【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于产生环状单链DNA文库的新型方法专利
本专利技术涉及核酸分析领域，且更具体地，涉及制备用于核酸测序的环状模板。专利技术背景环状核酸模板在核酸分析中具有多种应用。将直链核酸转化成环状形式用于扩增（例如，通过滚环扩增（RCA））和随后的检测和定量，参见美国专利号RE44265。环状模板在测序中的应用也是本领域已知的。参见美国专利号7,302,146和8,153,375。当前的测序策略也要求，将辅助序列诸如引物结合位点和条形码引入模板中。本专利技术是制备适合用于测序的环状核酸模板的新型的有效方法。所述方法允许制备基本上无限制长度的模板。
技术实现思路
在一些实施方案中，本专利技术是从靶核酸形成环状分子的方法，所述方法包括：用包含通用环化序列和靶标特异性序列的第一和第二双组分扩增引物扩增靶核酸以产生双链扩增子；分离所述双链扩增子的链；使所述扩增子的链与环化寡核苷酸接触以产生杂交结构，其中所述链中的通用环化序列与所述环化寡核苷酸杂交，使得所述链的末端可连接地靠近；和连接所述链的末端，由此形成环状分子。所述靶...
【技术保护点】
1.一种从靶核酸形成环状分子的方法，所述方法包括：/na)用包含通用环化序列和靶标特异性序列的第一和第二双组分扩增引物扩增所述靶核酸以产生双链扩增子；/nb)分离所述双链扩增子的链；/nc)使所述扩增子的链与环化寡核苷酸接触以产生杂交结构，其中所述链中的所述通用环化序列与所述环化寡核苷酸杂交，使得所述链的末端可连接地靠近；和/nd)连接所述链的末端，由此形成环状分子。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170914 US 62/5587531.一种从靶核酸形成环状分子的方法，所述方法包括：
a)用包含通用环化序列和靶标特异性序列的第一和第二双组分扩增引物扩增所述靶核酸以产生双链扩增子；
b)分离所述双链扩增子的链；
c)使所述扩增子的链与环化寡核苷酸接触以产生杂交结构，其中所述链中的所述通用环化序列与所述环化寡核苷酸杂交，使得所述链的末端可连接地靠近；和
d)连接所述链的末端，由此形成环状分子。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶核酸包含选自无细胞血浆DNA、声处理的DNA和限制性消化的DNA的基因组片段。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一和第二扩增引物上的通用序列是独特的。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一或第二扩增引物的通用序列包含测序引物。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一和第二扩增引物中的仅一种包含5’-磷酸酯基团。
6.根据权利要求1所述的方法，其中通过核酸酶消化而分离所述双链扩增子的链。
7.根据权利要求1所述的方法，其中通过物理方式而分离所述双链扩增子的链。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述环化寡核苷酸包含捕获部分的配体。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述配体-捕获部分对选自生物素-抗生蛋白链菌素、抗体-抗原或寡核苷酸-互补捕获寡核苷酸。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述环化寡核苷酸是Y-形结构，其具有与所述双组分引物中的通用环化序列互补的单链区域。
11.一种制备用于测序的环状靶核酸的文库的方法，所述方法包括：
a)用包含通用环化序列和靶标特异性序列的第一和第二双组分扩增引物扩增所述靶核酸以产生双链扩增子；
b)分离所述双链扩增子的链；
c)使所述链与环化寡核苷酸接触以产生杂交结构，其中所述链中的所述通用环化序列与所述环化寡核苷酸杂交，使得每条链的末端可连接地靠近；和...
【专利技术属性】
技术研发人员：A海斯，M拉尼克，M赫雷拉，R丹内鲍姆，S马格里东，D巴登霍斯特，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，卡帕生物系统公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH
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