一种大肠菌群快速检测试纸片制造技术

本发明专利技术提供一种大肠菌群快速检测试纸片，该试纸片内含有培养基，所述的培养基由检测培养基液、TTC溶液和ONPG溶液混合配制而成。本发明专利技术的检测试纸对待检测样品中的大肠菌群进行培养检测，其检测时间短，且可根据颜色改变和产生红色沉淀的标准来判断阳性菌落数，其使用操作方便、快速，检测结果准确可靠。

A test paper for rapid detection of coliform

【技术实现步骤摘要】
一种大肠菌群快速检测试纸片
本专利技术属于大肠菌群的检测
，尤其是涉及一种大肠菌群快速检测试纸片。
技术介绍
大肠菌群是指在37℃下能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，主要来源于人畜粪便。大肠菌群在样品中的含量是检验食品卫生安全的重要指标。目前常用的检测方法有传统发酵法、纸片快速法、滤膜法、酶底物法、聚合酶链式法、荧光原位杂交法，但这些已知检测方法检测时间仍需24h-72h不等，对于工业废水、食品等生产检测而言，大肠菌群检测周期较长，导致大量样品滞留无法及时处理。目前，现有技术中大肠菌群检测技术例如滤膜法、酶底物法，分子生物需检测法存在成本较高、操作较为繁琐的缺陷；另外，目前纸片法也是大部分领域检测较为常用的方法，但现有的纸片培养基存在需要低温保存的缺点，且现有的用于检测大肠菌群的试纸片其检测时间多数在18h左右出结果，对于野外紧急作业来说时间较长，不适宜应急使用；申请号201410131441.5的一种分光光度法快速检测大肠菌群的方法及应用的专利文件中公开了一种培养液加样培养60min-400min即可检测样品中的大肠菌群数值，但是该培养液需要配合分光光度计进行使用，且操作条件较高，不适合野外作业。
技术实现思路
本专利技术提供一种大肠菌群快速检测试纸片，使该检测试纸片对待检测样品中的大肠菌群进行培养检测，检测时间仅需10-14小时即可得到准确检测结果，且该检测试纸片室温避光保存即可，无需低温保存，适合基层实验室与野外试验使用，同时其检测结果准确可靠。>为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种大肠菌群快速检测试纸片，该试纸片内含有培养基，所述的培养基由检测培养基液、TTC溶液和ONPG溶液混合配制而成。进一步地，所述的检测培养基液、TTC溶液和ONPG溶液的体积比为100：0.5-2：0.5-2，优选100:1:1。进一步地，所述的ONPG溶液为质量浓度为0.1％的ONPG溶液。进一步地，所述的ONPG溶液的配置如下：称取ONPG0.1mg溶解于100mL灭菌蒸馏水中，经0.45μm水系微孔滤膜过滤除菌制得0.1％的ONPG溶液，避光保存。进一步地，所述的大肠菌群快速检测试纸片的制备方法，包括载体纸片制备、内包装袋、培养基配制、试纸片制作和试纸片包装，其特征在于：所述的培养基配制包括如下步骤：(a)分别配制检测培养基液、TTC溶液和ONPG溶液；(b)将配制的检测培养基液、TTC溶液和ONPG溶液混合均匀，避光保存，即得到所述的培养基。进一步地，步骤(b)中，所述的检测培养基液、TTC溶液和ONPG溶液的体积比为100：0.5-2：0.5-2，优选100:1:1。进一步地，步骤(a)中，所述的ONPG溶液的配置如下：称取ONPG0.1mg溶解于100mL灭菌蒸馏水中，经0.45μm水系微孔滤膜过滤除菌制得0.1％的ONPG溶液，避光保存。进一步地，步骤(a)中，所述的检测培养基液配置如下：将50-90μL2％溴甲酚紫溶液、4g胰蛋白胨、0.5g乳糖、0.5gD-甘露醇、0.75gNaCl、0.02g十二醇硫酸钠、0.01g脱氧胆酸钠、0.5g琼脂加入到100mL蒸馏水中，pH6.9-7.1，115℃，15min灭菌后待用；所述的TTC溶液的配置如下：称取2mgTTC加入到100mL灭菌蒸馏水中溶解，经0.45μm水系微孔滤膜过滤除菌制得2％溶液，避光保存备用。大肠菌群快速检测试纸片检测大肠菌群的方法，所述的方法为将无菌操作取样品匀液，滴加到检测试纸片上，37℃培养10-14h，纸片上有红色斑点并伴有黄晕的菌落记为阳性菌，阳性菌个数即为每毫升样品匀液中所含大肠菌群数。进一步地，所述的样品匀液的制备具体操作为：固体和半固体样品：称取25g样品放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌三角瓶中，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，制成质量：体积为1g:10L的样品匀液；调节其pH在6.9-7.1之间；液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶中，充分混匀制成体积比为1:10的样品匀液；调节其pH在6.9-7.1之间；用1mL无菌吸管或微量移液器吸取样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入9mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中，振摇试管使其混合均匀，制成1:100的样品稀释匀液。进一步地，所述的方法在进行检测时，首选无菌操作取样品稀释匀液1mL，滴加到检测试纸片上，37℃培养10-14h；之后观察纸片上的红色斑点并伴有黄晕的菌落个数即为每毫升样品稀释匀液中所含大肠菌群数；当使用样品稀释匀液检出限较低时，即低于10cfu/mL时，可直接取样品匀液1mL滴加到检测试纸片上，37℃培养10-14h；观察纸片上的红色斑点并伴有黄晕的菌落个数即为每毫升样品匀液中所含大肠菌群数，以保证检测精度。一种大肠菌群快速检测试纸片在水质监测、生物、食品、卫生方面的大肠菌群的快速检测方面中的应用。在本专利技术的技术方案中，培养基成分中不仅含有促进大肠菌群生长的蛋白胨、乳糖及氯化钠这些基本成分，还添加了可以增加细胞膜通透性的脱氧胆酸钠及细菌培养剂甘露醇，可以提高细胞的渗透压，同时还可促进乳糖代谢；调节pH到适宜大肠菌群培养生产的pH；多组分共同作用，使得大肠菌群的发酵生长速度加快，进而缩短了检测时间。本专利技术中的检测试纸片在进行检测使用时，以溴甲酚紫和TTC作为指示剂，其大肠菌群将乳糖进行发酵可以产酸进而使得溴甲酚紫指示剂变黄；同时，由于甲酸脱氢酶的作用，使得甲酸分解产生CO2和H2，这个过程中脱掉的氢和TTC(2，3，5－三苯基氯化四氮唑)反应产生TTF(三苯甲臜)，因此检测试纸片上会有红色沉淀的菌落生成并伴有黄晕。同时，培养基中的ONPG(邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷)可被β-半乳糖苷酶水解为半乳糖和黄色的邻-硝基苯酚(ONP)。大肠菌群为发酵乳糖的菌群，均含有β-半乳糖苷酶，ONPG可迅速进入到大肠菌群细胞内，在细胞内被β-半乳糖苷酶水解，释放出邻-硝基苯酚，进而呈现黄色，辅助溴甲酚紫和TTC指示剂显色，使得反应和显色更为迅速，进而缩短检测所需要的时间。若成品试纸片不加TTC溶液，大肠菌群培养相应的时间之后只产生黄色菌落；若加入TTC溶液，则会特征，即其红色菌落周边会有黄晕产生，以便于计算与观察。本专利技术具有的优点和积极效果是：1、本专利技术的大肠菌群快速检测试纸片，其添加了可以增加细胞膜通透性的脱氧胆酸钠及细菌培养剂甘露醇，提高细胞的渗透压，同时还可促进乳糖代谢；使得大肠菌群的发酵生长速度加快，增加ONPG可迅速进入到大肠菌群细胞内，在细胞内被β-半乳糖苷酶水解，释放出邻-硝基苯酚，进而呈现黄色，辅助溴甲酚紫和TTC指示剂显色，使得反应和显色更为迅速，从而而缩短检测所需要的时间，培养10-14小时即可得到准确检测结果；2、本专利技术的大肠菌群快速检测试纸片经实验验证，常温避光保存即可本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种大肠菌群快速检测试纸片，该试纸片内含有培养基，其特征在于：所述的培养基由检测培养基液、TTC溶液和ONPG溶液混合配制而成。/n

【技术特征摘要】
1.一种大肠菌群快速检测试纸片，该试纸片内含有培养基，其特征在于：所述的培养基由检测培养基液、TTC溶液和ONPG溶液混合配制而成。


2.根据权利要求1所述的大肠菌群快速检测试纸片，其特征在于：所述的检测培养基液、TTC溶液和ONPG溶液的体积比为100：0.5-2：0.5-2，优选100:1:1。


3.根据权利要求2所述的大肠菌群快速检测试纸片，其特征在于：所述的ONPG溶液为质量浓度为0.1％的ONPG溶液。


4.根据权利要求3所述的大肠菌群快速检测试纸片，其特征在于：所述的ONPG溶液的配置如下：称取ONPG0.1mg溶解于100mL灭菌蒸馏水中，经0.45μm水系微孔滤膜过滤除菌制得0.1％的ONPG溶液，避光保存。


5.一种权利要求1-4任意一项所述的大肠菌群快速检测试纸片的制备方法，包括载体纸片制备、内包装袋、培养基配制、试纸片制作和试纸片包装，其特征在于：所述的培养基配制包括如下步骤：
(a)分别配制检测培养基液、TTC溶液和ONPG溶液；
(b)将配制的检测培养基液、TTC溶液和ONPG溶液混合均匀，避光保存，即得到所述的培养基。


6.根据权利要求5所述的大肠菌群快速检测试纸片的制备方法，其特征在于：步骤(b)中，所述的检测培养基液、TTC溶液和ONPG溶液的体积比为100：0.5-2：0.5...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄琳，刘逸寒，杨颖，许忠平，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：天津;12