一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒及检测非洲猪瘟病毒的方法技术

本发明专利技术提供了一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒，包括含有ASFV结构蛋白基因VP73片段的质粒；VP73的上游引物，VP73的下游引物，β‑Actin的上游引物，β‑Actin的下游引物；VP73的探针，β‑Actin的探针。该试剂盒操作简便，价格低廉，耗时短，具有较高的灵敏性和特异性，具有广阔的市场前景和商业价值。本发明专利技术还提供了一种检测非洲猪瘟病毒方法，以含有ASFV结构蛋白基因VP73片段的质粒作为阳性对照，以猪肌动蛋白基因β‑Actin作为内参对照基因；从检测的最初阶段进行监控，能够监测整个病毒检测过程，完美的体现了内参质控的作用，增加了检测结果的准确性。

A kit for detecting African swine fever virus and a method for detecting African swine fever virus

【技术实现步骤摘要】
一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒及检测非洲猪瘟病毒的方法
本专利技术涉及生物检测
，具体涉及一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒及检测非洲猪瘟病毒的方法。
技术介绍
在科学实验或者其他行业中，对样品中含有的待测病毒进行检测时，一般都需要选用一个阳性对照样本和内参基因样本，来指示实验结果的正确性。现有技术中，错误或者不当选用阳性对照样本和内参基因样本，都不能很好的指示整个病毒检测过程，容易造成假阳性或者假阴性现象，降低检测结果的准确性。因此，需要选择合适的阳性对照样本和内参基因样本，来准确指示检测结果。
技术实现思路
针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本专利技术提供一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒及检测非洲猪瘟病毒的方法。为了实现上述目的，本专利技术提供以下技术方案：一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒，包括含有ASFV结构蛋白基因VP73片段的质粒。进一步地，该试剂盒还包括VP73的上游引物，VP73的下游引物，β-Actin的上游引物，β-Actin的下游引物；进一步地，该试剂盒还包括VP73的探针，β-Actin的探针。进一步地，所述VP73的上游引物为：5’-CGGATATGACTGGGACAACCA-3’(SEQIDNO.：1)，所述VP73的下游引物为：5’-AGGGATCTACAAGCGTGTAAACG-3’(SEQIDNO.：2)，所述β-Actin的上游引物为：5’-CCAGTTCGCCATGGATGAC-3’(SEQIDNO.：4)，所述β-Actin的下游引物为：5’-ATGCCGGAGCCGTTGTC-3’(SEQIDNO.：5)，进一步地，所述VP73的探针为：5’-FAM-ACACCTTTAGAGGGCG-TAMRA-3’(SEQIDNO.：3)，所述β-Actin的探针为：5’-Cy5-TATTGCTGCGCTCGTG-BHQ2-3’(SEQIDNO.：6)，其中其中VP73探针和β-Actin探针中的FAM、Cy5为荧光基团，TAMRA和BHQ2为淬灭基团。一种检测非洲猪瘟病毒的方法，该方法采用以上所述的试剂盒，以含有ASFV结构蛋白基因VP73片段的质粒溶液作为阳性对照标准品，以猪肌动蛋白基因β-Actin作为内参对照基因，包括以下步骤：(1)提取待测样本的核酸；(2)以待测样本的核酸和含有ASFV结构蛋白基因VP73片段的质粒为模板进行基因扩增反应；(3)对扩增结果进行分析。进一步地，含有ASFV结构蛋白基因VP73片段的质粒溶液的配置：向含有ASFV结构蛋白基因VP73片段的质粒干粉中加入RnaseFreeWater溶解，得到质粒溶液，质粒溶液中质粒的浓度为0-106Copies/mL。进一步地，所述基因扩增反应为荧光定量PCR反应。进一步地，荧光定量PCR反应的反应体系中，VP73的上游引物，VP73的下游引物，β-Actin的上游引物，β-Actin的下游引物；VP73的探针，β-Actin的探针的使用浓度均为0.2-1μM。本专利技术的有益效果是：(1)本专利技术提供的检测ASFV的试剂盒通过选取β-Actin作为内参质控基因，既监控了样品核酸的提取过程又监控了基因扩增反应过程，增大了检测结果的准确性，减少了假阴性结果。(2)本专利技术提供的试剂盒能够广泛用于各种待测样品中ASFV的检测；当待测样品为血液样本时，采用该试剂盒能够方便、快速地检测出血液样本中是否含有非洲猪瘟病毒；当待测样本为其他样本，例如科学研究中自行制备的样本时，应用该试剂盒能够快速、准确的检测出待测样本中ASFV的浓度。该试剂盒的使用方法操作简便，价格低廉，耗时短，具有较高的灵敏性和特异性，具有广阔的市场前景和商业价值。(3)本专利技术以β-Actin基因作为内参对照基因，它在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时用来做参照物，可增加了检测结果的准确性。(4)本专利技术提供的检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的检测方法，以含有ASFV结构蛋白基因VP73片段的质粒溶液作为阳性对照标准品，以猪肌动蛋白基因β-Actin作为内参对照基因，从样品处理的最初步骤监测整个病毒检测过程，增加了检测结果的准确性。附图说明图1为实施例2所建立的检测非洲猪瘟病毒的方法稳定性验证结果图。图2为实施例2所建立的检测非洲猪瘟病毒的方法的检测阈值验证结果图。具体实施方式下面将结合附图对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1本专利技术提供了一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒，该试剂盒以ASFV结构蛋白基因VP73片段的质粒作为阳性对照，以β-Actin作为内参对照基因。该试剂盒以β-Actin基因作为内参质控，既监控了样品核酸的提取过程又监控了基因扩增反应过程，增大了检测结果的准确性，减少了假阴性结果。具体地，一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒包括：含有ASFV结构蛋白基因VP73片段的质粒，VP73的上游引物，VP73的下游引物，β-Actin的上游引物，β-Actin的下游引物，在一些优选的方式中，该试剂盒还包括VP73的探针，β-Actin的探针。本实施例中，含有ASFV结构蛋白基因VP73片段的质粒为冻干的质粒干粉，在使用时，通过加入RnaseFreeWater溶解能够得到质粒溶液。该试剂盒直接为实验者提供了VP73和β-Actin的上、下游引物，免去了实验者自行设计引物的繁琐步骤。所述VP73的上游引物为：5’-CGGATATGACTGGGACAACCA-3’(SEQIDNO.：1)，VP73的下游引物为：5’-AGGGATCTACAAGCGTGTAAACG-3’(SEQIDNO.：2)，VP73的探针为：5’-FAM-ACACCTTTAGAGGGCG-TAMRA-3’(SEQIDNO.：3)，β-Actin的上游引物为：5’-CCAGTTCGCCATGGATGAC-3’(SEQIDNO.：4)，β-Actin的下游引物为：5’-ATGCCGGAGCCGTTGTC-3’(SEQIDNO.：5)，β-Actin的探针为：5’-Cy5-TATTGCTGCGCTCGTG-BHQ2-3’(SEQIDNO.：6)；其中，VP73探针和β-Actin的探针中的FAM、Cy5为荧光基团，TAMRA和BHQ2为淬灭基团。该试剂盒的具体使用方法如下：以含有ASFV结构蛋白基因VP73片段的质粒溶液作为阳性对照标准品，以β-Actin作为内参对照基因；β-Actin基因在待测样本中，通过本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒，其特征在于，包括含有ASFV结构蛋白基因VP73片段的质粒。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒，其特征在于，包括含有ASFV结构蛋白基因VP73片段的质粒。


2.根据权利要求1所述的一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒，其特征在于，还包括VP73的上游引物，VP73的下游引物，β-Actin的上游引物，β-Actin的下游引物。


3.根据权利要求2所述的一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒，其特征在于，还包括VP73的探针，β-Actin的探针。


4.根据权利要求2所述的一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒，其特征在于，所述VP73的上游引物为：
5’-CGGATATGACTGGGACAACCA-3’(SEQIDNO.：1)，
所述VP73的下游引物为：
5’-AGGGATCTACAAGCGTGTAAACG-3’(SEQIDNO.：2)，
所述β-Actin的上游引物为：
5’-CCAGTTCGCCATGGATGAC-3’(SEQIDNO.：4)，
所述β-Actin的下游引物为：
5’-ATGCCGGAGCCGTTGTC-3’(SEQIDNO.：5)。


5.根据权利要求3所述的一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒，其特征在于，所述VP73的探针为：
5’-FAM-ACACCTTTAGAGGGCG-TAMRA-3’(SEQIDNO.：3)，
所述β-Actin的探针为：
5’-Cy5-TATTG...

【专利技术属性】
技术研发人员：王书崎，吴迪，武国华，刘慧，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33