关于抗体的复制保护制造技术

本发明专利技术涉及包含抗体和标签的抗体缀合物及其用途，其中存在于抗体中的一种或多种元素显示出与所述一种或多种元素的自然存在的同位素比率不同的同位素比率，其中自然界中的稀有同位素的量增加至抗体中的相应元素原子的至少4%。

On the replication protection of antibodies

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】关于抗体的复制保护专利
本专利技术涉及包含抗体和标签的抗体缀合物及其用途，其中存在于抗体中的一种或多种元素显示出与所述一种或多种元素的自然存在的同位素比率不同的同位素比率，其中自然界中的稀有同位素的量增加至抗体中的相应元素原子的至少4%。背景蛋白质特别是抗体的一级氨基酸序列（包括共价连接的修饰）可以使用质谱法容易地测定（Applicationsofliquidchromatographycoupledtomassspectrometry-basedmetabolomicsinclinicalchemistryandtoxicology:Areview，2011，第44卷，第1期，第119-135页，特刊）。一般，执行下述步骤：a）分离靶；b）用产生多种肽的多种不同的酶来酶促消化靶；c）层析分离所产生的肽；d）使用质谱法测量完整肽以及其序列特异性片段的质量；e）测量的数据的基于软件的解释用于鉴定肽的序列；e）由不同蛋白酶产生的重叠肽的组合用于确定整个蛋白质的完整氨基酸序列。对于这个过程，仅需要约50µg的蛋白质，以及商购可得的HPLC和质谱法仪器（例如来自ABSciex的TripleTOF系统或来自Thermofisher的基于Orbitrap的混合MS仪器）和合适的软件（例如来自BioinformaticsSolutions，Inc的PEAKS®StudioSoftware）。迄今，尚无可用于保护蛋白质例如抗体免于通过质谱法测序的机制。然而，本领域存在保护蛋白质免于被测序的迫切需要，所述蛋白质特别是可能具有商业利益的那些蛋白质，这是因为它们可以是药物、诊断和/或生物技术产品的部分。这个问题通过本专利技术人提供蛋白质特别是抗体以及产生且使用其的方法得到解决，所述蛋白质特别是抗体，包含一种或多种元素的稳定同位素的改变的比率。蛋白质中的一种或多种元素的稳定同位素的改变的比率的掺入改变所述蛋白质的质量。如果使用质谱法进行分析，则每种产生的肽的质量以及完整蛋白质的质量两者均与自然存在的那些不同。因此，使用可用的标准工具的序列确定不再是可能的。因此标记的蛋白质的进一步优点是蛋白质内的同位素的均匀分布，其导致质谱法谱中降低的信号。专利技术概述在第一个方面，本专利技术涉及包含抗体和标签的抗体缀合物，其中存在于抗体中的一种或多种元素显示出与所述一种或多种元素的自然存在的同位素比率不同的同位素比率，其中自然界中的稀有同位素的量增加至抗体中的相应元素原子的至少4%。在第二个方面，本专利技术涉及如本专利技术的第一个方面所详细说明的抗体缀合物用于预防抗体（特别是经由MassSpec）的测序的用途。在第三个方面，本专利技术涉及稳定同位素标记用于保护如本专利技术的第一个方面所详细说明的抗体缀合物的序列免于（特别是经由MassSpec）被测定的用途。在第四个方面，本专利技术涉及试剂盒，其包括如本专利技术第一个方面所详细说明的至少一种抗体缀合物。附图列表图1：LC-MS/MS后的序列覆盖度；A：在正常培养基中表达的抗-TnT-抗体；B：在C13标记的培养基中表达的抗-TnT-抗体图2：同位素效应的模拟图3：肽NTQPIMDTDGSYFVYSK的测量谱；A：模拟；B：在正常（第一谱）或C13标记的培养基（第二谱）中表达的抗-TnT-抗体图4：Biacore测定–示意图图5：A+B：Biacore测定中的抗-TnT-抗体的结合亲和力详述定义在下文详细描述本专利技术之前，应理解，本专利技术并不限于本文描述的特定方法、规程和试剂，这是因为这些可以变化。还应理解，本文使用的术语仅是为了描述特定实施方案起见的，且并不是用来限制仅由所附权利要求限制的本专利技术的范围的。除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语都具有与本领域普通技术人员通常理解的相同的含义。在本说明书的文本自始至终引用了几个文件。无论是上文还是下文，本文引用的每个文件（包括所有专利、专利申请、科学出版物、制造商的说明书、说明书等），都特此整体引入作为参考。本文的任何内容均不应解释为承认本专利技术无权凭借在先专利技术而早于这种公开内容。本文引用的一些文件表征为被“引入作为参考”。在这种引入的参考文献的定义或教导与本说明书中叙述的定义或教导之间冲突的情况下，以本说明书的文本为准。在下文中，将描述本专利技术的要素。这些要素与特定实施方案一起列出，然而，应该理解，它们可以以任何方式和任何数目组合，以产生额外的实施方案。各种描述的实例和优选实施方案不应该被解释为将本专利技术限制于仅明确描述的实施方案。这种描述应该被理解为支持并包含将明确描述的实施方案与任何数目的所公开和/或优选的要素组合的实施方案。此外，除非上下文另外指出，否则本申请中所有描述的要素的任何排列和组合都应该被视为由本申请的描述公开。单词“包含（comprise）”以及变化形式如“包含（comprises）”和“包含（comprising）”，将被理解为暗示包括所陈述的整数或步骤或者整数或步骤组，但不排除任何其它整数或步骤或者整数或步骤组。如在本说明书和所附权利要求中使用的，单数形式“一个（a）”、“一种（an）”和“该/所述（the）”包括复数对像，除非内容另外明确指出。百分比、浓度、量和其它数字数据可以在本文中以“范围”格式表示或呈现。应理解，这种范围格式仅为了方便和简洁而使用，并且因此应该灵活地解释为不仅包括明确叙述为范围界限的数值，而且包括在该范围内包含的所有个别的数值或子范围，如同每个数值和子范围被明确叙述一样。作为举例说明，“4至20%”的数字范围应该被解释为不仅包括明确叙述的4%至20%的值，而且包括在指出的范围内的个别值和子范围。因此，在这个数字范围内包括的是个别值，例如4、5、6、7、8、9、10、...、18、19、20%，以及子范围，例如4-10%、5-15%、10-20%等。这个相同原理适用于仅叙述一个数值的范围，如例如最小值或最大值。此外，无论所描述的范围的宽度或特征如何，这种解释都应该适用。当与数值结合使用时，术语“约”指的是包含在范围内的数值，所述范围具有比所指出的数值小5%的下限，并且具有比所指出的数值大5%的上限。术语“氨基酸”一般指任何单体单位，其包含取代或未取代的氨基，取代或未取代的羧基，以及一个或多个侧链或基团，或这些基团中的任一种的类似物。示例性的侧链包括，例如，硫醇、硒基、磺酰基、烷基、芳基、酰基、酮基、叠氮基、羟基、肼、氰基、卤、酰肼、链烯基、炔基、醚、硼酸根、硼酸酯（boronate）、磷酸基、膦酰基、膦、杂环、烯酮、亚胺、醛、酯、硫羰酸、羟胺或这些基团的任何组合。其它代表性氨基酸包括，但不限于，包含可光活化的交联剂的氨基酸、金属结合氨基酸、自旋标记的氨基酸、荧光氨基酸、含金属氨基酸、具有新官能团的氨基酸、与其它分子共价或非共价相互作用的氨基酸、光敏笼状（photocaged）和/或可光异构化的氨基酸、放射性氨基酸、包含生物素或生物素类似物的氨基酸、糖基化氨基酸、其它碳水化合物修饰的氨基酸、包含聚乙二醇或聚本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.包含抗体和标签的抗体缀合物，其中存在于所述抗体中的一种或多种元素显示出与所述一种或多种元素的自然存在的同位素比率不同的同位素比率，其中自然界中的稀有同位素的量增加至所述抗体中的相应元素原子的至少4%。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171020 EP 17197603.81.包含抗体和标签的抗体缀合物，其中存在于所述抗体中的一种或多种元素显示出与所述一种或多种元素的自然存在的同位素比率不同的同位素比率，其中自然界中的稀有同位素的量增加至所述抗体中的相应元素原子的至少4%。


2.权利要求1的缀合物，其中所述稀有同位素增加至所述抗体中的相应元素原子的6-12%、6-10%或8-10%。


3.权利要求1或2的缀合物，其中所述稀有同位素增加至所述抗体中的相应元素原子的30-70%，优选40-60%，优选50%。


4.根据权利要求1至3中任一项的缀合物，其中所述稀有稳定同位素选自元素碳（C）的13C、元素氢（H）的2H、元素氮（N）的15N以及元素氧（O）的17O和/或18O。


5.根据权利要求1至4中任一项的缀合物，其中所述稳定同位素掺入所述抗体的非必需氨基酸中。


6.根据权利要求1至5中任一项的缀合物，其中所述标签选自结合对的配偶体...

【专利技术属性】
技术研发人员：H迪费尔，U科博尔德，A莱南巴赫，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH