【技术实现步骤摘要】
一种用于从全血中分离红细胞的试剂盒及其从全血中分离红细胞的方法
本专利技术涉及细胞分离领域，尤其涉及一种用于从全血中分离红细胞的试剂盒及其从全血中分离红细胞的方法。
技术介绍
目前用于红细胞分离的方式，主要为离心方法，离心方法很难实现红细胞分离的自动化，不利于检测设备的小型化，而红细胞的存在对现有的血液标志物检测带来很大的干扰。中国专利申请号200710305363.6从全血中分离红细胞的方法公开了采用加入标记好植物凝集素或抗红细胞抗体的微球达到分离红细胞的目的。但是分离需要10min以上，时间较长。专利申请号200810244503.8利用冻干制剂快速分离人全血或悬浮红细胞上清的方法公开的是采用植物凝集素或抗红细胞抗体包被微球，再制备成冻干制剂后与全血混匀后达到分离红细胞的目的。但是该技术方案分离需要2-3min，试剂为冻干。这两个技术方案均尝试使用磁珠进行红细胞分离，但植物凝集素或抗RBC抗体与磁珠偶联均使用的是物理吸附，分离全血样本要求较多，比如中国专利申请200710305363.6，样本不加任何凝集素或其他...
【技术保护点】
1.一种用于从全血中分离红细胞的试剂盒，其特征在于，包括化学偶联的抗RBC抗体的磁珠，植物凝集素和/或抗RBC抗体。/n
【技术特征摘要】
1.一种用于从全血中分离红细胞的试剂盒，其特征在于，包括化学偶联的抗RBC抗体的磁珠，植物凝集素和/或抗RBC抗体。
2.如权利要求1所述用于从全血中分离红细胞的试剂盒，其特征在于，所述化学偶联的抗RBC抗体的磁珠的制备方法为，
磁珠活化：往经过MEST溶液洗涤后的羧基磁珠中加入新配制的EDC溶液，混匀使磁珠充分悬浮后活化，活化过程中使磁珠保持悬浮状态；
加入抗体进行偶联：将上述活化后的磁珠磁性分离去除上清液后得到磁珠悬液，再加入抗RBC抗体后轻柔混匀，抗RBC抗体存在于pH8.0PBS，内含0.05％Tween20的溶液中；进行偶联，偶联期间保持磁珠的悬浮状态；
洗涤：磁性分离去除上清液，加入PBST溶液重悬磁珠，反应，封闭磁珠表面未反应的活化羧基基团，期间保持磁珠的悬浮状态；磁性分离去除上清液，用pH7.2的PBS溶液洗涤2-4次后，重新悬浮于保存液中即得到化学偶联的抗RBC抗体的磁珠。
3.如权利要求2所述用于从全血中分离红细胞的试剂盒，其特征在于，所述磁珠活化步骤中，经过MEST溶液洗涤后的羧基磁珠为往磁珠中；优选的，磁珠的粒径为1-4μm；加入MEST溶液后，磁性分离洗涤1-3次，优选2次，然后移除上清液；洗涤时，使用2倍于磁珠体积的MEST溶液进行洗涤；
任选的，所述活化为20-30℃20-40min；优选的，活化为25℃30min。
4.如权利要求2所述用于从全血中分离红细胞的试剂盒，其特征在于，所述加入抗体进行偶联步骤中，抗体的加入量为,100μL10mg/mL的磁珠悬液加入50-200μg抗RBC抗体；优选的，加入200μg抗RBC抗体；
任选的，所述偶联为23-27℃1.5-2.5h；优选的，为25℃2h。
5.如权利要求2所述用于从全血中分离红细胞的试剂盒，其特征在于，所述洗涤步骤中，所述反应为23-27℃反应0.5-1.5h；优选的，为25℃反应1h；
任选的，所述所述MEST溶液为100mMMES，pH5.0，0.05％Tween20；EDC溶液为将10mg/mL的EDC分散于所述MEST中所得溶液；...
【专利技术属性】
技术研发人员：王帅，刘峰，
申请(专利权)人：厦门宝太生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35
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