一种血清脂蛋白（a）胶乳增强比浊检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开一种利用脂蛋白（a）抗体、通过胶乳增强免疫比浊法测定血清中脂蛋白（a）的液体双试剂试剂盒。本发明专利技术提供的试剂盒包括试剂R1、试剂R2和脂蛋白（a）标准品，其中，试剂R1包含高分子加速剂、防腐剂、表面活性剂、无机盐及缓冲液；试剂R2包含结合抗人脂蛋白（a）抗体的聚苯乙烯胶乳颗粒，胶乳颗粒直径为120‑160nm，还包含防腐剂、表面活性剂、无机盐及缓冲液；脂蛋白（a）标准品包含防腐剂、纯化人脂蛋白（a）、无机盐及缓冲液。本发明专利技术的试剂盒特异性强、灵敏度高、线性范围宽、操作简便，适用于各种全自动生化分析仪。

A serum lipoprotein (a) latex enhanced turbidimetric test kit

【技术实现步骤摘要】
一种血清脂蛋白（a）胶乳增强比浊检测试剂盒
本专利技术涉及免疫检测领域，具体涉及一种血清脂蛋白(a)胶乳增强比浊检测试剂盒及使用方法。
技术介绍
人血清中的检测方法原理是人血清中LP(a)与其相应的单克隆抗体结合，立即形成抗原—抗体复合物，产生浊度，该浊度的高低在一定量的抗体存在时与抗原的含量成正比。由于脂蛋白(a)为大分子脂蛋白，由脂质和蛋白质两部分组成；其中脂质部分由胆固醇、磷脂等组成，位于颗粒的核心；蛋白质部分是由apo(a)和apoB100通过二硫键相连而成，位于颗粒的外周；每个LP(a)中apo(a)和apoB100呈1:1关系，也可能1～2个apo(a)与1～2个apoB100结合，此外还存在游离的apo(a)。apo(a)富含糖蛋白，因此LP(a)也是一结构复杂的糖蛋白。apo(a)含有Kringle结构，其中的Kringle4-2(K4-2)的重复数目不同(3～40个)，每Kringle-4的相对分子量约12.7kDa，从而主导了apo(a)呈显著的大小多态性(相对分子量从18.7kDa～66.2kDa)。apo(a)的大小多态性又决定了LP(a)颗粒大小多态性。由于Apo(a)分子大小极度不一,使颗粒大小不同的Lp(a)产生不一致的光散射与光吸收,给利用单抗测定Lp(a)带来一定的困难。目前临床实验室常用的免疫比浊法(ITA、INA)所用的单抗或多抗主要作用于K4-2，对apo(a)分子大小敏感的方法产生较大的偏差。作用于K4-2位点的抗体反应性取决于apo(a)分子大小即K4-2重复的数目，如标本脂蛋白(a)的K4-2重复数目小于测定校准物脂蛋白(a)的K4-2重复数目，测定脂蛋白(a)的结果低估；相反标本脂蛋白(a)的K4-2重复数目大于测定校准物脂蛋白(a)的K4-2重复数目，测定结果高估。综上所述，apo(a)分子大小的不均一性不同程度地影响着LP(a)的免疫化学测定。apo(a)结构的特征对免疫测定提出严峻的挑战。LP(a)的含量测定仍是以整个颗粒的质量表其结果，更使apo(a)的大小多态性对现时LP(a)测定的影响不可避免。为此，LP(a)测定的标准化程序尚须进一步研究解决。脂血是目前免疫比浊检测法中最严重的干扰因素,本专利技术的反应体系中加强了表面活性剂的作用和采用自动扣除空白,使抗原抗体特异性反应之前,非特异性反应已达到平衡,故可在一定范围内纠正溶血、高胆红素或脂血对测定结果的影响。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决上述问题而提供。本专利技术通过以下技术方案实现：本专利技术提供利用抗脂蛋白(a)骆驼科单域抗体、通过胶乳增强免疫比浊法测定血清中脂蛋白(a)的液体双试剂试剂盒，该试剂盒包括试剂R1、试剂R2和已知浓度的脂蛋白(a)抗原校准品，其中，所述试剂R1包含高分子加速剂、防腐剂、表面活性剂、无机盐及缓冲液；所述试剂R2包含结合抗人脂蛋白(a)抗体的聚苯乙烯胶乳颗粒，胶乳颗粒直径为120-160nm，还包含防腐剂、表面活性剂、无机盐及缓冲液；所述已知浓度的脂蛋白(a)抗原标准品包含防腐剂、纯化人脂蛋白(a)、无机盐及缓冲液，偶联到胶乳上的抗体是骆驼科单域抗脂蛋白(a)抗体。所述试剂R1中高分子加速剂的质量百分比为7％-8％，防腐剂的质量百分比为0.01％-0.05％，表面活性剂的质量百分比为0.3％-0.5％，无机盐的质量百分比为1.0％-2.0％，缓冲液的浓度为10-50mmol/L；所述试剂R2中胶乳颗粒的含量百分比为0.4％-0.9％，骆驼科单域抗脂蛋白(a)多克隆抗体的含量为0.9mg/mL-1.5mg/mL，防腐剂的质量百分比为0.01％-0.05％，表面活性剂的质量百分比为0.3％-0.5％，无机盐的质量百分比为1.0％-2.0％，缓冲液的浓度为10-50mmol/L；所述已知浓度的脂蛋白(a)抗原标准品，纯化的脂蛋白(a)抗原的含量为75ng/mL-1200ng/mL，防腐剂的质量百分比为0.01％-0.05％，无机盐的质量百分比为1.0％-2.0％，缓冲液的浓度为10-50mmol/L。其中缓冲液是4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HAPES)缓冲液，缓冲液pH值为4.7-6.5，优选为5.0-6.0；其中试剂R1中的高分子加速剂选自PEG200、PEG600、PEG800，优选为PEG200；其中防腐剂选自proclin200；其中试剂R1、R2中的表面活性剂选自对甲基丙烯酸十二氟庚酯；其中无机盐为氯化钠或氯化钙，优选为氯化钠；其中已知浓度的脂蛋白(a)抗原标准品的脂蛋白(a)浓度分别为75、150、300、600、1200ng/mL。在本专利技术所述利用骆驼科脂蛋白(a)抗体、通过胶乳增强免疫比浊法测定血清中脂蛋白(a)的液体双试剂试剂盒中，所述的脂蛋白(a)抗体来自骆驼或羊驼，优选为来自于羊驼。此多克隆抗体可特异地识别脂蛋白(a)多个抗原位点，因此能特异结合不同分子量的脂蛋白(a)，同时也消除了传统IGG型抗体中类风湿因子等因素对测值的影响。因此，该多克隆抗体既可以保障抗原抗体的高效亲和力，也保障了试剂盒的精密度，提高了试剂盒测值的稳定性，优化了反应的时间。本专利技术采用胶乳颗粒增强透射免疫比浊法，其原理是包被了高特异性抗体的胶乳颗粒，与样本中相应的抗原发生特异性结合，形成抗原-抗体-胶乳颗粒的复合物，在特定的缓冲液中这种复合物形成一定的浊度，浊度的增加程度与样本中的抗原浓度成正比关系，在一定的波长下进行浊度测定，即可测得样本中被检抗原的含量。在本专利技术中，血清中的脂蛋白(a)抗原与结合在胶乳颗粒表面的特异性骆驼抗人脂蛋白(a)多克隆抗体結合，发生抗原抗体反应，形成免疫复合物，形成一定浊度，测定此浊度在570nm波长处的吸光度，对照标准曲线即可求出样本中脂蛋白(a)的含量。采用本专利技术所述的利用骆驼科单域抗体，通过胶乳增强免疫比浊法测定血清中脂蛋白(a)的液体双试剂试剂盒进行测定吋，先将样本与试剂Rl混匀，读取吸光度Al，之后加入试剂R2，读取吸光度A2，计算反应吸光度变化值，对照标准曲线得出样本中脂蛋白(a)的含量。本专利技术的技术核心在于：使用特异性骆驼科单域抗人脂蛋白(a)抗体，可识别不同分子量的脂蛋白(a)多个抗原位点，同时消除了传统IGG型抗体中类风湿因子等因素对测值的影响。因此提高了试剂盒的测定精密度和抗干扰能力。使用本专利技术的方法能够保证检测分子量差异极大的脂蛋白(a)，具有很好的临床应用价值。本专利技术所述液体双试剂试剂盒，具有准确性高、特异性好、灵敏度高及抗干扰能力强等优点，可用于检测血清中脂蛋白(a)的浓度，适用于临床各种全自动生化分析仪。具体实施方式下面结合实施方式对本专利技术做进一步的详细说明。以下实施例仅是范例性的，仅用以对本专利技术的技术方案做更进一步的详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，在不偏离本专利技术技术方案的精神和范围内，对技术方案进行的修改或者替换均应涵盖在本专利技术的权利要求保护范围内。实施例一试剂盒制备试剂盒的主要成分及配比如下：试剂Rl：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种通过胶乳增强免疫比浊法测定血清中脂蛋白（a）的液体双试剂试剂盒，试剂盒包括试剂R1、试剂R2和已知浓度的脂蛋白（a）抗原标准品，其中，所述试剂R1包含高分子加速剂、防腐剂、表面活性剂、无机盐及缓冲液；所述试剂R2包含结合抗人脂蛋白（a）抗体的聚苯乙烯胶乳颗粒，胶乳颗粒直径为120-160nm，还包含防腐剂、表面活性剂、无机盐及缓冲液；所述已知浓度的脂蛋白（a）抗原标准品包含防腐剂、纯化人脂蛋白（a）、无机盐及缓冲液，其特征在于偶联到胶乳上的抗体是骆驼科单域抗脂蛋白（a）抗体。/n

【技术特征摘要】
1.一种通过胶乳增强免疫比浊法测定血清中脂蛋白（a）的液体双试剂试剂盒，试剂盒包括试剂R1、试剂R2和已知浓度的脂蛋白（a）抗原标准品，其中，所述试剂R1包含高分子加速剂、防腐剂、表面活性剂、无机盐及缓冲液；所述试剂R2包含结合抗人脂蛋白（a）抗体的聚苯乙烯胶乳颗粒，胶乳颗粒直径为120-160nm，还包含防腐剂、表面活性剂、无机盐及缓冲液；所述已知浓度的脂蛋白（a）抗原标准品包含防腐剂、纯化人脂蛋白（a）、无机盐及缓冲液，其特征在于偶联到胶乳上的抗体是骆驼科单域抗脂蛋白（a）抗体。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中骆驼科单域脂蛋白（a）抗体来自骆驼或羊驼，优选为来自羊驼。


3.根据权利要求1所述的试剂盒，该试剂盒包括试剂R1、试剂R2和已知浓度的脂蛋白（a）抗原标准品，其中：所述试剂R1中高分子加速剂的质量百分比为7％-8％，防腐剂的质量百分比为0.01％-0.05％，表面活性剂的质量百分比为0.3％-0.5％，无机盐的质量百分比为1.0％-2.0％，缓冲液的浓度为10-50mmol/L；所述试剂R2中胶乳颗粒的含量百分比为0.4％-0.9％，骆驼科单域抗脂蛋白（a）多克隆抗体的含量为0.9mg/mL-1.5mg/mL，防腐剂的质量百分比为0.01％-0.05％，表面活性剂的质量百分比为0.3％-0.5％，无...

【专利技术属性】
技术研发人员：华权高，沈鹤霄，徐春雷，
申请(专利权)人：武汉生之源生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42