一种斜纹夜蛾核型多角体病毒的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种斜纹夜蛾核型多角体病毒的制备方法，其中，该方法包括以下步骤：(1)病毒的浓缩；(2)细胞的培养；(3)病毒的接种等步骤。本发明专利技术的方法可以有效的在原来的基础上提高多角体病毒的生产效率，缩短多角体病毒的生产周期，降低了生产成本。根据本发明专利技术的制备方法得到的斜纹夜蛾核型多角体病毒特异性强，对斜纹夜蛾特效，对人畜及其他生物安全，对抗药性、顽固性害虫作用突出，使用后不会产生抗药性。

Preparation of Spodoptera litura nuclear polyhedrosis virus

【技术实现步骤摘要】
一种斜纹夜蛾核型多角体病毒的制备方法
本专利技术属于生物杀虫剂
，特别是涉及一种斜纹夜蛾核型多角体病毒的制备方法。
技术介绍
随着农业生产的发展，人们迫切希望绿色甚至有机消费，并迫切希望有对环境和人类无危害的农药来保证作物的生长和食用的安全。目前，农民施用的农药，大多是化工原料制成，化学农药能快速杀死害虫提高农作物产量，但其亦会残留在农作物上或进入人类生态循环系统中，危害人类的身体健康，农作物的污染是其叶茎直接吸附和从根部渗透吸收，化学农药的施放，如农药残留物有有机磷、有机氯等，人类每天在摄取含有农药残留物的蔬菜、水果以及水等都会危害身心健康。因此施用化学农药过多会使得这些农作物常因残留农药成分过高而被国内外销售市场拒绝，造成不少农产品滞销。化学农药经常使用会使部分害虫产生抗药性，这会使得害虫防治变得更加艰难，但以生物治虫的生物农药对农作物无任何副作用，且害虫不会产生抗药性，能更好的为农作物的生长提供保障，对人类的生态循环系统也无任何的毒副作用。昆虫病毒不仅被广泛用作外源基因的表达载体，以编码医学、药学和兽医学上重要的蛋白物质，而且还因其特异性强的优势而用来作为农业、林业上害虫的重要杀虫剂。目前商业上或者相关技术上的多角体病毒产品大多数还是通过培养昆虫幼虫感染病毒所得，这种方法既昂贵、费时，又很难大规模生产，无法适应现代化生产的需要。由此可见，上述现有的斜纹夜蛾核型多角体病毒在制备方法上，显然仍存在有不便与缺陷，而亟待加以进一步改进。为了解决斜纹夜蛾核型多角体病毒的制备方法中存在的问题，相关厂商莫不费尽心思来谋求解决之道，但长久以来一直未见适用的设计被发展完成，而一般又没有适切的方法能够解决上述问题，此显然是相关业者急欲解决的问题。有鉴于上述现有的斜纹夜蛾核型多角体病毒的制备方法所存在的缺陷，本专利技术人基于从事此类产品设计制造多年丰富的实务经验及专业知识，并配合学理的运用，积极加以研究创新，以期创设一种新的斜纹夜蛾核型多角体病毒的制备方法，能够改进一般现有的斜纹夜蛾核型多角体病毒的制备方法，使其更具有实用性。经过不断的研究、设计，并经反复试作及改进后，终于创设出确具实用价值的本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于，克服现有的斜纹夜蛾核型多角体病毒的制备方法存在的缺陷，而提供一种新的斜纹夜蛾核型多角体病毒的制备方法，所要解决的技术问题是使其产量高，生产周期短，从而更加适于实用，且具有产业上的利用价值。本专利技术的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。根据本专利技术提出的一种斜纹夜蛾核型多角体病毒的制备方法，其中，该方法包括以下步骤：(1)病毒的浓缩：将游离态的斜纹夜蛾核型多角体病毒感接种到纹夜蛾细胞系，培养一段时间后经离心分离得上清液，将上清液过滤，即得浓缩型的病毒液，置于冰箱中保存；(2)细胞的培养：将斜纹夜蛾SL-1细胞系培养至300-400w/ml后分装到离心管中离心分离，将分离得到的细胞沉淀物重悬，然后分装并稀释成不同密度的细胞液；(3)病毒的接种：将上述步骤(1)中制备的游离态的斜纹夜蛾核型多角体病毒接种到上述步骤(2)中制备得到的细胞液中并培养一段时间后经离心分离，收集得到的上清液用作再次侵染的毒源，收集得到的细胞沉淀物经粉碎后即制得斜纹夜蛾核型多角体病毒。前述的制备方法，其中，所述步骤(1)中所述斜纹夜蛾细胞系的密度为200w/ml。前述的制备方法，其中，所述步骤(1)中所述游离态的斜纹夜蛾核型多角体病毒与所述斜纹夜蛾细胞系按照体积比为5:100的比例进行接种。前述的制备方法，其中，所述步骤(1)中所述斜纹夜蛾细胞系的体积为200ml。前述的制备方法，其中，所述步骤(1)中所述培养时间为4-5天，所述离心条件为：转速8000r/min，时间：20min。前述的制备方法，其中，所述步骤(2)中所述离心条件为：转速1000r/min，时间：5min。前述的制备方法，其中，所述步骤(2)中所述重悬后的细胞密度为600w/ml。前述的制备方法，其中，所述步骤(2)中所述稀释后的细胞液密度为100-300w/ml。前述的制备方法，其中，所述步骤(3)中所述游离态的斜纹夜蛾核型多角体病毒与培养后的细胞液按照体积比为(2-10):100的比例进行接种。前述的制备方法，其中，所述步骤(3)中所述培养时间为7-10天，所述离心条件为：转速8000r/min，时间20min。借由上述技术方案，本专利技术的一种斜纹夜蛾核型多角体病毒的制备方法至少具有下列优点：(1)本专利技术的方法是在离体大规模培养昆虫细胞来大量生产多角体病毒的基础上，分别对接毒比例和接毒时细胞密度进行了优化，可以有效的在实验室基础上提高多角体病毒的生产效率，缩短多角体病毒的生产周期，降低了生产成本。(2)根据本专利技术的制备方法得到的斜纹夜蛾核型多角体病毒对斜纹夜蛾有较强的专一性，且其选择性强，不伤天敌，对斜纹夜蛾特效，对人畜及其他生物安全，对抗药性、顽固性害虫作用突出，使用后不会产生抗药性。(3)根据本专利技术的制备方法得到的斜纹夜蛾核型多角体病毒后效作用显著，病毒能够在数代害虫之间传播流行，药效持续时间长。有效成分含量高，剂型先进，用量少，使用方便。综上所述，本专利技术特殊的斜纹夜蛾核型多角体病毒的制备方法，能够有效提高多角体病毒的产量并缩短生产周期。其具有上述诸多的优点及实用价值，并在同类方法中未见有类似的设计公开发表或使用而确属创新，其不论在方法上或产品性能上皆有较大的改进，在技术上有较大的进步，并产生了好用及实用的效果，且较现有的方法具有增进的多项功效，从而更加适于实用，而具有产业的广泛利用价值，诚为一新颖、进步、实用的新设计。上述说明仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够更清楚了解本专利技术的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本专利技术的较佳实施例详细说明如后。具体实施方式为更进一步阐述本专利技术为达成预定专利技术目的所采取的技术手段及功效,以下结合较佳实施例，对依据本专利技术提出的斜纹夜蛾核型多角体病毒的制备方法其具体实施方式、方法、步骤、结构、特征及其功效，详细说明如后。实施例1-6本专利技术的实施例均按照以下方法实施：一、所用的实验器材包括：移液枪Thermo高速离心机(货号：75004250)生化培养箱(型号：ZXSD-1160)无菌净化台(博迅型号：BJ-2CD)中空纤维柱100Kd(Spectrum公司)二、具体步骤如下：1、斜纹夜蛾核型多角体病毒BV的浓缩将游离态的斜纹夜蛾核型多角体病毒接种到纹夜蛾SL-1细胞，接种时细胞密度为200w/ml(万/毫升)，接毒比例为5％，接种体积分别为200ml，培养4-5天后收毒。将接毒培养4-5天的细胞培养液分装到50ml离心管，8000r/min离心20min，去除细胞碎片，上清用100kd的中空纤维柱进行10倍浓缩，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种斜纹夜蛾核型多角体病毒的制备方法，其中，该方法包括以下步骤：/n(1)病毒的浓缩：将游离态的斜纹夜蛾核型多角体病毒接种到纹夜蛾SL-1细胞系，培养一段时间后经离心分离得上清液，将上清液浓缩，即得浓缩型的病毒液，置于冰箱中保存；/n(2)细胞的培养：将斜纹夜蛾SL-1细胞系培养至300-400w/ml后分装到离心管中离心分离，将分离得到的细胞沉淀物重悬，然后分装并稀释成不同密度的细胞液；/n(3)病毒的接种：将上述步骤(1)中制备的游离态的斜纹夜蛾核型多角体病毒接种到上述步骤(2)中制备得到的细胞液中并培养一段时间后经离心分离，收集得到的上清液用作再次侵染的毒源，收集得到的细胞沉淀物经粉碎后即制得斜纹夜蛾核型多角体病毒。/n

【技术特征摘要】
1.一种斜纹夜蛾核型多角体病毒的制备方法，其中，该方法包括以下步骤：
(1)病毒的浓缩：将游离态的斜纹夜蛾核型多角体病毒接种到纹夜蛾SL-1细胞系，培养一段时间后经离心分离得上清液，将上清液浓缩，即得浓缩型的病毒液，置于冰箱中保存；
(2)细胞的培养：将斜纹夜蛾SL-1细胞系培养至300-400w/ml后分装到离心管中离心分离，将分离得到的细胞沉淀物重悬，然后分装并稀释成不同密度的细胞液；
(3)病毒的接种：将上述步骤(1)中制备的游离态的斜纹夜蛾核型多角体病毒接种到上述步骤(2)中制备得到的细胞液中并培养一段时间后经离心分离，收集得到的上清液用作再次侵染的毒源，收集得到的细胞沉淀物经粉碎后即制得斜纹夜蛾核型多角体病毒。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤(1)中所述斜纹夜蛾细胞系的密度为200w/ml。


3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤(1)中所述游离态的斜纹夜蛾核型多角体病毒与所述斜纹夜蛾细胞系按照体积比为5:100的比例进行接种。


4.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：李明，鲁平，叶发林，袁飞，金振鹏，
申请(专利权)人：江苏艾津农业科技服务有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32