一种检测饲料用葡萄糖氧化酶活力的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测饲料用葡萄糖氧化酶活力的方法，属于酶制剂检测技术领域，所述方法包括以下步骤：(1)对待测葡萄糖氧化酶样品进行预处理；(2)配置成葡萄糖浓度为20g/L的葡萄糖磷酸盐缓冲液；(3)用0.1mol/L的氢氧化钠溶液终止反应，用0.020‑0.030mol/L的盐酸溶液滴定剩余的氢氧化钠溶液，利用反应前后消耗的盐酸毫升数计算试验样品中葡萄糖氧化酶活力。本方法通过增加预热时间、改变反应温度和反应体系中盐酸溶液浓度，采用双指标判定反应终点，显著增加了检测方法的准确度和可重复性；用所述方法检测酶活，相对标准偏差RSD小于2％(n＝10)，本发明专利技术的准确性和可重复性均超过了河北省地方标准DB13/T 1444‑2011的检测方法，取得了显著的检查效果。

A method to detect the activity of glucose oxidase in feed

【技术实现步骤摘要】
一种检测饲料用葡萄糖氧化酶活力的方法
：本专利技术涉及酶制剂检测
，具体涉及一种检测饲料用葡萄糖氧化酶活力的方法。
技术介绍
：葡萄糖氧化酶(Glucoseoxidase，GOD)，其系统命名为β-D-葡萄糖氧化还原酶：氧1-氧化还原酶(EC1.1.3.4)，广泛分布与动植物体内，主要来源为黑曲霉(Aspergillusniger)和青霉(Penicillium)，属胞内酶，它能高度专一性地催化β-D-葡萄糖与氧反应，使葡萄糖氧化生成葡萄糖酸和过氧化氢。该酶最早发现于1904年，由于当时没有认识到其商业价值而没有被广泛应用，直到1928年Muller从黑曲霉中发酵得到GOD；1960年Kusai等和1964年Pazur等分别从青霉菌和黑曲霉中提纯得到葡萄糖氧化酶。我国自1986年开始研究葡萄糖氧化酶的制备提纯工艺，1998年正式投入生产。1999年农业部将其定为12种允许使用的饲料酶制剂添加剂之一，但是酶活力定义和检测方法没有国家标准，个别省份有地方标准比如河北省地方标准DB13/T1444-2011《饲料添加剂葡萄糖氧化酶》(滴定法)、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测饲料用葡萄糖氧化酶活力的方法，其特征在于：包括以下步骤：/n(1)将葡萄糖氧化酶稀释至浓度为6.3-7.2U/mL，记录稀释倍数f，作为待测酶液；/n(2)配置葡萄糖浓度为20g/L的葡萄糖磷酸盐缓冲液，溶剂为0.06mol/L pH5.6磷酸缓冲溶液；/n(3)取所述葡萄糖磷酸盐缓冲液，于37℃预热5.0-10.0min，与所述待测酶液按照体积比25：1混合，于37℃振荡反应57-63min取出；向混合溶液中按照体积比26:20加入0.1mol/L的氢氧化钠溶液，终止反应；加酚酞指示剂，用0.020-0.030mol/L的盐酸溶液滴定至红色恰好退去并且pH为8.95-9.00为滴...

【技术特征摘要】
1.一种检测饲料用葡萄糖氧化酶活力的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)将葡萄糖氧化酶稀释至浓度为6.3-7.2U/mL，记录稀释倍数f，作为待测酶液；
(2)配置葡萄糖浓度为20g/L的葡萄糖磷酸盐缓冲液，溶剂为0.06mol/LpH5.6磷酸缓冲溶液；
(3)取所述葡萄糖磷酸盐缓冲液，于37℃预热5.0-10.0min，与所述待测酶液按照体积比25：1混合，于37℃振荡反应57-63min取出；向混合溶液中按照体积比26:20加入0.1mol/L的氢氧化钠溶液，终止反应；加酚酞指示剂，用0.020-0.030mol/L的盐酸溶液滴定至红色恰好退去并且pH为8.95-9.00为滴定终点，记录所消耗的盐酸体积A；
(4)取与所述步骤(3)相同体积的葡萄糖磷酸盐缓冲液，在与所述步骤(3)相同预热温度和时间下进行预热，并与0.1mol/L的氢氧化钠溶液按照体积比25：20混合，摇匀混合，并向混合液中按照体积比45:1加入所述待测酶液，加酚酞指示剂，用与所述步骤(3)相同浓度的盐酸溶液滴定至红色恰好退去并且pH达到与所述步骤(3)pH相同时为滴定终点，记录所消耗的盐酸毫升数B；



式中：
A----滴定样品反应后消耗的盐酸(mL)；B----反应前消耗的盐酸(mL)；N----盐酸摩尔浓度(mol/L)；f----稀释倍数，1000—换算系数，T----反应时间(按min计)。


2.如权利要求1所述一种检测饲料用葡萄糖氧化酶活力的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，酶液浓度为6.5-6.9U/mL。


3.如权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘胜利，郭庆文，王兴吉，刘顺启，刘文龙，马传兴，张明超，陈洪伟，王春军，王克芬，
申请(专利权)人：山东隆科特酶制剂有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37