一种罗非鱼无乳链球菌疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种罗非鱼无乳链球菌疫苗及其制备方法，通过生物信息学原理分析和筛选了无乳链球菌的一个表面锚定蛋白的部分多肽序列作为疫苗制备的抗原，并且利用借助化学合成技术构建碳纳米管载表面蛋白系统，将候选出的多肽抗原与功能化单壁碳纳米结合制备罗非鱼无乳链球菌亚单位疫苗。本发明专利技术筛选的多肽抗原可比灭活疫苗更为显著地提高被接种的罗非鱼的抗体水平，并可抵抗高毒力的无乳链球菌攻击。并且，本发明专利技术筛选的多肽抗原能够紧密、均匀地连接于功能化修饰的碳纳米管表面，与单独的多肽抗原组对比，能够显著提高罗非鱼的免疫力。

A tilapia Lactococcus free vaccine and its preparation

【技术实现步骤摘要】
一种罗非鱼无乳链球菌疫苗及其制备方法
本专利技术涉及水产疫苗领域，尤其涉及种罗非鱼无乳链球菌疫苗及其制备方法。
技术介绍
无乳链球菌(Streptococcusagalactiae,S.agalactiae)是一种革兰氏阳性球菌，最初常因引起奶牛乳腺炎，造成奶产量下降而引起关注川。随后在许多国家的孕产妇和新生儿中分离到无乳链球菌，常引发新生儿肺炎、脑膜炎和败血症等，严重的导致死亡。随着世界水产养殖业的发展，在水生动物体内也频繁分离到无乳链球菌，尤其是自2007年以来，该菌每年都在我国广东、海南、福建、广西等罗非鱼主要养殖区暴发流行，发病率高达10％-30％，死亡率高达25％-80％,严重威胁着我国罗非鱼产业链的健康发展。鱼类可能通过养殖环境或鱼体间的直接接触而感染链球菌。链球菌能引起鱼的脑神经受破坏，进而通过血液循环引发肾、肝、脾等器官出血坏死。进入体内的链球菌被吞噬细胞吞噬后，进入免疫生发中心。链球菌的大量繁殖不仅损伤吞噬细胞，而且会摧毁免疫组织、破坏免疫系统，其破坏程度不亚于人类感染艾滋病病毒。当罗非鱼链球菌病暴发时，抗菌药本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种罗非鱼无乳链球菌疫苗制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)通过基因工程方法或人工合成方法获得氨基酸序列为SEQ ID NO：1的目的多肽；/n(2)将单壁纳米管在450～500℃下加热30～40min，然后放入由浓硫酸和浓硝酸按照体积比3:1构成的混合酸液中，加热酸化处理，将碳纳米管混酸混合物经微孔滤膜抽滤、纯水洗涤至pH不再变化后干燥至恒重，获得氧化单壁碳纳米管；/n(3)将所述氧化单壁碳纳米管加入纯净水中，在冰浴条件下超声30～40min，加入植物蛋白粉，冰浴条件下超声40～60min后，离心30～40min，取上层分散液并再冻干，低温保存，得到修饰后的氧化单壁碳纳米管；/...

【技术特征摘要】
1.一种罗非鱼无乳链球菌疫苗制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)通过基因工程方法或人工合成方法获得氨基酸序列为SEQIDNO：1的目的多肽；
(2)将单壁纳米管在450～500℃下加热30～40min，然后放入由浓硫酸和浓硝酸按照体积比3:1构成的混合酸液中，加热酸化处理，将碳纳米管混酸混合物经微孔滤膜抽滤、纯水洗涤至pH不再变化后干燥至恒重，获得氧化单壁碳纳米管；
(3)将所述氧化单壁碳纳米管加入纯净水中，在冰浴条件下超声30～40min，加入植物蛋白粉，冰浴条件下超声40～60min后，离心30～40min，取上层分散液并再冻干，低温保存，得到修饰后的氧化单壁碳纳米管；
(4)将所述目的多肽和步骤(3)所制备的修饰后的氧化单壁碳纳米管于PBS缓冲液中充分混匀，并超声处理，在35～40℃中搅拌；
(5)步骤(4)所得的搅拌混合物放入100kDa透析袋中透析，离心收集样品，即得到所述罗非鱼无乳链球菌疫苗。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中氧化单壁碳纳米管与植物蛋白粉的重量比为1：30。


3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述植物蛋白粉采用以下方法制备：
(1)将低温脱脂豆粕粉分散于去离子水中，调pH至7.8～8.0，低速搅拌后离心去除不溶物质；
(2)取上清液并调pH至4.2～4.5，静置后离心，收集沉淀物；
(3)将沉淀物复溶于去离子水...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁芳，叶剑敏，郭政，
申请(专利权)人：华南师范大学，
类型：发明
国别省市：广东;44