一种多种禽抗体联合快速检测方法技术

本发明专利技术属于抗体检测技术领域，提供一种多种禽抗体联合快速检测方法，其包括：步骤1：向原始反应板第1‑10列所有孔内加入稀释液0.1‑0.2mL；步骤2：向所述步骤1的第1列各孔内加入0.1‑0.2mL的血清液；步骤3：从所述步骤2的第1列各孔内吸取0.1‑0.2mL至第2列孔内；步骤4：将所述步骤3的血清液按照每孔0.02‑0.04mL分别移入ND、H9、H5、H7反应板的对应反应孔；步骤5：向所述步骤4的各反应板的第11列各孔分别加入0.02‑0.04mL稀释液；步骤6：向步骤5中各反应板的第1‑11列各孔中对应加入ND、H9、H5、H7病毒抗原液0.02‑0.04mL；步骤7：向步骤6的各反应板的各孔内加入0.02‑0.04mL鸡红细胞悬液，并判定ND、H9、H5、H7抗体滴度；同时本发明专利技术具有可以单人同时检测多种抗体的特点。

A rapid detection method of multiple avian antibodies

【技术实现步骤摘要】
一种多种禽抗体联合快速检测方法
本专利技术属于抗体检测
，尤其涉及一种多种禽抗体联合快速检测方法。
技术介绍
某些病毒表面含有血凝素，能与鸡红细胞表面的粘蛋白受体结合，使红细胞发生凝集，称凝集现象(HA)。这种凝集现象可以被特异性免疫血清所抑制，称血凝抑制现象(HI)，通过HA-HI试验，可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体的含量。该试验适用于血清中新城疫、禽流感及减蛋综合征抗体效价的检测。但是，现有HA/HI方法只能检测一种禽病抗体，通常情况下，家禽养殖场需要同时检测新城疫、禽流感、减蛋综合征等多种抗体，且运用传统HA/HI方法需要多次重复试验，效率低下，多次稀释会造成人为检测误差。因此，针对以上不足，本专利技术急需提供一种多种禽抗体联合快速检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种多种禽抗体联合快速检测方法，以至少解决现有技术中存在的检测技术人员重复加样工作繁重、精确度差的问题。本专利技术提供一种多种禽抗体联合快速检测方法，其技术方案如下：一种多种禽抗体联合快速检测方法，其包括，步骤1：向原始反应板第1-10列所有孔内加入稀释液0.1-0.2mL；步骤2：向所述步骤1的第1列各孔内加入0.1-0.2mL的血清液；步骤3：从所述步骤2的第1列各孔内吸取0.1-0.2mL至第2列各孔内；步骤4：将所述步骤3的血清液按照每孔0.02-0.04mL分别移入ND、H9、H5、H7反应板的对应的孔；步骤5：向所述步骤4的各反应板的第11列各孔分别加入0.02-0.04mL稀释液；步骤6：向步骤5中各反应板的第1-11列各孔中对应加入ND、H9、H5、H7病毒抗原液0.02-0.04mL；步骤7：向步骤6的各反应板的各孔内加入0.02-0.04mL鸡红细胞悬液，并判定ND、H9、H5、H7抗体滴度。如上述的多种禽抗体联合快速检测方法，进一步优选为：所述步骤3，依次倍比稀释至第10列各孔，从第10列各孔吸取0.1-0.2mL弃去。如上述的多种禽抗体联合快速检测方法，进一步优选为：所述步骤7中的鸡红细胞悬液的体积分数为1％。如上述的多种禽抗体联合快速检测方法，进一步优选为：所述步骤6向所述步骤5中各反应板的第1-11列各孔中对应加入4单位的ND、H9、H5、H7病毒抗原液0.02-0.04mL。如上述的多种禽抗体联合快速检测方法，进一步优选为：所述步骤1使用8道微量移液器进行移液。如上述的多种禽抗体联合快速检测方法，进一步优选为：所述步骤2使用单道微量移液器进行移液。如上述的多种禽抗体联合快速检测方法，进一步优选为：所述步骤7使用12道微量移液器进行移液。如上述的多种禽抗体联合快速检测方法，进一步优选为：所述步骤5向所述步骤4中各个反应板的第12列各孔内加入0.04-0.08mL稀释液。如上述的多种禽抗体联合快速检测方法，进一步优选为：所述稀释液为生理盐水或PBS中的任意一种。如上述的多种禽抗体联合快速检测方法，进一步优选为：所述原始、ND、H9、H5、H7反应板均为96孔反应板。分析可知，与现有技术相比，本专利技术的优点和有益效果在于：本专利技术提供一种多种禽抗体联合快速检测方法，可以实现单人同时操作检测4-6种禽流感及新城疫抗体，工作效率提升200％，判定结果稳定性好，精确度高、操作简单、成本低。附图说明图1为本专利技术一种多种禽抗体联合快速检测方法的原理示意图；图中：1-原始反应板；2-ND反应板；3-H9反应板；4-H5反应板；5-H7反应板。具体实施方式下面将结合附图和具体实施方式对本专利技术做进一步详细说明。本专利技术提供一种多种禽抗体联合快速检测方法，选取8份样品并以新城疫ND、禽流感H9、H5、H7为例。实施例1步骤1：用8道微量移液器向96孔原始反应板1第1～10列孔中加入生理盐水0.125mL。步骤2：用单道微量移液器分别吸取待测血清液0.125mL至原始反应板1第1列各孔，反复吹打5次混匀。步骤3：用8道微量移液器从原始反应板1第1列各孔吸取0.125mL反复吹打5次混匀后至第2列孔内，依次倍比稀释至第10列孔，从第10列孔吸取0.125mL弃去。步骤4：如图1所示，将步骤3稀释好的待测血清液按照每孔0.025mL分别移入96孔的ND反应板2、H9反应板3、H5反应板4、H7反应板5的对应孔中。步骤5：向步骤4各反应板的第11列孔加入0.025mL生理盐水，向步骤4各反应板的第12列孔中加入0.05mL生理盐水。步骤6：向步骤5的各反应板的第1-11列孔中对应加入4单位ND、H9、H5、H7病毒抗原液0.025mL，震荡1分钟，室温静置30分钟。步骤7：用12道微量移液器向各孔加入0.025mL体积分数为1％鸡红细胞悬液(将红细胞悬液充分摇匀后加入)，震荡1分钟，室温静置30分钟，判定ND、H9、H5、H7抗体滴度，判定结果见表1，稀释度对应抗体滴度见表2。表1抗体滴度结果(单位：log2)表2稀释度对应抗体滴度表(log2)实施例2步骤1：用8道微量移液器向96孔原始反应板1第1～10列孔中加PBS0.125mL。步骤2：用单道微量移液器分别吸取待测血清液0.125mL至原始反应板1第1列各孔，反复吹打5次混匀。步骤3：用8道微量移液器从原始反应板1第1列各孔吸取0.125mL反复吹打5次混匀后至第2列孔内，依次倍比稀释至第10列孔，从第10列孔吸取0.125mL弃去。步骤4：如图1所示，将步骤3稀释好的待测血清液按照每孔0.025mL分别移入96孔的ND反应板2、H9反应板3、H5反应板4、H7反应板5的对应孔中。步骤5：向步骤4各反应板的第11列孔加入0.025mLPBS，向步骤4各反应板的第12列孔中加入0.05mLPBS。步骤6：向步骤5的各反应板的第1-11列孔中对应加入4单位ND、H9、H5、H7病毒抗原液0.025mL，震荡1分钟，室温静置30分钟。步骤7：用12道微量移液器向各孔加入0.025mL体积分数为1％鸡红细胞悬液(将红细胞悬液充分摇匀后加入)，震荡1分钟，室温静置30分钟，判定ND、H9、H5、H7抗体滴度。实施例3步骤1：用8道微量移液器向96孔原始反应板1第1～10列孔中加生理盐水0.1mL。步骤2：用单道微量移液器分别吸取待测血清液0.1mL至原始反应板1第1列各孔，反复吹打5次混匀。步骤3：用8道微量移液器从原始反应板1第1列各孔吸取0.1mL反复吹打5次混匀后至第2列孔内，依次倍比稀释至第10列孔，从第10列孔吸取0.1mL弃去。步骤4：如图1所示，将步骤3稀释好的待测血清液按照每孔0.02mL分别移入96孔的ND反应板2、H9反应板3、H5反应板4、H7反应板5的对应孔中。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多种禽抗体联合快速检测方法，其特征在于,包括:/n步骤1：向原始反应板第1-10列所有孔内加入稀释液0.1-0.2mL；/n步骤2：向所述步骤1的第1列各孔内加入0.1-0.2mL的血清液；/n步骤3：从所述步骤2的第1列各孔内吸取0.1-0.2mL至第2列孔内；/n步骤4：将所述步骤3的血清液按照每孔0.02-0.04mL分别移入ND、H9、H5、H7反应板的对应的孔；/n步骤5：向所述步骤4的各反应板的第11列各孔分别加入0.02-0.04mL稀释液；/n步骤6：向步骤5中各反应板的第1-11列各孔中对应加入ND、H9、H5、H7病毒抗原液0.02-0.04mL；/n步骤7：向步骤6的各反应板的各孔内加入0.02-0.04mL鸡红细胞悬液，并判定ND、H9、H5、H7抗体滴度。/n

【技术特征摘要】
1.一种多种禽抗体联合快速检测方法，其特征在于,包括:
步骤1：向原始反应板第1-10列所有孔内加入稀释液0.1-0.2mL；
步骤2：向所述步骤1的第1列各孔内加入0.1-0.2mL的血清液；
步骤3：从所述步骤2的第1列各孔内吸取0.1-0.2mL至第2列孔内；
步骤4：将所述步骤3的血清液按照每孔0.02-0.04mL分别移入ND、H9、H5、H7反应板的对应的孔；
步骤5：向所述步骤4的各反应板的第11列各孔分别加入0.02-0.04mL稀释液；
步骤6：向步骤5中各反应板的第1-11列各孔中对应加入ND、H9、H5、H7病毒抗原液0.02-0.04mL；
步骤7：向步骤6的各反应板的各孔内加入0.02-0.04mL鸡红细胞悬液，并判定ND、H9、H5、H7抗体滴度。


2.根据权利要求1所述的多种禽抗体联合快速检测方法，其特征在于：所述步骤3，依次倍比稀释至第10列各孔，从第10各列孔吸取0.1-0.2mL弃去。


3.根据权利要求1所述的多种禽抗体联合快速检测方法，其特征在于：所述步骤7中的鸡红细胞悬液的体积分数为1％。
<...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘利军，王建华，王静丽，郝瑞军，
申请(专利权)人：内蒙古正大食品有限公司，
类型：发明
国别省市：内蒙;15