入碳酸氢钠溶液和Fmoc-Cl 衍生溶液进行衍生反应，移取上层乙腈过0.22μm有机系滤膜过滤到进样小瓶中待测；/n（5）测定和结果计算：将步骤（4）系列校准溶液进行HPLC测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤（3）中的待测液进行HPLC测定，测得样品液中辛菌胺的色谱峰面积，代入标准工作曲线，得到样品液中辛菌胺含量，根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中辛菌胺残留量。/n...

【技术特征摘要】
1.一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
（1）试样的称取：称取浓缩苹果汁、苹果粉、番茄酱、番茄粉和油菜籽样品，然后加入碳酸氢钠，摇晃使样品完全润湿、分散，苹果粉和番茄粉需浸泡过夜；
（2）试样的提取：向步骤（1）中样品加入碳酸氢钠溶液和乙腈，充分振摇，超声提取；
（3）衍生反应：加入Fmoc-Cl衍生溶液，充分振摇，当乙腈层小于4mL，往提取液中加入氯化钠，静置10min，中间振摇2次，离心；将有机相通过0.22µm的滤膜过滤到进样小瓶中待测；
（4）标准曲线的配置：称取辛菌胺标准物质，用少量二甲基亚砜溶解后，用乙腈定容，配成标准储备液和标准中间液，用移液枪移取适量乙腈稀释定容，得到0mg/L-1.0mg/L的一系列校准溶液，加入碳酸氢钠溶液和Fmoc-Cl衍生溶液进行衍生反应，移取上层乙腈过0.22μm有机系滤膜过滤到进样小瓶中待测；
（5）测定和结果计算：将步骤（4）系列校准溶液进行HPLC测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤（3）中的待测液进行HPLC测定，测得样品液中辛菌胺的色谱峰面积，代入标准工作曲线，得到样品液中辛菌胺含量，根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中辛菌胺残留量。


2.根据权利要求1所述的一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法，其特征在于，所述步骤（1）试样的称取中浓缩苹果汁称取2g，苹果粉、番茄酱、番茄粉和油菜籽称取1g，然后加入2mL1mol/L碳酸氢钠，摇晃使样品完全润湿、分散，苹果粉和番茄粉需浸泡过夜。


3.根据权利要求1所述的一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法，其特征在于，所述步骤（2）试样的提取中向步骤（1）中浸泡过夜的样品加入4mL1mol/L碳酸氢钠溶液和4mL乙腈，充分振摇，超声提取30min。


4.根据权利要求1所述的一种食品中辛菌胺残留量的HPLC检测方法，其特征在于，所述步骤（3）衍生反应：加入0.3mL0.1%Fmoc-Cl衍生溶液，充分振摇；若发现乙腈层小于4mL，应往提取液中加入2g左右的氯化钠；静置10min，中间振摇2次，3500rpm/min下离心3min，将有机相通过0.22µm的滤膜过滤到进样小瓶中待HPLC分析。


5.根据权利要求4所述的一种食品中辛菌胺残留量...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵春华，邓锁成，张伟伟，付萌，王永春，
申请(专利权)人：诺安实力可商品检验青岛有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37