一种副猪嗜血杆菌病、猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌病三联灭活疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术属于兽用生物制品领域，具体涉及一种副猪嗜血杆菌、猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌病三联灭活疫苗及其制备方法。本发明专利技术提供的副猪嗜血杆菌、猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌病三联灭活疫苗包括抗原浓缩液和纳米铝佐剂，所述抗原浓缩液包括灭活的副猪嗜血杆菌血清4型H23株、副猪嗜血杆菌血清5型H24株、猪链球菌血清2型S23株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株以及猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株的抗原浓缩液。该三联灭活疫苗能有效预防猪链球菌病、副猪嗜血杆菌病、猪多杀性巴氏杆菌病，达到一针多防、减少应激的目的，并降低了防疫成本。

A triple inactivated vaccine of Haemophilus parasuis, Streptococcus suis and Pasteurellosis suis and its preparation

【技术实现步骤摘要】
一种副猪嗜血杆菌病、猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌病三联灭活疫苗及其制备方法
本专利技术属于兽用生物制品领域，具体涉及一种副猪嗜血杆菌病、猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌病三联灭活疫苗及其制备方法。
技术介绍
副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis，HPS)是猪上呼吸道的一种条件性致病菌，特定条件下侵入机体引起以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎及高死亡率为特征的一种全身性传染性疾病。目前，副猪嗜血杆菌病是我国流行的主要细菌病之一，该菌可影响2-25周龄的仔猪和育肥猪，主要在断奶后和保育阶段发病，多见于5～8周龄的猪，发病率在10％-90％，严重时死亡率高达50-90％，成年猪感染病死率在20％左右，母猪病死率可高达30％-40％，给我国养猪业带来了巨大的经济损失。根据KRG血清分型，至少可以将其分为15个血清型，其中以血清4型、5型为主。副猪嗜血杆菌各血清型之间缺乏免疫交叉保护，副猪嗜血杆菌灭活疫苗只对同一血清型的菌株有抵抗保护作用，一旦流行菌株血清型与疫苗血清型不符，该疫苗对猪群就无保护作用。猪链球菌(Streptococcussuis，SS)是引起猪链球菌病的病原菌，自然条件下，不同年龄、品种和性别的猪均对本病易感，可引起猪的败血症、脑膜炎、关节炎等临床症状。根据细菌荚膜多糖可将猪链球菌分为33个血清型，经流行病学分析，2、7、9型是引起猪感染的重要血清型，其中猪链球菌2型毒力最强，流行广。猪巴氏杆菌病是由多杀性巴氏杆菌(Pasteurellamultocida，Pm)引起的猪发生呼吸系统、局灶性感染及出血性败血症的传染性疾病，正常定植于健康动物的口腔、鼻咽和上呼吸道。根据细菌的荚膜多糖可将猪多杀性巴氏杆菌分为A、B、D、E、F型，猪巴氏杆菌病又叫猪肺疫，主要由A、B型感染引起，多杀性巴氏杆菌感染可引起急性或散发性传染病，该病原菌还可与多种病原协同感染，从而增加猪群呼吸道疾病的发病率和死亡率，造成严重的经济损失。市面对上猪链球菌病、副猪嗜血杆菌病、猪多杀性巴氏杆菌病的疫苗防控，大多为单苗、二联疫苗，针对猪链球菌病、副猪嗜血杆菌病、猪多杀性巴氏杆菌病共感染的灭活疫苗，国内还是空白，商品苗已不能满足临床的需求，而抗生素的滥用，造成耐药菌株的产生，使得针对共感染的多价疫苗更加受到欢迎。兽用大多数疫苗是采用甲醛进行灭活，甲醛灭活易受温度、pH和浓度的影响，而过量甲醛灭活不仅会损坏疫苗的抗原性，也会导致多量残留，对动物机体和人的食用安全性均有影响。铝佐剂是得到公认的疫苗佐剂之一，常规铝佐剂由于免疫应激大等缺点使其应用受到了限制，故研究开发一种制备方法简单、可有效预防猪链球菌病、副猪嗜血杆菌病、猪多杀性巴氏杆菌病，且副反应小、安全、高效的灭活疫苗势在必行。
技术实现思路
本专利技术主要目的之一是提供一种可以同时预防副猪嗜血杆菌、猪链球菌和猪多杀性巴氏杆菌共感染的安全高效的三联疫苗。为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种副猪嗜血杆菌病、猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌病三联灭活疫苗，其特征在于，所述三联灭活疫苗包括抗原浓缩液和纳米铝佐剂；所述抗原浓缩液包括灭活的副猪嗜血杆菌血清4型H23株、副猪嗜血杆菌血清5型H24株、猪链球菌血清2型S23株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株以及猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株的抗原浓缩液。优选的，所述副猪嗜血杆菌血清4型H23株、副猪嗜血杆菌血清5型H24株、猪链球菌血清2型S23株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株以及猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株的抗原浓缩液体积比为1:1:1:1:1。优选的，所述副猪嗜血杆菌血清4型H23株、副猪嗜血杆菌血清5型H24株、猪链球菌血清2型S23株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株以及猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株的抗原浓缩液含量均为5×107CFU/mL。优选的，所述纳米铝佐剂体积比为10％。优选的，所述三联灭活疫苗还包括1％(w/v)的硫柳汞和兽医学可接受的疫苗稀释剂。优选的，所述疫苗稀释剂为0.9％NaCl溶液或PBS溶液。本专利技术另外一个目的是提供副猪嗜血杆菌病、猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌病三联灭活疫苗制备方法，所述三联灭活疫苗制备方法包括以下步骤：S1、分别将副猪嗜血杆菌血清4型H23株、血清5型H24株，猪链球菌血清2型S23株，猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株菌增殖得到培养液；S2、分别取步骤S1中的培养液，加入培养液总体积0.1％-0.15％的灭活剂，经4℃灭活72小时，期间搅拌数次，再在37℃水浴2小时，得到灭活的副猪嗜血杆菌血清4型H23株、血清5型H24株，猪链球菌血清2型S23株，猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株菌的培养液；S3、将步骤S2中灭活的副猪嗜血杆菌血清4型H23株、血清5型H24株，猪链球菌血清2型S23株，猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株菌的培养液进行浓缩，再分别加入0.9％NaCl溶液或PBS溶液重悬菌体，得到副猪嗜血杆菌血清4型H23株、副猪嗜血杆菌血清5型H24株、猪链球菌血清2型S23株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株以及猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株菌的抗原浓缩液；S4、取步骤S3中副猪嗜血杆菌血清4型H23株、副猪嗜血杆菌血清5型H24株、猪链球菌血清2型S23株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株以及猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株菌的抗原浓缩液加入乳化机，同时按配方比例加入纳米铝佐剂、稀释剂、硫柳汞进行低速搅拌，混合得到副猪嗜血杆菌、猪链球菌和猪多杀性巴氏杆菌灭活疫苗。优选的，所述步骤S2中灭活剂为β-丙内酯。优选的，所述步骤S3中副猪嗜血杆菌血清4型H23株、副猪嗜血杆菌血清5型H24株、猪链球菌血清2型S23株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株以及猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株的细菌经浓缩后细菌含量为相当于灭活前活菌数为5×109FU/mL。优选的，在步骤S4后分别对副猪嗜血杆菌、猪链球菌和猪多杀性巴氏杆菌培养进行无菌检验、安全检验和效力检验。本专利技术通过实施例2-3显示，三联灭活疫苗用β-丙内酯灭活后，采用纳米铝为佐剂的疫苗注射入断奶仔猪，疫苗注射局部无不良反应，各脏器无异常病变，而采用甲醛灭活的断奶仔猪的注射部位出现2例红疹、皮下结节以及接触性过敏，表明β-丙内酯灭活的疫苗安全性好，且以纳米铝为佐剂的疫苗吸收较好，无不良反应。通过实施例4，分别对断奶仔猪肌肉注射常规铝佐剂疫苗1和纳米铝佐剂疫苗2各2mL，并进行二次免疫，二免后14天，用各个强毒株进行攻毒；攻毒后观察14天统计显示，常规铝佐剂疫苗和纳米铝佐剂疫苗均对副猪嗜血杆菌(4型、5型)、猪链球菌2型、猪多杀性巴氏杆菌(A型、B型)攻毒具有保护作用，前者保护率基本达80％以上，后者保护率基本达100％，再次表明副猪嗜血杆菌、猪链球菌和猪多杀性巴氏杆菌病三联灭活疫苗能本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种副猪嗜血杆菌病、猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌病三联灭活疫苗，其特征在于，所述三联灭活疫苗包括抗原浓缩液和纳米铝佐剂；/n所述抗原浓缩液包括灭活的副猪嗜血杆菌血清4型H23株、副猪嗜血杆菌血清5型H24株、猪链球菌血清2型S23株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株以及猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株的抗原浓缩液。/n

【技术特征摘要】
1.一种副猪嗜血杆菌病、猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌病三联灭活疫苗，其特征在于，所述三联灭活疫苗包括抗原浓缩液和纳米铝佐剂；
所述抗原浓缩液包括灭活的副猪嗜血杆菌血清4型H23株、副猪嗜血杆菌血清5型H24株、猪链球菌血清2型S23株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株以及猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株的抗原浓缩液。


2.根据权利要求1所述三联灭活疫苗，其特征在于，所述副猪嗜血杆菌血清4型H23株、副猪嗜血杆菌血清5型H24株、猪链球菌血清2型S23株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株以及猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株的抗原浓缩液体积比为1:1:1:1:1。


3.根据权利要求1所述三联灭活疫苗，其特征在于，所述副猪嗜血杆菌血清4型H23株、副猪嗜血杆菌血清5型H24株、猪链球菌血清2型S23株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株以及猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株的抗原浓缩液含量均为5×107CFU/mL。


4.根据权利要求1所述三联灭活疫苗，其特征在于，所述纳米铝佐剂体积比为10％。


5.根据权利要求1所述三联灭活疫苗，其特征在于，所述三联灭活疫苗还包括1％(w/v)的硫柳汞和兽医学可接受的疫苗稀释剂。


6.根据权利要求5，其特征在于所述疫苗稀释剂为0.9％NaCl溶液或PBS溶液。


7.应用权利要求1所述三联灭活疫苗的制备方法，其特征在于，所述三联灭活疫苗制备方法包括以下步骤：
S1、分别将副猪嗜血杆菌血清4型H23株、血清5型H24株，猪链球菌血清2型S23株，猪多杀性巴氏杆菌荚膜A型P13株、猪多杀性巴氏杆菌荚膜B型P11株的菌株增殖得分别得到培养液；
S2、分别取步骤S1中的培养液，加入培养液总体积0.1％...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭鑫，黄剑华，陈奕，梅敏敏，
申请(专利权)人：广东君睿生物技术研究有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44