一种土壤硝酸还原酶活性测定的新方法技术

本发明专利技术属于土壤氮循环测定技术领域，公开了一种土壤硝酸还原酶活性测定的新方法，以硝酸钾(KNO

A new method for the determination of nitrate reductase activity in soil

【技术实现步骤摘要】
一种土壤硝酸还原酶活性测定的新方法
本专利技术属于土壤氮循环测定
，尤其涉及一种土壤硝酸还原酶活性测定的新方法。
技术介绍
土壤反硝化是土壤氮循环的一个重要过程，硝酸还原酶是将土壤硝化的最终产物硝态氮(NO3--N)还原成亚硝态氮(NO2--N)的一类还原酶，其活性大小可表征反硝化的强度，可间接影响土壤氮损失(硝酸盐淋失及气态氮损失等)，在农业生态系统中还会影响氮肥利用率。土壤硝酸还原酶活性的测定方法的基本原理为，NO3--N在硝酸还原酶的催化作用下转化NO2--N，反应前后NO3--N含量的差值即可代表土壤硝酸还原酶的活性。目前，最接近的现有技术：以往有关土壤硝酸还原酶活性的测定方法多参照关松荫等编著的《土壤酶及其研究法》(1986)以及李振高等编著的《土壤与环境微生物研究法》(2008)，以上方法原理和步骤基本相同，均是在有氢供体和厌氧条件下，测定还原前后硝态氮与酚二磺酸作用的蓝色反应差值(即吸光度差值)来表示硝酸还原酶活性，吸光度差值越大表示硝酸还原酶活性越高。现有技术的具体步骤为：取1g土样本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种土壤硝酸还原酶活性测定的新方法，其特征在于，所述土壤硝酸还原酶活性测定的新方法包括：以硝酸钾(KNO

【技术特征摘要】
1.一种土壤硝酸还原酶活性测定的新方法，其特征在于，所述土壤硝酸还原酶活性测定的新方法包括：以硝酸钾(KNO3)为底物，在30℃恒温和厌氧条件下对土壤进行24h的还原培养；
通过测定还原前后硝态氮(NO3--N)含量并计算差值得出每克(g)干土中被还原的NO3--N的量，以被还原的NO3--N的量表征该土壤的硝酸还原酶活性。


2.如权利要求1所述的土壤硝酸还原酶活性测定的新方法，其特征在于，所述土壤硝酸还原酶活性测定的新方法具体包括：
第一步，准确称取风干土样和烘干土样各1.00g放入50或100mL锥形瓶中，依次加入20mg碳酸钙(CaCO3)和1mL1％KNO3溶液，摇匀后再加入1mL1％葡萄糖溶液作为氢供体；
第二步，将锥形瓶放入真空容器中，用真空泵将容器内部抽真空至70KPa时关闭阀门；
第三步，将真空容器放入生化培养箱中，在30℃条件下恒温培养24h；
第四步，培养结束后，向锥形瓶内加入50mL纯水和1mL的硫酸铝钾饱和溶液，充分摇匀后用慢速定量滤纸过滤至样品瓶中；
第五步，用连续流动分析仪对标准曲线溶液和样品滤液中的NO3--N进行连续批量测定，直接得出滤液中的NO3--N浓度。


3.如权利要求2所述的土壤硝酸还原酶活性测定的新方法，其特征在于，一步进行前，需进行：
土壤准备：将每个新鲜土壤样品分成2份，一份自然风干，另一份放入烘箱内在180℃条件下烘干3h使土壤酶失去活性，取出冷却至室温，上述土样均过1mm筛；
土壤培养试剂配制：1％KNO3溶液、1％葡萄糖溶液以及硫酸铝钾饱和溶液；
连续流动分析仪上机测定试剂配制：0.1％硫酸铜(CuSO4)储备液、1％硫酸锌(ZnSO4)储备液、硫酸肼混合液、显色剂、4％氢氧化钠(NaOH)溶液、磷酸缓冲液。
标准溶液制备：用KNO3配置浓度为500mg/L的NO...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘涛，褚贵新，雷雨，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：新疆;65