流感病毒荧光定量PCR检测方法技术

本发明专利技术公开了一种流感病毒荧光定量PCR检测方法，其将免疫磁珠和DEAE磁珠混合得到病毒核酸提取磁珠；使用所得的病毒核酸提取磁珠提取待检样本中的病毒核酸；采用Taqman探针与荧光定量PCR技术相结合的高分辨溶解曲线法对提取得到的病毒核酸进行荧光定量PCR扩增，从而实现待检样本中流感病毒的分型检测。本发明专利技术可用于临床快速鉴别诊断、爆发疫情时的预防控制、病毒的流行病学监测等，克服组织样本提取RNA步骤繁多，导致样本病毒RNA，影响检测灵敏度的缺陷。

Detection of influenza virus by fluorescence quantitative PCR

【技术实现步骤摘要】
流感病毒荧光定量PCR检测方法
本专利技术涉及流感病毒定量PCR检测领域，更具体的说，本专利技术涉及一种直接检测甲乙型流感病毒的流感病毒荧光定量PCR检测方法。
技术介绍
流行性感冒简称流感，是由流感病毒引起的一种常见的、传染性强、传播速度快的急性呼吸道传染病；以冬春季多见，其主要通过空气中的飞沫、人与人之间的接触或与被污染物品的接触传播。临床以高热、乏力、头痛、全身酸痛等全身中毒症状为特征。流感病毒属于正粘病毒科，为有囊膜的负链RNA病毒，其病毒基因组包括8个节段，为单链、负链RNA，编码至少10种以上蛋白。流感病毒包括甲(A)、乙(B)、丙(C)三种类型，其中甲型最容易发生变异，可感染人和多种动物，为人类流感的主要病原，常引起大流行和中小流行。乙型流感病毒变异较少，可感染人类，引起爆发或小流行。丙型较稳定，可感染人类，多为散发病例。其中，A型流感病毒又可以分为HA亚型和NA亚型。而引起感染的流感病毒的主要是A型中的H1(N1)、H3(N2)亚型和B型流感病毒。流感病毒变异性强，宿主广泛，易发生跨种间传播，给防治工作带来较大困难，常引本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种流感病毒荧光定量PCR检测方法，其特征在于，包括：/n将免疫磁珠和DEAE磁珠混合得到病毒核酸提取磁珠；/n使用所得的病毒核酸提取磁珠提取待检样本中的病毒核酸；/n采用Taqman探针与荧光定量PCR技术相结合的高分辨溶解曲线法对提取得到的病毒核酸进行荧光定量PCR扩增，从而实现待检样本中流感病毒的分型检测。/n

【技术特征摘要】
20200121 CN 20201007195511.一种流感病毒荧光定量PCR检测方法，其特征在于，包括：
将免疫磁珠和DEAE磁珠混合得到病毒核酸提取磁珠；
使用所得的病毒核酸提取磁珠提取待检样本中的病毒核酸；
采用Taqman探针与荧光定量PCR技术相结合的高分辨溶解曲线法对提取得到的病毒核酸进行荧光定量PCR扩增，从而实现待检样本中流感病毒的分型检测。


2.如权利要求1所述的流感病毒荧光定量PCR检测方法，其特征在于，所述的免疫磁珠包被有抗甲型流感病毒抗体和抗乙型流感病毒抗体。


3.如权利要求1所述的流感病毒荧光定量PCR检测方法，其特征在于，荧光定量PCR扩增所采用的引物和探针为根据流感病毒的基质蛋白M基因和血凝素HA基因分别设计，其中包括甲型流感病毒H1N1和H3N2以及乙型流感病毒Victorialineage2008和Yamagatalineage，分别用不同的荧光基团偶联，在不同的信道检测。


4.如权利要求3所述的流感病毒荧光定量PCR检测方法，其特征在于，所述引物和探针的序列如下：
上游引物甲型流感H1-F：5’-GAGCTAAGAGAGCAATTGA-3’
下游引物甲型流感H1-R：5’-GTAGATGGATGGTGAATG-3’
探针甲型流感H1P：5’-Fam-TTGCTGAGCTTTGGGTATGA-3'-BHQ-1
上游引物甲型流感N1-F：5’-TCCACGCCCTAATGATAA-3’
下游引物甲型流感N1-R：5’-TTCTCCCTATCCAAACAC-3’
探针甲型流感N1P：5’-Fam-ATCCTTTTACTCCATTTGCTCC-3'BHQ-1
上游引物甲型流感H3-F：5’-AGCAAAGCCTACAGCAA-3’
下游引物甲型流感H3-R：5’-GACCTAAGGGAGGCATAA-3’
探针甲型流感H3P：5'-TexasRed-CCGGCACATCATAAGGGTAACA3'-BHQ-2
上游引物甲型流感N2-F：5’-GTCCAACCCTAAGTCCAA-3’
下游引物甲型流感N2-R：5’-GCCACAAAACACAACAATAC-3’
探针甲型流感N2P：5'-TexasRed-CTTCCCCTTATCAACTCCACA-3'-BH...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘凤鸣，马运国，师凤华，谭木秀，
申请(专利权)人：广西壮族自治区药用植物园，
类型：发明
国别省市：广西;45