本发明专利技术采用新鲜提取的人白细胞分泌炎症因子TNF‑α和IL‑6的细胞模型，在存在和不存在LPS的条件下研究了肠碱性磷酸酶对人白细胞分泌炎症因子的抑制作用，发现肠碱性磷酸酶可以在不存在LPS的条件下(不依赖内毒素)抑制人白细胞的TNF‑α和IL‑6分泌，且其作用机制是使相应底物脱磷酸产生腺苷等物质进而抑制TNF‑α和IL‑6分泌。基于上述研究本发明专利技术公开了一种肠碱性磷酸酶作为非内毒素依赖的人白细胞的TNF‑α和/或IL‑6分泌抑制剂的应用，以及肠碱性磷酸酶在制备治疗非内毒素依赖的人白细胞疾病部位TNF‑α和/或IL‑6分泌增多相关炎症性疾病药物中的应用以及一种产业化或商业化的肠碱性磷酸酶制剂的细胞活性检测方法，本发明专利技术大大拓宽了碱性磷酸酶的应用。
A new application of intestinal alkaline phosphatase and its cell activity detection method
【技术实现步骤摘要】
一种肠碱性磷酸酶的新应用及其制剂的细胞活性检测方法
本专利技术涉及碱性磷酸酶领域，特别是涉及一种肠碱性磷酸酶的新应用及其制剂的细胞活性检测方法。
技术介绍
碱性磷酸酶分多个亚型(TNAP、IAP、PLAP)，广泛分布于人体的不同组织，包括心、脑、胎盘血管的上皮细胞、肠道粘膜、肝脏细胞等(参考文献1、2、3、4、5)。然而，肠碱性磷酸酶的生理功能半世纪来尚不明确。最早普遍认为碱性磷酸酶的功能是参与骨钙化(参考文献6)。专利技术人在90年代早期采用基因转移技术使碱性磷酸酶基因进入不同细胞，发现碱性磷酸酶与病理性血管钙化有关(参考文献7、8)。如此广泛分布的碱性磷酸酶的主要生理功能是什么呢？荷兰科学家Poelstra和Meijer揭开了谜底(参考文献9)，肠碱性磷酸酶灭活内毒素的活性被首次报道。这个研究提示广泛分布的碱性磷酸酶能抑制体内和体表由内毒素引发的炎症。通过将肠碱性磷酸酶基因敲除，Bhan和Sonoko发现没有肠碱性磷酸酶的动物发生糖尿病(10)和高血脂(11)。荷兰的生物制药公司AM-Pharma的Peters和Lukas使用重组人肠碱性磷酸酶治疗内毒素相关的脓毒血症肾损伤和结肠炎(1213)。大量研究表明白细胞中的中性粒细胞是引发人类炎症性疾病的重要细胞(参考文献14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24)，中性粒细胞迁移到发炎组织中的行为就像一把双刃剑，虽然帮助去除入侵微生物，但是引发炎症性疾病，其作用机制之一是通过分泌主要炎症因子TNF-α而引发炎症性疾病。上述对应的参考文献分别为：1.Schultz-HectorS,BalzK,M,etal.Cellularlocalizationofendothelialalkalinephosphatasereactionproductandenzymeproteininthemyocardium[J].JournalofHistochemistry&CytochemistryOfficialJournaloftheHistochemistrySociety,1993,41(12):1813.2.BellMA,ScarrowWG.Stainingformicrovascularalkalinephosphataseinthickcelloidinsectionsofnervoustissue:Morphometricandpathologicalapplications[J].MicrovascularResearch,1984,27(2):189-2033.BirgitH,SarahC,NinaM,etal.Relationofplacentalalkalinephosphataseexpressioninhumantermplacentawithmaternalandoffspringfatmass[J].InternationalJournalofObesity,2018.4.BellL,WilliamsL.Histochemicaldemonstrationofalkalinephosphataseinhumanintestine,normalanddiseased[J].Histochemistry,1979,60(1):85-89.5.HAGerstrandI,LindholmK,LindrothY.EndothelialandBileCanalicularAlkalinePhosphataseinHumanLiverandSerum[J].ScandinavianJournalofClinical&LaboratoryInvestigation,1976,36(2):131-135.6.MillanJL,WhyteMP(2016),Alkalinephosphataseandhypophosphatasia,CalcifTissueInt98(4):398-416.7.HuiM,LiSQ,HolmyardD,ChengPT(1997)Stabletransfectionofnon-osteo-geniccelllineswithtissuenonspecificalkalinephosphataseenhancesmineraldepositionbothinthepresenceandabsenceofbetaglycerophosphate:Possibleroleforalkalinephosphataseinpathologi-calmineralization.CalcifTissueInt60:467-472.8.HuiM,TenenbaumHC.Newfaceofanoldenzyme:Alkalinephosphatasemaycontributetohumantissueagingbyinducingtissuehardeningandcalcification[J].AnatomicalRecord,1998,253(3):91-94.9.PoelstraK,BakkerWW,KlokPA,HardonkMJ,MeijerDK(1997),Aphysiologicfunctionforalkalinephosphatase:endotoxindetoxification.LabInvest,76:319–327.10.BhanA,AlamSN,RaychowdhuryA,etal.Intestinalalkalinephosphatasepreventsmetabolicsyndromeinmice.[J].ProcNatlAcadSciUSA,2013,110(17):7003-7008.11.SonokoNarisawa,LeiHuang,ArataIwasaki,HideakiHasegawa,DavidH.Alpers,andJoseLuisMillan(2003),AcceleratedFatAbsorptioninIntestinalAlkalinePhosphataseKnockoutMice.MOLECULARANDCELLULARBIOLOGY,23(21):7525–7530.12.PetersE,MehtaRL,MurrayPT,etal.Studyprotocolforamulticentrerandomisedcontrolledtrial:Safety,Tolerability,efficacyandqualityoflifeOfahumanrecombinantalkalinePhosphataseinpatientswithsepsis-associatedAcuteKidneyInjury(STOP-AKI)[J].BMJOpen,2016,6(9):e01237113.LukasM1,DrastichP,KonecnyM,GionchettiP,UrbanO,CantoniF,B本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种肠碱性磷酸酶作为在没有内毒素存在的情况下人白细胞的TNF-α和/或IL-6分泌抑制剂的应用。/n
【技术特征摘要】
1.一种肠碱性磷酸酶作为在没有内毒素存在的情况下人白细胞的TNF-α和/或IL-6分泌抑制剂的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肠碱性磷酸酶通过使底物ATP、ADP和/或AMP去磷酸化，产生的腺苷或AMP抑制人白细胞TNF-α和/或IL-6分泌。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肠碱性磷酸酶通过使底物去磷酸化抑制人白细胞TNF-α和/或IL-6分泌；
所述底物为细胞降解产物中的GTP、CTP、TTP、UTP以及GDP、GMP、CDP、CMP、TDP、TMP、UDP、UMP中的任一种；
或所述底物为细胞表面蛋白。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肠碱性磷酸酶在人白细胞移走聚集所在的疾病部位起作用。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肠碱性磷酸酶采用注射液形式。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：秦璐楠，惠鑫瑶，吴书音，高辰哲，刘天奇，姜媛媛，丛振煜，张子辉，崔加友，戴秀秀，双宝，惠觅宙，
申请(专利权)人：李鑫荣，
类型：发明
国别省市：山东;37
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