快速检测新型冠状病毒IgG抗体的胶体金免疫层析试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种快速检测新型冠状病毒IgG抗体的胶体金免疫层析试剂盒及其制备方法，涉及生物医药领域，采用抗原抗体夹心法和胶体金免疫层析法原理定性检测人血清或血浆中是否存在抗新型冠状病毒核衣壳蛋白IgG抗体，运用胶体金标记含有6×His标记的新型冠状病毒核衣壳蛋白以结合形成金标N蛋白后吸附在金标垫上，以新型冠状病毒核衣壳蛋白作为指示标记物，在NC膜的检测线上包被鼠抗人IgG单抗以及在NC膜的质控线上包被鼠抗6×His单抗，实现对血液中抗新型冠状病毒核衣壳蛋白IgG抗体的定性检测，能方便快速地检测血液中是否存在抗新型冠状病毒核衣壳蛋白IgG抗体，以供临床医生快速判断是否确诊新型冠状病毒，检测灵敏度高、抗干扰强、检测时间短。

Novel coronavirus immunochromatographic kit for rapid detection of IgG antibodies of new coronavirus and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
快速检测新型冠状病毒IgG抗体的胶体金免疫层析试剂盒及其制备方法
本专利技术属于生物医药领域，涉及快速检测新型冠状病毒IgG抗体的胶体金免疫层析试剂盒及其制备方法，具体地说是一种应用夹心法原理的胶体金免疫层析法实现对血液中抗新型冠状病毒核衣壳蛋白IgG抗体进行定性检测的试剂盒。
技术介绍
新型冠状病毒（2019-nCoV）常见体征有发热、乏力、干咳、逐渐出现呼吸困难，而部分患者病症状轻微，甚至存在无临床症状的无症状患者。具备人传人的特点，一般潜伏期1-14天，且潜伏期具有传染性，而无症状感染者也可能成为传染源，其主要通过呼吸道飞沫和密切接触传染传播，人群普遍易感。疫情发展至今，仍有不少疑似病例因为检测效率不足等原因尚未确诊，如何大规模快速筛查疑似病例，供临床医生快速判断是否为新型冠状病毒肺炎，以便于快速隔离免于传染给更多的人，是亟需解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种快速、简单、可靠、成本低廉、灵敏度高的快速检测新型冠状病毒IgG抗体的胶体金免疫层析试剂盒。本专利技术的另一个目的是提供一种快速检测新型冠状病毒IgG抗体的胶体金免疫层析试剂盒的制备方法。本专利技术提供技术方案如下：一种快速检测新型冠状病毒IgG抗体的胶体金免疫层析试剂盒，包括盒体、位于所述盒体内的粘贴支架，所述粘贴支架上延长度方向依次粘贴有样本垫、金标垫、NC膜、吸样垫，所述NC膜上靠近所述金标垫侧设有检测线、靠近所述吸样垫侧设有质控线，所述金标垫含有金标N蛋白，所述金标N蛋白为由胶体金标记的含有6×His标记的新型冠状病毒核衣壳蛋白；所述检测线上包被有鼠抗人IgG单抗；所述质控线上包被有鼠抗6×His单抗。作为本专利技术的进一步改进，所述金标N蛋白的制备方法包括以下步骤：S101、胶体金制备：取2mL1%氯金酸加入100mL水溶液中，加热至沸腾，再加入2-5mL1%柠檬酸三钠混匀，煮沸待胶体金溶液颜色由蓝经紫变紫红后，冷却；S102、金标液制备：取1mL胶体金加入100μL0.1M、pH7.2的PB，混匀后加入0.1MNaOH溶液调节pH值至7.2-7.6，加入15-25μg含有6×His标记的新型冠状病毒核衣壳蛋白充分混匀，再加入100μL体积10%的牛血清白蛋白混匀；S103、金标液纯化：将金标液离心后弃去上清，加入含有20%蔗糖的金标复溶液溶解，既得。作为本专利技术的进一步改进，所述金标N蛋白中胶体金的粒径为15-30nm。作为本专利技术的进一步改进，所述质控线上鼠抗6×His单抗的包被浓度为0.75-1mg/ml，所述检测线上鼠抗人IgG单抗包被浓度为1.0－1.5mg/ml。作为本专利技术的进一步改进，所述金标N蛋白中胶体金与含有6×His标记的新型冠状病毒核衣壳蛋白在蛋白质的等电点附近进行抗体交联。作为本专利技术的进一步改进，所述金标垫上含有6×His标记的新型冠状病毒核衣壳蛋白含量高于所述检测线上鼠抗人IgG单抗含量。作为本专利技术的进一步改进，所述的样本垫材质为玻璃纤维膜，经过含Tris、酪蛋白钠盐、PVP-10的处理液进行处理过夜。作为本专利技术的进一步改进，所述的金标垫材质为玻璃纤维膜，经过含Tris、S-17、牛血清白蛋白的处理液处理。一种快速检测新型冠状病毒IgG抗体的胶体金免疫层析试剂盒的制备方法，包括以下步骤：S1、金标垫的制备：采用胶体金标记含有6×His标记的新型冠状病毒核衣壳蛋白制得金标N蛋白，并将金标N蛋白喷涂在玻璃纤维膜上，干燥得到金标垫；S2、NC膜的制备：将鼠抗人IgG单抗包被在硝酸纤维素膜上形成检测线，将鼠抗6×His单抗包被在硝酸纤维素膜上形成质控线；S3、切割装配：在粘贴支架的长度方向上依次粘贴样本垫、步骤S1制得的金标垫、步骤S2制得的NC膜以及吸样垫，切割成3.5mm±0.5mm宽的试纸条，装入盒体，即得。作为本专利技术的进一步改进，步骤S1中，所述金标垫上金标N蛋白的喷涂量均为1.4-2.0μL/cm；本申请主要材料：样本垫：材质为玻璃纤维膜，经过样本垫处理液（主要含Tris、酪蛋白钠盐、PVP-10）处理过夜，样本垫用于去除样品中的大颗粒及缓冲检测系统以保障环境体系中抗原与特异性抗体交联；金标垫：经过专用处理液（含Tris、S-17、牛血清白蛋白等）处理过的玻璃纤维膜，含有金标N蛋白；胶体金标记抗体的确切点样量需要严格测试，以适合检测线显色检测抗新型冠状病毒核衣壳蛋白IgG抗体，金标N蛋白与抗新型冠状病毒核衣壳蛋白IgG抗体特异性结合形成金标复合物，还要使多余胶体金标记抗体进入质控线而显现颜色，金标N蛋白上胶体金标记含有6×His标记的新型冠状病毒核衣壳蛋白不足时质控线颜色将不会显示，成为失效条，因此金标垫上含有6×His标记的新型冠状病毒核衣壳蛋白含量要高于检测线上鼠抗人IgG单抗含量，而过量的金标N蛋白到达T区可出现假阳性，本申请金标垫上金标N蛋白的喷涂量为适宜的1.4-2.0μL/cm；NC膜（硝酸纤维素膜）：在硝酸纤维素膜划线的第一个区是检测线区，在硝酸纤维素膜划线的第二个区是质控线区，检测线和质控线在此膜包被成线状，检测线含鼠抗人IgG单抗，以捕获胶体金交联抗体复合物，质控线包被鼠抗6×His单抗，当复合物从金标垫以毛细运动到达质控线时，该复合物将被鼠抗6×His单抗捕获，而形成可见的酒红色条带，质控线为控制线，以便检验检测系统的有效性，如质控线不出线，表明检验无效；吸样垫：为Whatman滤纸，促进样本层析经过样本垫、金标垫、硝酸纤维素膜，到达吸样垫区，以吸收多余的样本而完成检测；黏贴支架：为PVC支持垫，由薄PVC塑料制成以支撑上述组件。本申请的检测原理：检测时，把待测的血清或血浆样本滴在样品垫上，通过毛细效应下层析向前移动到金标垫，由于未感染的正常人血液中是不存在着抗新型冠状病毒核衣壳蛋白IgG抗体的（IgG是感染中、后期产生的抗体，阳性提示患者处于恢复期或是既往感染），而感染新型冠状病毒患者血液存在抗新型冠状病毒核衣壳蛋白IgG抗体，如被检样本中含有抗新型冠状病毒核衣壳蛋白IgG抗体时，金标N蛋白与抗新型冠状病毒核衣壳蛋白IgG抗体可以特异地结合形成金标复合物，在层析过程中与固定在检测线的鼠抗人IgG单抗结合形成“Au-含6×HIS标记的N蛋白－抗IgG抗体－鼠抗人IgG单抗”形成夹心抗原抗体复合物，聚集在检测线上形成酒红色条带，继而在检测线上通过目测可检测血液中是否的新型冠状病毒IgG抗体，检测线区不出现酒红色条带则表示样本中没有抗新型冠状病毒核衣壳蛋白IgG抗体，无论被检样本中是否存在抗体，金标记含6×HIS标记的N蛋白都会继续向上层析至质控线，与鼠抗6×His单抗反应出现一条酒红色带，质控线所呈现的酒红色条带是判断层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。本专利技术相对于现有技术，有以下优点：本专利技术一种快速检测新型冠状病毒IgG抗体的胶体金免疫层析试剂盒，采用抗原抗体夹心本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速检测新型冠状病毒IgG抗体的胶体金免疫层析试剂盒，包括盒体、位于所述盒体内的粘贴支架（1），所述粘贴支架（1）上延长度方向依次粘贴有样本垫（2）、金标垫（3）、NC膜（4）、吸样垫（5），所述NC膜（4）上靠近所述金标垫（3）侧设有检测线（41）、靠近所述吸样垫（5）侧设有质控线（42），其特征在于：所述金标垫（3）含有金标N蛋白，所述金标N蛋白为由胶体金标记的含有6×His标记的新型冠状病毒核衣壳蛋白；/n所述检测线（41）上包被有鼠抗人IgG单抗；/n所述质控线（42）上包被有鼠抗6×His单抗。/n

【技术特征摘要】
1.一种快速检测新型冠状病毒IgG抗体的胶体金免疫层析试剂盒，包括盒体、位于所述盒体内的粘贴支架（1），所述粘贴支架（1）上延长度方向依次粘贴有样本垫（2）、金标垫（3）、NC膜（4）、吸样垫（5），所述NC膜（4）上靠近所述金标垫（3）侧设有检测线（41）、靠近所述吸样垫（5）侧设有质控线（42），其特征在于：所述金标垫（3）含有金标N蛋白，所述金标N蛋白为由胶体金标记的含有6×His标记的新型冠状病毒核衣壳蛋白；
所述检测线（41）上包被有鼠抗人IgG单抗；
所述质控线（42）上包被有鼠抗6×His单抗。


2.根据权利要求1所述的快速检测新型冠状病毒IgG抗体的胶体金免疫层析试剂盒，其特征在于，所述金标N蛋白的制备方法包括以下步骤：
S101、胶体金制备：取2mL1%氯金酸加入100mL水溶液中，加热至沸腾，再加入2-5mL1%柠檬酸三钠混匀，煮沸待胶体金溶液颜色由蓝经紫变紫红后，冷却；
S102、金标液制备：取1mL胶体金加入100μL0.1M、pH7.2的PB，混匀后加入0.1MNaOH溶液调节pH值至7.2-7.6，加入15-25μg含有6×His标记的新型冠状病毒核衣壳蛋白充分混匀，再加入100μL体积10%的牛血清白蛋白混匀；
S103、金标液纯化：将金标液离心后弃去上清，加入含有20%蔗糖的金标复溶液溶解，既得。


3.根据权利要求1所述的快速检测新型冠状病毒IgG抗体的胶体金免疫层析试剂盒，其特征在于：所述金标N蛋白中胶体金的粒径为15-30nm。


4.根据权利要求1所述的快速检测新型冠状病毒IgG抗体的胶体金免疫层析试剂盒，其特征在于：所述质控线（42）上鼠抗6×His单抗的包被浓度为0.75-1mg/ml，所述检测线（41）上鼠抗人IgG单抗包被浓度为1.0－1.5mg/ml。


5.根据权利要求1所述的快速...

【专利技术属性】
技术研发人员：王胜岚，马玉兰，涂妮娜，吴伟铭，邓思璐，
申请(专利权)人：中山生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44