【技术实现步骤摘要】
基于lacZ基因和pUC复制子的原核启动子报告系统及其构建方法和应用
本专利技术属于生物工程领域，具体涉及基于lacZ基因和pUC复制子的原核启动子报告系统及其构建方法和应用。
技术介绍
原核启动子是位于基因上游的一段能被RNA聚合酶识别、结合并起始转录的特定DNA序列，其主要功能是控制基因表达的强度及模式，是基因转录水平调控的中心，因此对启动子进行准确的识别与鉴定是研究分析基因功能及其调控机制的前提和基础，对于为实现特定实验目的而进行的相关基因工程载体构建和突变菌株改造亦具有着十分重要的意义。随着越来越多细菌和病毒基因组序列被测定并发布，以及生物信息学的发展，对启动子的识别可借助于各种基于不同算法的软件模型进行预测，但最终的验证或鉴定仍需通过报告基因系统来完成。迄今，已报道的可用于启动子筛选及活性测定的报告基因有氯霉素乙酰基转移酶、绿色荧光蛋白、荧光素酶和β-半乳糖苷酶等，其中由lacZ基因编码的β-半乳糖苷酶广泛存在于多种生物中，能水解乳糖为半乳糖和葡萄糖，也具有转移半乳糖苷的作用，可将乳糖转变为异乳糖，...
【技术保护点】
1.一种基于lacZ基因和pUC复制子的原核启动子报告系统，其特征在于，所述报告系统包括源自于pFLX107的pUC复制子，氯霉素乙酰转移酶基因，核糖体RNA操纵子T1T2终止子，lambda t0转录终止子，以及源自于质粒pRCL且内部ClaI、SacI和NdeI位点被沉默突变的lacZ基因。/n
【技术特征摘要】
1.一种基于lacZ基因和pUC复制子的原核启动子报告系统，其特征在于，所述报告系统包括源自于pFLX107的pUC复制子，氯霉素乙酰转移酶基因，核糖体RNA操纵子T1T2终止子，lambdat0转录终止子，以及源自于质粒pRCL且内部ClaI、SacI和NdeI位点被沉默突变的lacZ基因。
2.根据权利要求1所述的原核启动子报告系统，其特征在于，所述紧邻lacZ基因上游的启动子探测区域含有SphI，PstI，EcoRI，XhoI，KpnI，SacI，SpeI和BglII多克隆位点，所述lambdat0转录终止子位于多克隆位点前。
3.权利要求1~2任一项所述的原核启动子报告系统的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）通过定点突变将lacZ基因中的ClaI、SacI和NdeI位点消除，并克隆至质粒pFLX107中启动子pR后的BglII和XbaI酶切位点之间，构建成含报告基因lacZ的重组质粒pFLX107-lacZ；
2）通过设计合成含有不同多克隆位点的序列将质粒pFLX107-lacZ中lacZ前的启动子pR及其调控元件cI857置换，依次构建出基于lacZ和pUC复制子的启动子报告系统。
4.根据权利要求3所述的原核启动子报告系统的构建方法，其特征在于，所述步骤2）的具体步骤如下：
S1）将寡聚核苷酸片段MCS1-F/MCS1-R和MCS2-F/MCS2-R溶于STE缓冲液中，取等体积混合后水浴，徐冷至室温，变性退火后的引物形成可与SacII...
【专利技术属性】
技术研发人员：付立霞，徐敬潇，杨辉，黄志斌，龚建森，韩先干，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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