本发明专利技术提供一种提高乳酸菌谷胱甘肽过氧化物酶酶活的方法，包括以下步骤：步骤1，对乳酸菌进行活化培养，得到乳酸菌菌液；步骤2，将乳酸菌菌液接种至含亚硒酸钠的液体培养基中，经过盐胁迫或热胁迫富硒培养。本发明专利技术使用亚硒酸钠对乳酸菌进行富硒培养，乳酸菌在经过盐胁迫或热胁迫富硒培养后，乳酸菌中谷胱甘肽过氧化物酶酶活得到提高。
A method of improving glutathione peroxidase activity of Lactobacillus
【技术实现步骤摘要】
一种提高乳酸菌谷胱甘肽过氧化物酶酶活的方法
本专利技术涉及谷胱甘肽过氧化物酶，具体为一种提高乳酸菌谷胱甘肽过氧化物酶酶活的方法。
技术介绍
谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathioneperoxidase，GSH-Px)，是生物体内一种重要的含硒过氧化物分解酶。GSH-Px的活性中心是硒代半胱氨酸，主要作用是与维生素等协同作用，保护细胞免受过氧化物的损伤、清除体内有害的自由基，是细胞内抗过氧化物作用的酶促保护系统重要组成成分。GSH-Px能催化还原型谷胱甘肽(GSH)变为氧化型谷胱甘肽(GSSG)，使有毒的过氧化物还原成无毒的羟基化合物，同时促进H2O2的分解，从而保护细胞膜的结构及功能不受过氧化物的干扰及损害。GSH-Px主要包括4种：分别为胞浆GSH-Px、血浆GSH-Px、磷脂氢过氧化物GSH-Px及胃肠道专属性GSH-Px。但是，目前现有的谷胱甘肽过氧化物酶的酶活普遍较低，因此，提高谷胱甘肽过氧化物酶活性具有重要意义。
技术实现思路
针对现有技术中存在的问题，本专利技术提供一种提高乳酸菌谷胱甘肽过氧化物酶酶活的方法。该方法简单易行、效果显著，解决了现有的谷胱甘肽过氧化物酶的酶活普遍较低的问题。本专利技术是通过以下技术方案来实现：一种提高乳酸菌谷胱甘肽过氧化物酶酶活的方法，包括以下步骤：步骤1，对乳酸菌进行活化培养，得到乳酸菌菌液；步骤2，将乳酸菌菌液接种至含亚硒酸钠的液体培养基中，在37℃恒温静置培养。优选的，步骤2中，含亚硒酸钠的液体培养基中亚硒酸钠的浓度为20-160μg/mL。优选的，步骤2中，液体培养基中还含有NaCl。进一步的，液体培养基中NaCl的质量浓度为0.4％-0.9％。优选的，步骤2中，先将乳酸菌菌液接种于MRS液体培养基，于37℃恒温培养至对数期后，进行热胁迫处理，然后再向MRS液体培养基中加入亚硒酸钠溶液，在37℃恒温静置培养。进一步的，热胁迫处理的温度为45-55℃。优选的，步骤1具体为：将经高温高压灭菌后的MRS肉汤培养基注入乳酸菌冻干管中，用移液枪吹打，使乳酸菌充分溶解成菌悬液；将菌悬液在菌种规定条件下培养，活化成功后，将菌株接种到MRS肉汤培养基中，在恒温培养箱中静置37℃下培养，连续活化三代。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果：本专利技术使用亚硒酸钠对乳酸菌进行富硒培养，测定谷胱甘肽过氧化物酶酶活，通过研究发现，乳酸菌在经过富硒培养后，乳酸菌中谷胱甘肽过氧化物酶酶活得到提高，其中部分菌株鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和嗜酸乳杆菌的GSH-Px活性有显著提高。这可能是因为Se是GSH-Px的催化位点中的硒代半胱氨酸合成的必要元素，硒元素的增补可使硒代半胱氨酸的表达量增加，从而增强了GSH-Px酶活性。进一步的，通过盐胁迫配合富硒培养，进一步的提高了乳酸菌中谷胱甘肽过氧化物酶酶活，可能是因为一定量的盐浓度可以促进乳酸菌富硒。进一步的，通过热胁迫富硒培养，进一步的提高了乳酸菌胞内GSH-Px活性，热胁迫可能使乳酸菌诱导产生热休克蛋白，使得部分酶活力增加。附图说明图1为七株富硒乳酸菌的GSH-Px活性；图2为不同亚硒酸钠浓度下培养的鼠李糖乳杆菌的GSH-Px活性；图3为不同亚硒酸钠浓度下培养的嗜酸乳杆菌的GSH-Px活性；图4为不同亚硒酸钠浓度下培养的罗伊氏乳杆菌的GSH-Px活性；图5为不同盐浓度胁迫培养的鼠李糖乳杆菌的GSH-Px活性；图6为不同盐浓度胁迫培养的嗜酸乳杆菌的GSH-Px活性；图7为不同盐浓度胁迫培养的罗伊氏乳杆菌的GSH-Px活性；图8为不同温度胁迫培养的鼠李糖乳杆菌的GSH-Px活性；图9为不同温度胁迫培养的嗜酸乳杆菌的GSH-Px活性；图10为不同温度胁迫培养的罗伊氏乳杆菌的GSH-Px活性。具体实施方式下面结合具体的实施例对本专利技术做进一步的详细说明，所述是对本专利技术的解释而不是限定。本专利技术提高乳酸菌谷胱甘肽过氧化物酶酶活的方法，包括以下步骤：步骤1，菌种的活化将0.3-0.5mL经高温高压灭菌后的MRS肉汤培养基注入乳酸菌冻干管中，用移液枪轻轻吹打，使之充分溶解成菌悬液。吸取菌悬液，全部打入2个试管中，在菌种规定条件下培养，活化成功后，为了提高菌种的活力，将各菌株接种到MRS肉汤培养基中，在恒温培养箱中静置37℃下培养24-48h，连续活化三代。步骤2，乳酸菌富硒培养配制0.17mg/mL亚硒酸钠溶液和MRS液体培养基并预先灭菌，使用时，将亚硒酸钠溶液加入MRS液体培养基中并稀释成所需要的浓度。将上述三代菌液接种1mL于含亚硒酸钠的MRS液体培养基中，将菌液加入到不含硒的MRS液体培养基培养作为对照，37℃，pH值5.6～7.2条件下恒温静置培养24h。将以上所得的菌液5000r/min离心4min，菌体用生理盐水洗涤后于10000r/min离心20min，以洗去培养基，重复至上清液无色透明。将菌体重悬于生理盐水，冰浴超声波破碎细胞(每工作2s间歇2s，输出功率100w)10min后，在4℃、10000r/min离心15min，收集上清液，即为乳酸菌胞内提取物，将胞内提取物于-20℃保存备用。步骤3，GSH-Px活性测定谷胱甘肽过氧化物酶是体内存在的一种含硒清除自由基和抑制自由基反应的系统，能够催化过氧化氢与还原型谷胱甘肽反应，在制得的酶液中加入过氧化氢，在GSH-Px催化作用下，GSH的含量在反应前后会有一定的下降，通过测定的分解速率来确定谷胱甘肽过氧化物酶的酶活。步骤2中，还可以在富硒培养中的MRS液体培养基中加入NaCl，从而进行盐胁迫富硒培养。或者，在富硒培养之前将菌液进行热胁迫处理。标准曲线制作：配制浓度为0μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L、80μmol/L、100μmol/L的GSH标准溶液(0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL浓度为1mmol/LGSH溶液分别加入偏磷酸沉淀剂8mL后蒸馏水定容到10mL)。2mL标准溶液同时加入0.32mol/LNa2HPO4溶液2.5mL，DTNB溶液0.5mL。测423nm下OD值(5min内)。绘制标准曲线。粗酶液制备：谷胱甘肽过氧化物酶为乳酸菌细胞内的酶，粗酶液能够通过破碎细胞制得。粗酶液酶活测定方法与标准曲线制作方法相同。对照以灭活的粗酶液作为样品溶液，按公式(1)计算酶的比活力单位。其中：A为GSH标准曲线斜率。实施例1步骤1，菌种的活化将0.3mL经高温高压灭菌后的MRS肉汤培养基注入鼠李糖乳杆菌冻干管中，用移液枪轻轻吹打，使之充分溶解成菌悬液。吸取菌悬液，全部打入2个试管中，在菌种规定条件下培养，活化成功后，为了提高菌种的活力，将各菌株接种到MRS肉汤培养基中，在恒温培养箱本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种提高乳酸菌谷胱甘肽过氧化物酶酶活的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤1，对乳酸菌进行活化培养，得到乳酸菌菌液；/n步骤2，将乳酸菌菌液接种至含亚硒酸钠的液体培养基中，在37℃恒温静置培养。/n
【技术特征摘要】
1.一种提高乳酸菌谷胱甘肽过氧化物酶酶活的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1，对乳酸菌进行活化培养，得到乳酸菌菌液；
步骤2，将乳酸菌菌液接种至含亚硒酸钠的液体培养基中，在37℃恒温静置培养。
2.根据权利要求1所述的提高乳酸菌谷胱甘肽过氧化物酶酶活的方法，其特征在于，步骤2中，含亚硒酸钠的液体培养基中亚硒酸钠的浓度为20-160μg/mL。
3.根据权利要求1所述的提高乳酸菌谷胱甘肽过氧化物酶酶活的方法，其特征在于，步骤2中，液体培养基中还含有NaCl。
4.根据权利要求3所述的提高乳酸菌谷胱甘肽过氧化物酶酶活的方法，其特征在于，液体培养基中NaCl的质量浓度为0.4％-0.9％。
【专利技术属性】
技术研发人员：徐颖，贺佳璇，许牡丹，张婷，缑敬轩，
申请(专利权)人：陕西科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61
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