一种从金钗石斛中提取化合物的工艺及应用制造技术

本发明专利技术提供一种从金钗石斛中提取化合物的工艺，A)将金钗石斛粉碎，用乙醇水溶液浸提，浸提液合并浓缩，得到浸膏A；B)将所述浸膏A与水混合，乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液浓缩制成浸膏B；C)取浸膏B，过减压柱，经梯度洗脱，获得16个流分；D)将流分13过反相柱，进行梯度洗脱，得到14个流分；E)第7流分过葡聚糖凝胶柱，以甲醇和氯仿的混合液进行洗脱，得到18个流分，合并第15～17流分，经半制备HPLC纯化，得到式I和式II所示化合物。本发明专利技术研究表明式I和II所示的化合物能够抑制α‑葡萄糖苷酶的活性和抑制NO的产生，体现抗炎活性。表明该化合物能够用于制备治疗和/或预防糖尿病和炎症的食品以及药品。

A process for extracting compounds from Dendrobium nobile and its application

【技术实现步骤摘要】
一种从金钗石斛中提取化合物的工艺及应用
本专利技术属于生物
，尤其涉及一种从金钗石斛中提取化合物的工艺及应用。
技术介绍
近年来，随着人们生活水平的提高，糖尿病的患病率也在逐年增加，据2017年国际糖尿病联盟(IDF)发布的数据显示，全世界约有4.25亿人(20-79岁)患有糖尿病，其中中国有1.14亿，位居世界第一，根据这一趋势，到2045年，全球将有6.29亿人是糖尿病患者。此外，糖尿病的发病率高达12％，并且在逐渐趋于年轻化。糖尿病(Diabetesmellitus，DM)是一种多种因素和病因造成的代谢紊乱疾病，它的特征在于慢性的高血糖症。其发病与饮食、遗传、环境因素和免疫系统功能紊乱等有密切关系。糖尿病主要分为三类，I型、II型和妊娠糖尿病，其中II型患者占总糖尿人数的90％以上，但目前对其发生发展的精确分子机制尚不完全清楚。近几年，积累的诸多临床实验证据揭示II型糖尿病的发病机制与肥胖及炎症所引起的胰岛素抵抗有关。炎症是机体、细胞对外界物理、化学和生物等有害刺激做出的一系列免疫应答反应，反应的常见表现有发热、红肿、疼痛以及功能障碍等。一般来说，炎症是组织器官对损伤或者感染做出的防御反应，对机体是有益的，但是长期的炎症反应会诱导机体产生过激的异常反应，甚至会诱发许多疾病，如糖尿病、动脉粥样硬化、老年痴呆症、癌症等。目前临床上常使用甾体激素和非甾体类(阿司匹林、双氯芬酸和布洛芬等)治疗炎症，人体服用后会产生一系列的毒副作用，如肝脏和胃肠道损伤以及心血管系统损伤等。此外，植物源药物药效缓慢温和、持久性强，毒副作用小且不易产生机体耐受，因此有必要从植物中寻找具有降血糖和抗炎活性的物质，为新型糖尿病和炎症药物的研发提供先导化合物。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种从金钗石斛中提取化合物的工艺及应用，本专利技术中的工艺从药用植物金钗石斛的茎中提取得到式I和II化合物，能有效抑制血糖水平关键酶的活性，以LPS诱导RAW264.7产生NO为模型进行抗炎活性评价，I和II所示的化合物能够抑制NO的产生，体现抗炎活性。本专利技术提供一种从金钗石斛中提取化合物的工艺，包括以下步骤：A)将金钗石斛粉碎，用1～3倍体积的乙醇水溶液浸提2～5次，所得浸提液过滤后合并浓缩，得到浸膏A；B)将所述浸膏A与水制备成混悬液，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，筛选三种萃取液后，将乙酸乙酯萃取液浓缩制成浸膏B；C)取浸膏B，过减压柱，经石油醚和乙酸乙酯混合洗液梯度洗脱，然后用丙酮冲柱，收集流分，将所得各个流分浓缩合并，最终获得16个流分，记为Fr.1～Fr.16；D)将流分Fr.13过反相柱，以30～100％的甲醇水溶液进行梯度洗脱，得到14个流分，记为Fr.13-1～Fr.13-14；E)取流分Fr.13-7过葡聚糖凝胶柱，以甲醇和氯仿的混合液进行洗脱，得到18个流分，记为Fr.13-7-1～Fr.13-7-18，合并Fr.13-7-15～Fr.13-7-17流分，经半制备HPLC纯化，在tR＝13.5min得到式I所示化合物，在tR＝16.4min得到式II所示化合物；优选的，所述步骤B)中浸膏A与水的体积比为1∶(0.5～2)；所述浸膏A与石油醚的体积比为1∶(0.5～2)；所述浸膏A与乙酸乙酯的体积比为1∶(0.5～2)；所述浸膏A与正丁醇的体积比为1∶(0.5～2)。优选的，所述步骤C)中石油醚和乙酸乙酯混合洗液的梯度洗脱具体为：石油醚和乙酸乙酯的体积比在80～120小时内由20∶1均匀降至0∶1，所述梯度洗脱的总时间优选为90～110小时，更优选为100小时。优选的，所述步骤C)将得到的各个流分减压浓缩，经过薄层层析点板检测，根据显色合并相似流分。优选的，所述步骤D)中梯度洗脱具体为：依次以质量浓度30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％和100％的甲醇水溶液进行洗脱，每个洗脱梯度的洗脱时间相等，洗脱总时间为24～48小时，更优选为32～36小时。优选的，所述步骤E)中甲醇与氯仿的体积比为1∶(0.5～2)。本专利技术提供一种如上文所述的工艺提取得到的式I所示化合物和式II所示化合物在制备防治糖尿病和缓解炎症的药物中的应用。优选的，所述防治糖尿病的药物为α-葡萄糖苷酶活性抑制剂；所述缓解炎症的药物为NO的产生抑制剂。本专利技术提供一种药物制剂，包括上文所述的工艺提取得到的式I所示化合物或式II所示化合物以及药学上可接受的辅料。优选的，所述药物制剂的剂型为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、汤剂、膏剂、露剂、口服液剂、滴丸剂或糖浆剂。本专利技术提供了一种从金钗石斛中提取化合物的工艺，包括以下步骤：A)将金钗石斛粉碎，用1～3倍体积的乙醇水溶液浸提2～5次，所得浸提液过滤后合并浓缩，得到浸膏A；B)将所述浸膏A与水制备成混悬液，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，将乙酸乙酯萃取液浓缩制成浸膏B；C)取浸膏B，过减压柱，经石油醚和乙酸乙酯混合洗液梯度洗脱，最后用丙酮冲柱，收集流分，将所得各个流分浓缩合并，最终获得16个流分，记为Fr.1～Fr.16；D)将流分Fr.13过反相柱，以30～100％的甲醇水溶液进行梯度洗脱，得到14个流分，记为Fr.13-1～Fr.13-14；E)取Fr.13-7过葡聚糖凝胶柱，以甲醇和氯仿的混合液进行洗脱，得到18个流分，记为Fr.13-7-1～Fr.13-7-18，合并Fr.13-7-15～Fr.13-7-17流分，经半制备HPLC纯化，在tR＝13.5min得到式I所示化合物，在tR＝16.4min得到式II所示化合物。本专利技术研究表明式I和II所示的化合物能够抑制α-葡萄糖苷酶的活性，以LPS诱导RAW264.7产生NO为模型进行抗炎活性评价，I和II所示的化合物能够抑制NO的产生，体现抗炎活性。因此表明该化合物能够用于制备治疗和/或预防糖尿病和炎症的食品和/或药品。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。图1是本专利技术实施例1中式I所示化合物的1HNMR图谱；图2是本专利技术实施例1中式I所示化合物的13CNMR+DEPT135图谱；图3是本专利技术实施例1中式I所示化合物的HSQC图谱；图4是本专利技术实施例1中式II所示化合物的1HNMR图谱；图5是本专利技术实施例1中式II所示化合物的13CNMR+DEPT135图谱；图6是本专利技术实施例1中式II所示化合物的HSQC图谱。具体实施方式本专利技术提供了一种从金钗石斛中提取化合物的工艺，包括以下步骤：A)将金钗石斛粉碎，用1～3倍体积的乙醇水溶液浸提2～5次，所得浸提液过滤后合并浓缩，得到浸膏A；B)将所本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从金钗石斛中提取化合物的工艺，包括以下步骤：/nA)将金钗石斛粉碎，用1～3倍体积的乙醇水溶液浸提2～5次，所得浸提液过滤后合并浓缩，得到浸膏A；/nB)将所述浸膏A与水制备成混悬液，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，筛选三种萃取液后，将乙酸乙酯萃取液浓缩制成浸膏B；/nC)取浸膏B，过减压柱，经石油醚和乙酸乙酯混合洗液梯度洗脱，然后用丙酮冲柱，收集流分，将所得各个流分浓缩合并，最终获得16个流分，记为Fr.1～Fr.16；/nD)将流分Fr.13过反相柱，以30～100％的甲醇水溶液进行梯度洗脱，得到14个流分，记为Fr.13-1～Fr.13-14；/nE)取流分Fr.13-7过葡聚糖凝胶柱，以甲醇和氯仿的混合液进行洗脱，得到18个流分，记为Fr.13-7-1～Fr.13-7-18，合并Fr.13-7-15～Fr.13-7-17流分，经半制备HPLC纯化，在t

【技术特征摘要】
1.一种从金钗石斛中提取化合物的工艺，包括以下步骤：
A)将金钗石斛粉碎，用1～3倍体积的乙醇水溶液浸提2～5次，所得浸提液过滤后合并浓缩，得到浸膏A；
B)将所述浸膏A与水制备成混悬液，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，筛选三种萃取液后，将乙酸乙酯萃取液浓缩制成浸膏B；
C)取浸膏B，过减压柱，经石油醚和乙酸乙酯混合洗液梯度洗脱，然后用丙酮冲柱，收集流分，将所得各个流分浓缩合并，最终获得16个流分，记为Fr.1～Fr.16；
D)将流分Fr.13过反相柱，以30～100％的甲醇水溶液进行梯度洗脱，得到14个流分，记为Fr.13-1～Fr.13-14；
E)取流分Fr.13-7过葡聚糖凝胶柱，以甲醇和氯仿的混合液进行洗脱，得到18个流分，记为Fr.13-7-1～Fr.13-7-18，合并Fr.13-7-15～Fr.13-7-17流分，经半制备HPLC纯化，在tR＝13.5min得到式I所示化合物，在tR＝16.4min得到式II所示化合物；





2.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述步骤B)中浸膏A与水的体积比为1∶(0.5～2)；
所述浸膏A与石油醚的体积比为1∶(0.5～2)；所述浸膏A与乙酸乙酯的体积比为1∶(0.5～2)；所述浸膏A与正丁醇的体积比为1∶(0.5～2)。


3.根据权利要求1所述的工艺，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾军，陈惠琴，戴好富，曹雪，梅文莉，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院热带生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：海南;46