一种蔬菜中异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯残留检测方法技术

本发明专利技术提供了一种蔬菜中异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯残留检测方法，具体步骤如下：S1试样的制备；S2试样的称取；S3试样的提取；S4衍生反应。通过本发明专利技术的技术方案，确定了异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯在番茄酱、黄瓜和姜中残留的提取和净化方法；异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯和9

【技术实现步骤摘要】
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（甲氨甲基）蒽衍生反应液，拧紧瓶盖，室温放置16h后，LC
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MS/MS检测；测得样品液中异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯的色谱峰面积，代入标准工作曲线，得到样品液中异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯含量，根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯含量。
[0006]作为优选方案，S1中的蔬菜样品为番茄、黄瓜、番茄酱、鲜姜中的一种时，加入3mL纯水。
[0007]进一步地，S1中的蔬菜样品为姜粉时，加入5mL纯水。
[0008]作为优选方案，还包括S5空白试验：不称取试样的情况下，重复S2至S4。
[0009]作为优选方案，标准工作曲线的配制过程，包括以下具体步骤：T1标准储备液：分别准确称取10mg的异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯标准物质，用少量乙酸乙酯溶解后，用乙酸乙酯定容至10.0 mL，配成1000 mg/L标准储备液，于
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20℃避光存储；T2混合标准溶液A：用移液枪分别准确移取0.01 mL标准储备液，用乙酸乙酯定容到10.0 mL，得到1.0 mg/L混合标准溶液A，
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4℃避光存储，有效期1个月；T3系列校准溶液：用移液枪准确移取50微升混合标准溶液A，用乙酸乙酯定容至5.0mL，得到10μg/L混合标准工作液B，现用现配；分别移取0μL、20μL、60μL、100μL、140μL、200μL、300μL、1000μL体积的混合标准工作液B，用乙酸乙酯定容至1000μL，得到系列校准溶液；T4系列校准溶液的衍生：以上系列校准溶液中各加入60μL520mg/L的 9
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（甲氨甲基）蒽衍生反应液，拧紧瓶盖，室温放置16h后，上机LC
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MS/MS检测，该溶液现用现配，以分析物的峰面积为纵坐标y，质量浓度为横坐标x，绘制标准工作曲线。
[0010]进一步地，还包括S6添加试验：添加水平10μg/kg、30μg/kg、50μg/kg、70μg/kg、100μg/kg、150μg/kg，称取试样后，分别准确加入异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯的1.0mg/L混合标准溶液A10μL、30μL、50μL、70μL、100μL和150μL充分混匀后，重复S2至S4；为验证方法的精密度和定量限，10μg/kg、30μg/kg、50μg/kg水平添加分别做6个平行。
[0011]进一步地，还包括S7基质匹配校准曲线的制备：选取阴性样品分别添加系列浓度水平的标准物质，添加水平同S6。
[0012]进一步地，衍生反应液（520mg/L）的配制过程为称取9
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（甲氨甲基）蒽0.013g，二氯甲烷溶解并转移至25mL容量瓶中，定容至刻度即可，避光保存，现用现配。
[0013]作为优选方案，S4中的LC
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MS/MS的色谱条件为色谱柱：Agilent ZORBAX EclipsePlus C18 2.1
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100mm 1.8μm PN：959758
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902；柱温：40℃；进样体积：1μL； 流动相：A：1mmol/L 甲酸氨溶液（含0.1%甲酸）B： 甲醇 ；流速：0.4 mL/min；梯度程序： 0.00
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0.60 min，A：50%
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50%；0.60
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3.00 min，A：50%
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5%；3.00
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4.00 min，A：5%
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5%；4.00
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4.50 min，A：5%
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50%；4.50
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6.00 min，A：50%
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50%；质谱条件为雾化器温度：250℃，雾化器流速：14L/min，雾化器压力：40pis，鞘层气体温度：325℃，鞘层气体流速：10L/min，正模式毛细管电压：4000V，正模式RF透镜高压电压：150V，RF透镜低压电压：60V，MRM选择离子模式；异硫氰酸烯丙酯衍生物的母离子为321.1 m/z，子离子为191.1 m/z和143.1 m/z；异硫氰酸甲酯衍生物的母离子为295.1 m/z，子离子为191.1 m/z和117.1 m/z。
[0014]本专利技术由于采用了以上技术方案，与现有技术相比使其具有以下有益效果：1.确定了异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯在番茄酱、黄瓜和姜中残留的提取和净化方法。
[0015]2.确定了异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯和9
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（甲氨甲基）蒽化学反应的反应介质、反应时间及衍生剂的量，及衍生产物的稳定性。
[0016]3.确定了异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯和9
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（甲氨甲基）蒽衍生产物在高效液相色谱二极管阵列检测器检测条件。
[0017]4.确定了异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯和9
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（甲氨甲基）蒽衍生产物在高效液相色谱串联质谱仪检测参数。
[0018]5.确定了异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯和9
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（甲氨甲基）蒽衍生产物的结构。
[0019]6.确定了异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯在番茄酱、黄瓜和姜中残留检测的高效液相色谱串联质谱仪法。
[0020]7.本方法通过衍生反应改变了化合物的理化性质把酯类化合物转移到灵敏度更高的高效液相色谱串联质谱上检测。
[0021]8.通过衍生反应改善了前处理的净化效果，提高了方法的专属性。
[0022]9.降低了检测的灵敏度，提高了检测效率，一个样品的仪器分析时间有30min，缩短到6min。
[0023]本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述部分中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。
附图说明
[0024]本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：图1为异硫氰酸甲酯（左）和异硫氰酸烯丙酯（右）结构式；图2为系统空白衍生产物色谱图；图3 为5mg/L混合标准品衍生产物色谱图（异硫氰酸甲酯衍生产物2.577min，异硫氰酸烯丙酯衍生产物3.564min）；图4为5mg/L异硫氰酸酯衍生产物光谱图；图5为蒽标准溶液扫描光谱图；图6为异硫氰酸甲酯与9
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（甲氨甲基）蒽衍生反应方程式；图7为异硫氰酸烯丙酯与9
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（甲氨甲基）蒽衍生反应方程式；图8为异硫氰酸甲酯衍生产物结构图；图9为异硫氰酸烯丙酯衍生产物结构图；图10为5mg/L 异硫氰酸烯丙酯衍生物溶剂标准品Ms scan TIC色谱图；图11为5mg/L 异硫氰酸烯丙酯衍生物溶剂标准品在2.807min
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2.997min平均质谱图；图12为5mg/L 异硫氰酸烯丙酯衍生物溶剂标准品子离子扫描质谱图；图13为5mg/L 异硫氰酸甲酯衍生物溶剂标准品Ms scan TIC色谱图；图14为5mg/L 异硫氰酸甲酯衍生物溶剂标准品在0.741min
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蔬菜中异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯残留检测方法，其特征在于，具体步骤如下：S1试样的制备：选取蔬菜样品，按照GB2763相关要求进行取样，将样品切碎缩分后制成匀浆，装入洁净的样品袋内
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18℃冷冻存储待测；S2试样的称取：称取试样1g到15mL塑料离心管内，加入3mL
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5mL纯水，涡旋混匀，混匀后，静置2小时；S3试样的提取：加入5mL乙酸乙酯，在高速组织研磨机上1300r/min振荡提取2min；然后转速3500r/min，离心3min；S4衍生反应：移取适量上层有机相，过0.22μm有机系滤膜后转移到2mL塑料离心管内；用移液器准确移取100μL到进样小瓶内，加入900μL乙酸乙酯，再加入60μL520mg/L的9
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（甲氨甲基）蒽衍生反应液，拧紧瓶盖，室温放置16h后，LC
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MS/MS检测；测得样品液中异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯的色谱峰面积，代入标准工作曲线，得到样品液中异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯含量，根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯含量。2.根据权利要求1所述的一种蔬菜中异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯残留检测方法，其特征在于，所述S1中的蔬菜样品为番茄、黄瓜、番茄酱、鲜姜中的一种时，加入3mL纯水。3.根据权利要求2所述的一种蔬菜中异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯残留检测方法，其特征在于，所述S1中的蔬菜样品为姜粉时，加入5mL纯水。4.根据权利要求1所述的一种蔬菜中异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯残留检测方法，其特征在于，还包括S5空白试验：不称取试样的情况下，重复S2至S4。5.根据权利要求1所述的一种蔬菜中异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯残留检测方法，其特征在于，所述标准工作曲线的配制过程，包括以下具体步骤：T1标准储备液：分别准确称取10mg的异硫氰酸甲酯和异硫氰酸烯丙酯标准物质，用少量乙酸乙酯溶解后，用乙酸乙酯定容至10.0mL，配成1000mg/L标准储备液，于
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20℃避光存储；T2混合标准溶液A：用移液枪分别准确移取0.01mL标准储备液，用乙酸乙酯定容到10.0mL，得到1.0mg/L混合标准溶液A，
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4℃避光存储，有效期1个月；T3系列校准溶液：用移液枪准确移取50微升混合标准溶液A，用乙酸乙酯定容至5.0mL，得到10μg/L混合标准工作液B，现用现配；分别移取0μL、20μL、60μL、100μL、140μL、200μL、300μL、1000μL体积的混合标准工作液B，用乙酸乙酯定容至1000μL，得到系列校准溶液；T4系列校准溶液的衍生：以上系列校准溶液中各加入60μL520mg/L的9
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（甲氨甲基）蒽衍生反应液，拧紧瓶盖，室温放置16h后，上机LC
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MS/MS检测，该溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵春华，张伟伟，付萌，王永春，赵同飞，
申请(专利权)人：诺安实力可商品检验青岛有限公司，
类型：发明
国别省市：