一种抑制与产生超氧阴离子自由基检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种抑制与产生超氧阴离子自由基能力检测试剂盒，包括以下试剂：磷酸氢二钠、磷酸二氢钾和EDTA制备的基质缓冲液；WST‑1和黄嘌呤溶于10mM PBS制成的底物储备液；含有黄嘌呤氧化酶的酶储备液；PBS和BSA制成的酶稀释液；维生素C。本发明专利技术适用于动物、植物、细胞和微生物等所有样本，操作简便，检测灵敏度高，样本用量少，试剂更加环保，测定更加简便快捷。

A detection kit for the inhibition and production of superoxide anion radicals

【技术实现步骤摘要】
一种抑制与产生超氧阴离子自由基检测试剂盒
本专利技术属于生物
，特别涉及一种抑制与产生超氧阴离子自由基检测试剂盒。
技术介绍
生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病；故生物体中超氧阴离子的抑制剂和产生超氧阴离子自由基的物质的检测及处理成为研究热点。现有市面上有售抑制与产生超氧阴离子自由基检测试剂盒采用的是羟胺法，显色体系需要加热、试剂组份多、用到刺激性气味的乙酸、整个显色体系是酸性的；客户现配试剂比较多、操作麻烦，人为误差较大，检测时间很长(用分光光度计检测，需要三个数据洗一次比色皿)。WST-1可以和黄嘌呤氧化酶(XanthineOxidase，XO)催化产生的超氧化物阴离子(O2.-)反应产生水溶性的甲臜染料(formazandye)，使反应体系呈现黄色，可用酶标仪450nm测其吸光度，其原理如图1所示。当被测样本中含有超氧阴离子自由基抑制剂时，则比色时测定孔的OD值低于对照孔的OD值；而如果被测样本中含有产生超氧本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抑制与产生超氧阴离子自由基检测试剂盒，其特征在于，包含以下试剂：基质缓冲液，底物储备液，酶储备液，酶稀释液，标准品；/n所述基质缓冲液为由磷酸氢二钠、磷酸二氢钾和EDTA制备，pH为7.8-8.4，所述磷酸氢二钠的含量为17-20g/L，所述磷酸二氢钾的含量为1.95-2.75g/L，所述EDTA的含量为0.1-0.5g/L；/n所述底物储备液为含有WST-1和黄嘌呤的PBS缓冲液，其中，WST-1的含量为6.5-10mg/mL，黄嘌呤的含量为18-25mg/mL，所述PBS缓冲液的浓度为10mM；/n所述酶储备液为含有黄嘌呤氧化酶和牛血清蛋白的PBS缓冲液，所述黄嘌呤氧化酶的含量为1...

【技术特征摘要】
1.一种抑制与产生超氧阴离子自由基检测试剂盒，其特征在于，包含以下试剂：基质缓冲液，底物储备液，酶储备液，酶稀释液，标准品；
所述基质缓冲液为由磷酸氢二钠、磷酸二氢钾和EDTA制备，pH为7.8-8.4，所述磷酸氢二钠的含量为17-20g/L，所述磷酸二氢钾的含量为1.95-2.75g/L，所述EDTA的含量为0.1-0.5g/L；
所述底物储备液为含有WST-1和黄嘌呤的PBS缓冲液，其中，WST-1的含量为6.5-10mg/mL，黄嘌呤的含量为18-25mg/mL，所述PBS缓冲液的浓度为10mM；
所述酶储备液为含有黄嘌呤氧化酶和牛血清蛋白的PBS缓冲液，所述黄嘌呤氧化酶的含量为16.6-18.2U/mL，所述牛血清蛋白的含量为0.2-1.0％；
所述酶稀释液为含有牛血清蛋白的PBS缓冲液，所述PBS缓冲液的浓度为50mM，所述牛血清蛋白的含量为0.2-1.0％；
所述标准品为维生素粉剂。


2.一种检测样品抑制与产生超氧阴离子自由基活力的方法，其特征在于，使用权利要求1所述的试剂盒，具体步骤如下：
S1、提取血清、血浆、组织或细胞样品，得待测样本；
S2、酶标板上设置对照孔、对照空白孔、标准孔、标准品空白孔、测定孔以及测定空白孔，其中，对照孔加入双蒸水和酶储备液，对照空白孔加双蒸水和酶稀释液，标准孔加标准品和酶储备液，标准空白孔加标准品和酶稀释液，测定孔加待测样本和酶储备液，测定空白孔加待测样本和酶稀释液；
S3、向步骤S1中的各孔加等体积的底物应用液，并小心吹打混匀；
S4、在特定温度下孵育固定时间，酶标仪450nm测OD值；
S5、计算抑制率，抑制...

【专利技术属性】
技术研发人员：冷毅斌，王振平，王长乐，陈冬琴，
申请(专利权)人：武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42