一种提高去除人免疫球蛋白中IgA载量的层析工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种提高去除人免疫球蛋白中IgA载量的层析工艺，对经低温乙醇法得到的二次沉淀组分进行分离提纯，包括以下步骤：S1：对二次沉淀进行溶解并过滤，得到过滤液；S2：调整过滤液的层析前参数，得到层析前溶液；S3：对层析前溶液进行层析。本工艺能够将静注人免疫球蛋白溶液中IgA含量控制在国家要求范围内，节约成本，提高去除人免疫球蛋白中IgA载量。

【技术实现步骤摘要】
一种提高去除人免疫球蛋白中IgA载量的层析工艺
本专利技术涉及生物工程
，尤其涉及一种提高去除人免疫球蛋白中IgA载量的层析工艺。
技术介绍
人免疫球蛋白，是取健康献血员的新鲜血浆或保存期不超过2年的冰冻血浆，每批最少应由1000名以上健康献血员的血浆混合。用低温乙醇蛋白分离法分段沉淀提取免疫球蛋白组分，经超滤或冷冻干燥脱醇、浓缩和灭活病毒处理等工序制得，其免疫球蛋白纯度应不低于90％。然后配制成蛋白浓度为10％的溶液，加适量稳定剂，除菌滤过，无菌灌装制成。静注人免疫球蛋白的活性成分为人免疫球蛋白，以1000人份以上的健康人血浆为原料，分离制备得到IgG免疫球蛋白。静注人免疫球蛋白含有广谱抗病毒、细菌或其它病原体的IgG抗体，另外免疫球蛋白的独特型和独特型抗体能形成复杂的免疫网络，所以具有免疫替代和免疫调节的双重治疗作用，临床上主要用于原发性免疫球蛋白缺乏症、继发性免疫球蛋白缺陷病、自身免疫性疾病。提取人免疫球蛋白的技术主要是低温乙醇法，低温乙醇法始于20世纪40年代。但是低温乙醇分离蛋白质的方法制得的免疫球蛋白不能用于静脉注射，否则会引起严重的副反应，这是因为，除了体内缺乏IgG外，另外一个重要的原因是制剂中存在着与IgG聚合体相关的抗补体活性。为了治疗像原发性免疫缺陷、免疫性血小板缺乏性紫癜和皮肤黏膜淋巴结综合征等需要注射大剂量的免疫球蛋白的疾病，人们的研究重点放在如何减少抗补体活性上。主要的方法包括酶解法和化学修饰法，在消除和减少抗补体活性的同时，也影响到了IgG的全活性表达。如IgG上Fc段的功能与效应。经过多次的改进，现在的制备技术主要有低温乙醇法结合层析法。低温乙醇法以人血浆为原料，一般经过二次沉淀，得到免疫球蛋白的二次沉淀组分，二次沉淀组分中包括大部分的IgG、少量的IgA、IgM、还带有多聚体和PKA。免疫球蛋白中主要富含单体和二聚体的IgG，同时也含有如IgA、IgM等微量其它球蛋白，含有这些微量球蛋白的产品在使用时，会产生不良反应，例如，临床上IgA缺乏症患者在使用含有IgA的产品会产生不良反应，严重者甚至威胁生命。离子交换层析是一种在生物制药行业广泛应用的纯化方法，主要是根据各种蛋白分子的表面净电荷差异，通过调整pH值和电导率来分离纯化蛋白质。在层析工艺中，溶液的蛋白含量和层析介质的载量是影响层析工艺时间和规模的重要因素。现有很多厂家采用层析的技术去除免疫球蛋白中的IgA，但是载量太低，成本太高，如何在提高载量的同时，又能达到去除IgA的效果是技术难点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种提高去除人免疫球蛋白中IgA载量的层析工艺，既能够有效地去除IgA，又能提高IgA载量。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：一种提高去除人免疫球蛋白中IgA载量的层析工艺，对经低温乙醇法得到二次沉淀组分进行分离提纯，包括以下步骤：一种提高去除人免疫球蛋白中IgA载量的层析工艺，对经低温乙醇法得到的二次沉淀组分进行分离提纯，包括以下步骤：S1：对二次沉淀进行溶解并过滤，得到过滤液；S2：调整过滤液的层析前参数，得到层析前溶液；S3：对层析前溶液进行层析。其中，步骤S1具体如下：P1：用相当于二次沉淀组分体积5～10倍的注射用水溶解二次沉淀组分，并在2～8℃下搅拌2～4小时得到溶解液；P2：对溶解液进行过滤时，用终端为0.2μm滤芯过滤，得到过滤液。其中，步骤P2中，过滤时，过滤压力≤0.15MPa。其中，步骤S2具体如下：调整过滤液pH为5.70～5.90，蛋白浓度为10～30g/L，电导率不高于0.30ms/cm，得到层析前溶液。其中，配制1.0mol/L醋酸溶液，将1.0mol/L醋酸溶液以300～400ml/min加入过滤液中，调整过滤液pH为5.70～5.90；若pH低于5.70，用0.5mol/L氢氧化钠溶液调整；用低温注射用水或者平衡液调整蛋白浓度为10～30g/L，电导率不高于0.30ms/cm。其中，所述平衡液为0.0025mol/L的醋酸钠/醋酸缓冲液，pH为5.70-5.90。其中，所述层析包括凝胶前平衡、制品层析和凝胶后处理；层析前，先对凝胶进行冲洗平衡，平衡至凝胶的pH与层析前溶液的pH值差值为-0.10～0.10；依据层析前溶液的蛋白浓度，制品层析时按照不同的凝胶层析载量上样，上样至紫外起峰开始收集流穿液，上样结束后用平衡液2顶出层析柱里的制品；搅拌均匀的测量流穿液体积，取样检测蛋白浓度、pH和电导率；凝胶后处理时，用1.0-3cm/min的线性流速分别走洗脱液3-5倍柱床体积、凝胶CIP液3-5倍柱床体积、凝胶封存液3-5倍柱床体积，收集洗脱液，测量体积，取样检测蛋白含量，并留样。其中，对凝胶进行平衡包括：按1.5～3.0cm/min的线性流速分别用0.5mol/L氢氧化钠溶液走3～5倍柱床体积、平衡液1走3～5倍柱床体积、平衡液2走3～5倍柱床体积，平衡pH至制品上样pH值±0.10。其中，所述平衡液1为0.025mol/L醋酸钠/醋酸缓冲液，pH5.70～5.90；所述平衡液2为0.0025mol/L醋酸钠/醋酸缓冲液，pH5.70～5.90。其中，所述凝胶CIP液为0.5mol/L氢氧化钠、1.0mol/L氯化钠和20％乙醇的混合液，所述凝胶封存液为0.15mol/L氯化钠和20％乙醇的混合液。综上所述，本专利技术具有以下有益效果：1、提高层析前的蛋白浓度，减少层析前样品体积，在同样规模的生产条件下，使用的生产设备较小，减少了资源的浪费；2、提高单位凝胶的载量，在同规模生产条件下，减少凝胶的采购量和层析柱的大小，节约了成本；3、在高蛋白浓度高载量条件下，层析时虽然流速降低、增加了平衡液1的上样时间，但是样品层析时间减少的幅度大于增加的时间，因此总的层析时间减少，避免蛋白溶液长时间存放可能导致的污染及变性；4、在蛋白含量20g/L、载量900g/L凝胶的条件下，去除率能达到90％以上；在蛋白含量30g/L、载量1400g/L凝胶的条件下，去除率能达到80％以上，去除后残余的IgA远远在我们的要求之上；也就是说，载量可提高至1400g/L，即每升层析介质可层析含1400g蛋白的溶液。具体实施方式下面将结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本专利技术方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。实施例一：一种提高去除人免疫球蛋白中IgA载量的层析工艺，对经低温乙醇法得到二次沉淀组分进行分离提纯，包括以下步骤：S1：对二次沉淀进行溶解并过滤，得到过滤液；具体地，用相当于二次沉淀组分体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高去除人免疫球蛋白中IgA载量的层析工艺，对经低温乙醇法得到的二次沉淀组分进行分离提纯，其特征在于，包括以下步骤：/nS1：对二次沉淀进行溶解并过滤，得到过滤液；/nS2：调整过滤液的层析前参数，得到层析前溶液；/nS3：对层析前溶液进行层析。/n

【技术特征摘要】
1.一种提高去除人免疫球蛋白中IgA载量的层析工艺，对经低温乙醇法得到的二次沉淀组分进行分离提纯，其特征在于，包括以下步骤：
S1：对二次沉淀进行溶解并过滤，得到过滤液；
S2：调整过滤液的层析前参数，得到层析前溶液；
S3：对层析前溶液进行层析。


2.根据权利要求1所述的一种提高去除人免疫球蛋白中IgA载量的层析工艺，其特征在于，步骤S1具体如下：
P1：用相当于二次沉淀组分体积5～10倍的注射用水溶解二次沉淀组分，并在2～8℃下搅拌2～4小时得到溶解液；
P2：对溶解液进行过滤时，用终端为0.2μm滤芯过滤，得到过滤液。


3.根据权利要求2所述的一种提高去除人免疫球蛋白中IgA载量的层析工艺，其特征在于，步骤P2中，过滤时，过滤压力≤0.15MPa。


4.根据权利要求1所述的一种提高去除人免疫球蛋白中IgA载量的层析工艺，其特征在于，步骤S2具体如下：调整过滤液pH为5.70～5.90，蛋白浓度为10～30g/L，电导率不高于0.30ms/cm，得到层析前溶液。


5.根据权利要求4所述的一种提高去除人免疫球蛋白中IgA载量的层析工艺，其特征在于，配制1.0mol/L醋酸溶液，将1.0mol/L醋酸溶液以300～400ml/min加入过滤液中，调整过滤液pH为5.70～5.90；若pH低于5.70，用0.5mol/L氢氧化钠溶液调整；用低温注射用水或者平衡液调整蛋白浓度为10～30g/L，电导率不高于0.30ms/cm。


6.根据权利要求5所述的一种提高去除人免疫球蛋白中IgA载量的层析工艺，其特征在于，所述平衡液为0.0025mol/L的醋...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏琦鸿，李凯旋，滕世超，张宝献，高榕宏，周康森，彭建，
申请(专利权)人：华兰生物工程重庆有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆;50