一类新的4-苯基取代香豆素类化合物及其制备方法技术

本发明专利技术属于医药技术领域，具体公开了以藤黄科(Guttiferae)铁力木属(Mesua)植物铁力木(Mesua ferrea Linn.)的干燥茎叶为原料，经提取、硅胶柱色谱、反相ODS柱色谱、Sephadex LH‑20、HPLC半制备等多种分离方法获得到三种新的4‑苯基取代香豆素类化合物Ⅰ：

A new 4-phenylsubstituted coumarins and their preparation

【技术实现步骤摘要】
一类新的4-苯基取代香豆素类化合物及其制备方法
本专利技术涉及医药
，具体涉及从铁力木植物的干燥茎叶中分离得到一类新的4-苯基取代香豆素类化合物及其分离制备方法。
技术介绍
铁力木(MesuaferreaLinn.)为藤黄科(Guttiferae)铁力木属(Mesua)植物，常绿乔木，在我国，该植物主产云南南部(西双版纳，孟连)、西部(瑞丽，陇川，梁河)和西南部(耿马，沧源)、广东(信宜)、广西(藤县，容县)等地，通常零星栽培；我国只有在云南耿马县孟定，海拔540-600米的低丘坡地，尚保存小面积的逸生林。该植物为印度民间药用植物，在民间，通常取其种子的水煎剂以治疗胃炎，支气管炎和蛇咬创口。现代化学研究表明在铁力木属植物中富含香豆素类，苯并吡酮类，环酮类及环己二酮类等结构类型化合物，多具有抗菌，抗炎，抗氧化，细胞毒活性等生物活性。对其中化学成分的进一步分离研究，及新化合物的寻找对于新药研发，先导化合物发现具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术提供了从铁力木茎叶中提取分离得到的一类新的4-苯基取代香豆素类化合物，具有如下结构：本专利技术另一目的在于提供本专利技术所述的4-苯基取代香豆素类化合物的制备方法，以藤黄科(Guttiferae)铁力木属(Mesua)植物铁力木(MesuaferreaLinn.)的干燥茎叶为原料，依次经硅胶柱色谱、反相ODS柱色谱、凝胶柱色谱、HPLC色谱法分离获得。优选的，包括如下步骤：(1)取铁力木干燥茎叶，粉碎，使用水和/或醇浸提，优选使用水、甲醇、乙醇中的一种或几种，更优选使用95％乙醇水溶液浸提，浓缩；(2)将步骤(1)所得的浓缩物用硅胶拌样，依次用石油醚，氯仿各洗脱2～3个柱体积，收集氯仿洗脱液，浓缩得到浸膏；(3)将步骤(2)所得的氯仿浓缩物用硅胶拌样，依次以体积比为200:1，100:1，50:1，20:1，10:1，3:1，0:1的石油醚-乙酸乙酯溶液洗脱，每个梯度洗脱1～10(优选5-10)个柱体积，TLC检测合并相同组分后得到Fr1～20共20个组分；(4)将步骤(3)中得到的第13个组分Fr13，经凝胶SephadexLH-20柱色谱分离，以甲醇做洗脱剂，洗脱1-3个柱体积(优选1个柱体积)，待样品完全洗脱后采用TLC监测，合并相同组分依次得到Fr13-1～13-13共13个组分；(5)将步骤(4)中得到的第6个组分Fr13-6硅胶拌样后，依次以体积比为100:1，50:1，30:1，15:1，8:1，4:1，2:1，1:1的石油醚-丙酮溶液梯度洗脱，每个浓度洗脱1～10个柱体积(优选5-10个柱体积)，洗脱同时伴以TLC检测以调整洗脱液极性，合并相同组分依次得到Fr13-6-1～13-6-20共20个组分；(6)将步骤(5)中得到的第11个组分Fr13-6-11，采用体积百分含量为85％的乙腈-酸水混合溶剂为流动相，所述酸水为体积百分含量为5‰乙酸水溶液，经HPLC色谱半制备得到化合物Ⅰ，色谱条件：C18反相色谱柱，流速为2ml/min，检测波长λ＝210nm，优选ZorbaxSB-C18(Agilent，4.6mm×250ml)，化合物Ⅰ保留时间t＝15min；(7)将步骤(5)中得到的第13个组分Fr13-6-13采用体积百分含量为88％的甲醇-水混合溶剂为流动相，经HPLC色谱半制备得到化合物Ⅲ，色谱条件：C18反相色谱柱，流速为2ml/min，检测波长λ＝210nm，优选ZorbaxSB-C18(Agilent，4.6mm×250ml)，化合物Ⅲ保留时间t＝18min；(8)将步骤(3)中得到的第11个组分Fr11，经凝胶SephadexLH-20柱色谱以丙酮做洗脱剂进行洗脱，洗脱1-3个柱体积(优选1个柱体积)，待样品完全洗脱后采用TLC监测，合并相同组分分别得到Fr11-1～11-7共7个组分；(9)将步骤(8)中得到的第3个组分Fr11-3，以体积百分含量为80％乙腈-酸水混合溶剂为流动相，酸水为体积百分含量为5‰乙酸-水溶液，进行HPLC色谱制备，色谱条件为C18反相色谱柱(优选色谱柱为WatersSunFireC18反相色谱柱)，流速为10ml/min，检测波长λ＝210nm，从进样后8min起依次收集各主峰得到Fr11-3-1～11-3-4共4个组分；(10)将步骤(9)中得到的第4个组分Fr11-3-4，以体积百分含量为85％乙腈-酸水混合溶剂为流动相，所述酸水为体积百分含量为5‰乙酸-水溶液，经HPLC半制备得到化合物Ⅱ，色谱条件为：C18反相色谱柱，流速为2ml/min，检测波长λ＝210nm，优选色谱柱为ZorbaxSB-C18(Agilent，4.6mm×250ml)，化合物Ⅱ保留时间t＝16min。一个具体的制备方法如下：(1)取铁力木干燥茎叶5.0kg，粉碎，用95％的乙醇室温浸提3次，每次48小时，合并提取液，减压蒸馏除去溶剂，回收得乙醇浸膏500.0g；(2)将步骤(1)中浓缩浸膏用硅胶拌样，依次用石油醚，氯仿洗脱，每种溶剂洗脱2～3个柱体积，收集氯仿部分，浓缩得浸膏；(3)将步骤(2)得到的氯仿部分浸膏(61.0g)用硅胶拌样，依次以石油醚：乙酸乙酯(体积比200:1，100:1，50:1，20:1，10:1，3:1，0:1)洗脱，每个浓度洗脱5～10个柱体积，TLC检测合并相同组分后依次得到Fr1～20共20个组分；(4)将步骤(3)中得到的第13个组分Fr13，经凝胶SephadexLH-20柱色谱分离，以甲醇做洗脱剂，洗脱1个柱体积，待样品完全洗脱后采用TLC监测，合并相同组分依次得到Fr13-1～13-13各组分；(5)将步骤(4)中得到的第6个组分Fr13-6，经硅胶拌样后，以体积比为100:1，50:1，30:1，15:1，8:1，4:1，2:1，1:1的石油醚-丙酮溶液梯度洗脱，每个浓度洗脱5～10个柱体积，洗脱同时伴以TLC检测以调整洗脱液极性，合并相同组分依次得到Fr13-6-1～13-6-20各组分；(6)将步骤(5)中得到的第11个组分Fr13-6-11，采用体积百分含量为85％的乙腈-酸水(酸水为体积百分含量为5‰乙酸-水溶剂)混合溶剂，经HPLC色谱半制备得到化合物Ⅰ，色谱柱为ZorbaxSB-C18(Agilent，4.6mm×250ml)，流速v＝2ml/min，检测波长λ＝210nm，保留时间t＝15min；(7)步骤(5)中得到的第13个组分Fr13-6-13采用体积百分含量为88％的甲醇-水混合溶剂，经HPLC色谱半制备得到化合物Ⅲ，色谱柱为ZorbaxSB-C18(Agilent，4.6mm×250ml)，流速v＝2ml/min，检测波长λ＝210nm，保留时间t＝18min；(8)步骤(3)中得到的第11个组分Fr11，经凝胶SephadexLH-20柱色谱以丙酮做洗脱剂洗脱1个柱体积，待样品完全洗脱后采用TLC监测，合并相同组分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一类新的4-苯基取代香豆素类化合物，其特征在于具有如下结构：/n

【技术特征摘要】
1.一类新的4-苯基取代香豆素类化合物，其特征在于具有如下结构：





2.如权利要求1所述的4-苯基取代香豆素类化合物的制备方法，其特征在于以铁力木茎叶为原料，依次经硅胶柱色谱、反相ODS柱色谱、凝胶柱色谱、HPLC半制备色谱法分离获得。


3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)取铁力木干燥茎叶，粉碎，使用水和/或醇浸提，浓缩；
(2)将步骤(1)所得的浓缩物用硅胶拌样，依次用石油醚，氯仿各洗脱2～3个柱体积，收集氯仿洗脱液，浓缩；
(3)将步骤(2)所得的氯仿浓缩物用硅胶拌样，依次以体积比为200:1，100:1，50:1，20:1，10:1，3:1，0:1的石油醚-乙酸乙酯溶液洗脱，每个浓度洗脱1～10个柱体积，同时进行TLC检测合并相同组分后依次得到Fr1～20共20个组分；
(4)将步骤(3)中得到的第13个组分Fr13，经凝胶SephadexLH-20柱色谱分离，以甲醇做洗脱剂，洗脱1-3个柱体积，待样品完全洗脱后采用TLC监测，合并相同组分依次得到Fr13-1～13-13共13个组分；
(5)将步骤(4)中得到的第6个组分Fr13-6硅胶拌样后，依次以体积比为100:1，50:1，30:1，15:1，8:1，4:1，2:1，1:1的石油醚-丙酮溶液梯度洗脱，每个浓度洗脱1～10个柱体积，洗脱同时伴以TLC检测以调整洗脱液极性，合并相同组分依次得到Fr13-6-1～13-6-20共20个组分；
(6)将步骤(5)中得到的第11个组分Fr13-6-11，采用85％的乙腈-酸水混合溶剂为流动相，所述酸水为5‰乙酸水溶液，经HPLC色谱半制备得到化合物Ⅰ，色谱条件：C18反相色谱柱，流速为2ml/min，检测波长λ＝210nm；
(7)将步骤(5)中得到的第13个组分Fr13-6-13采用88％的甲醇-水混合溶剂为流动相，经HPLC色谱半制备得到化合物Ⅲ，色谱条件：C18反相色谱柱，流速为2ml/min，检测波长λ＝210nm；
(8)将步骤(3)中得到的第11个组分Fr...

【专利技术属性】
技术研发人员：李鲜，周峰旭，曹婷婷，陈维金，李珊珊，申秀萍，罗永谋，
申请(专利权)人：昆明医科大学，
类型：发明
国别省市：云南;53