【技术实现步骤摘要】
一种重组兔单克隆抗体的制备方法
本专利技术属于单克隆抗体制备领域，具体涉及一种重组兔单克隆抗体的制备方法。
技术介绍
抗体是指机体由于抗原的刺激而产生的具有保护作用的蛋白质，它是一种由浆细胞(效应B细胞)分泌，被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质，抗体在疾病的诊断、免疫防治及基础研究中发挥作重要作用，抗体分为单克隆抗体和多克隆抗体，单克隆抗体在医药治疗上有广泛的前景，被用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反应等多种疾病；中国专利技术专利CN1763217A公开了一种单克隆抗体的制备方法及其应用，该专利技术用杀菌后的金色葡萄球菌免疫BALB/c小鼠，再提取免疫鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合，经筛选克隆获得分泌抗金色葡萄菌单克隆抗体的杂交瘤株，得到所需单克隆抗体，该专利技术通过杂交瘤细胞进一步进行获得单克隆抗体的制备效率较低高，产量不高，同时通过小鼠免疫系筛选的单克隆抗体单抗亲和力整体较低，识别的抗原表位较为单一，不能识别没有免疫原性的抗原。
技术实现思路
【技术保护点】
1.一种重组兔单克隆抗体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：/n(1)、将兔背部部分毛发剪下，用酒精擦拭兔的背部，将重组蛋白和弗氏完全佐剂加入烧杯中，搅拌至充分乳化，注射至兔背部皮下进行培养，得到免疫增强的兔；/n(2)、提取步骤(1)获得的免疫增强的兔的B细胞，通过兔的B细胞进一步获得混合抗体基因片段；/n(3)、将步骤(2)获得的混合抗体基因片段进行扩增，通过扩增后的混合抗体基因片段建立噬菌体抗体文库，进一步对噬菌体文库进行包装；/n(4)、将目的抗原包被于固相表面加入步骤(3)形成的噬菌体抗体文库，得到目的抗体，进行检测获得抗体序列；/n(5)、步骤(4)得到的抗体...
【技术特征摘要】
1.一种重组兔单克隆抗体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)、将兔背部部分毛发剪下，用酒精擦拭兔的背部，将重组蛋白和弗氏完全佐剂加入烧杯中，搅拌至充分乳化，注射至兔背部皮下进行培养，得到免疫增强的兔；
(2)、提取步骤(1)获得的免疫增强的兔的B细胞，通过兔的B细胞进一步获得混合抗体基因片段；
(3)、将步骤(2)获得的混合抗体基因片段进行扩增，通过扩增后的混合抗体基因片段建立噬菌体抗体文库，进一步对噬菌体文库进行包装；
(4)、将目的抗原包被于固相表面加入步骤(3)形成的噬菌体抗体文库，得到目的抗体，进行检测获得抗体序列；
(5)、步骤(4)得到的抗体序列进行分析，构建表达载体并进行鉴定。
2.根据权利要求1所述的一种重组兔单克隆抗体的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述的兔为3公斤健康新西兰大自兔，所述的重组蛋白的浓度为1mg/ml；所述的免疫增强的兔的培养过程如下：将1mg重组蛋白和等体积的弗氏完全佐剂加入烧杯中，进行搅拌至充分乳化，制得第一混合溶液，将第一混合溶液注射至兔背部皮下，进行免疫增强21天后，将0.5mg重组蛋白和等体积的弗氏完全佐剂加入烧杯中，进行搅拌至充分乳化，制得第二混合溶液，将第二混合溶液注射至兔背部皮下，进行免疫增强21天，得到免疫增强的兔。
3.根据权利要求1所述的一种重组兔单克隆抗体的制备方法，其特征在于：步骤(2)所述的兔B细胞提取过程如下：对免疫增强的兔进行耳缘静脉采血10ml，使用兔淋巴细胞分离液进行处理，获得兔外周血PBMC，使用磁珠偶联真核表达的兔CD19蛋白，得到高纯度的兔B细胞；所述的混合抗体基因片段的制取方法如下：通过Trizol法提取兔B细胞RNA，并进行逆转录实验，获得cDNA，使用特异性引物进行PCR，获得混合抗体基因片段。
4.根据权利要求1所述的一种重组兔单克隆抗体的制...
【专利技术属性】
技术研发人员：雍金贵，缪连军，张磊，
申请(专利权)人：安徽环球基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34
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