优化的核酸抗体构建体制造技术

本文公开了包括结构修饰的DNA编码抗体(DMAb)的组合物、结构修饰DMAb的方法，以及结构修饰的DMAb的使用方法。

Optimized construction of nucleic acid antibody

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】优化的核酸抗体构建体相关申请的交叉引用本申请要求于2017年5月10日提交的美国临时专利申请第62/504,448号，于2017年5月10日提交的美国临时专利申请第62/504,460号，于2018年1月31日提交的美国临时专利申请第62/624,320号，和于2018年1月31日提交的美国临时专利申请第62/624,367号的优先权，以上各临时专利申请通过引用以其整体并入于此。
本专利技术涉及优化核酸抗体构建体的方法以及经优化的结构修饰的核酸抗体构建体。本专利技术所述的组合物提供了诱导免疫应答以及预防性和/或治疗性免疫接种个体抵御抗原的改良方法。
技术介绍
免疫球蛋白分子包括两种轻链(L)和两种重链(H)，它们通过半胱氨酸残基之间的二硫键(以S-S示出)共价连接。重链的可变结构域(VH)和轻链的可变结构域(VL)促成抗体分子的结合位点。重链的恒定区由三个恒定结构域(CH1、CH2和CH3)和一个(柔性)铰链区构成。轻链也具有恒定结构域(CL)。重链和轻链的可变区包括4个框架区(FRs；FR1、FR2、FR3和FR4)和3个互补本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生成编码结构修饰的DNA编码抗体(DMAb)的核酸序列的方法，所述方法包括以下步骤：/na)鉴定第一DMAb的一个或多个CDR区；/nb)鉴定第二DMAb的一个或多个CDR区；/nc)用第一DMAb的一个或多个CDR区的氨基酸序列替代第二DMAb的一个或多个CDR区的氨基酸序列，以生成结构修饰的DMAb的氨基酸序列；和/nd)生成编码结构修饰的DMAb的核酸序列。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170510 US 62/504,460;20170510 US 62/504,448;20181.一种生成编码结构修饰的DNA编码抗体(DMAb)的核酸序列的方法，所述方法包括以下步骤：
a)鉴定第一DMAb的一个或多个CDR区；
b)鉴定第二DMAb的一个或多个CDR区；
c)用第一DMAb的一个或多个CDR区的氨基酸序列替代第二DMAb的一个或多个CDR区的氨基酸序列，以生成结构修饰的DMAb的氨基酸序列；和
d)生成编码结构修饰的DMAb的核酸序列。


2.根据权利要求1所述的方法，进一步包括：优化所述核酸序列。


3.一种生成编码结构修饰的DMAb的核酸序列的方法，所述方法包括以下步骤：
a)将第一DMAb的氨基酸序列或氨基酸序列的片段与一个或多个其他DMAb序列的氨基酸序列或氨基酸序列的片段进行序列比对；
b)用一个或多个其他DMAb序列的氨基酸序列的一个或多个氨基酸残基替代所述第一DMAb的氨基酸序列的一个或多个氨基酸残基，以生成结构修饰的DMAb的氨基酸序列，其中，所述一个或多个氨基酸残基不是CDR区的残基；和
d)生成编码结构修饰的DMAb的核酸序列。


4.根据权利要求3所述的方法，进一步包括：优化所述核酸序列。


5.一种生成编码结构修饰的DMAb的核酸序列的方法，所述方法包括以下步骤：
a)鉴定DMAb的氨基酸残基，所述氨基酸残基预测参与可变重链结构域和可变轻链结构域的界面处的相互作用；
b)对鉴定的所述氨基酸残基进行一个或多个氨基酸取代，其中一个或多个取代预测改变所述界面处的等电点和表面电荷的至少之一，从而生成结构修饰的DMAb的氨基酸序列；和
d)生成编码结构修饰的DMAb的核酸序列。


6.根据权利要求5所述的方法，进一步包括：优化所述核酸序列。


7.一种生成编码结构修饰的DMAb的核酸序列的方法，所述方法包括以下步骤：
a)从DMAb的氨基酸序列中删除CH和CL结构域的氨基酸序列；
b)将VH结构域和VL结构域的氨基酸序列之间的接头的氨基酸序列添加到DMAb的氨基酸序列中以生成结构修饰的DMAb的氨基酸序列；
c)对生成的氨基酸序列进行至少一轮建模；和
d)生成编码结构修饰的DMAb的核苷酸序列。


8.根据权利要求7所述的方法，进一步包括：优化所述核酸序列。


9.根据权利要求7所述的方法，其中所述建模的方法包括接头建模、铰链修饰建模、框架建模和CDR环优化中的至少一种。


10.根据权利要求7所述的方法，其中所述接头与所述VH结构域进行C末端连接，与所述VL结构域进行N末端连接。


11.根据权利要求7所述的方法，其中所述接头与所述VH结构域进行N末端连接，与所述VL结构域进行C末端连接。


12.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，进一步包括以下步骤：
a)从DMAb的氨基酸序列中删除CH和CL结构域的氨基酸序列；
b)将VH结构域和VL结构域的氨基酸序列之间的接头的氨基酸序列添加到DMAb的氨基酸序列中以生成结构修饰的DMAb的氨基酸序列；和
c)对生成的氨基酸序列进行至少一轮建模。


13.一种权利要求1至12中任一项所述的方法的核酸分子所编码的结构修饰的DMAb。


14.一种结构修饰的DMAb，其包括来自第一DMAb的一个或多个CDR区和来自第二DMAb的一个或多个恒定区，其中，与相应的未经如此修饰的DMAb相比，所述结构修饰的DMAb表现出较高的体内表达和较高的结合中的至少一种。


15.根据权利要求14所述的结构修饰的DMAb，其中与如此修饰之前的结...

【专利技术属性】
技术研发人员：大卫·韦纳，吉亚贝·古伊宾加，尼尔·库奇，查尔斯·里德，
申请(专利权)人：威斯塔解剖学和生物学研究所，艾诺奥医药品有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US