免疫球蛋白结合蛋白质和使用其的亲和载体制造技术

本发明专利技术提供在酸性条件下的抗体解离率提高的源自蛋白L的免疫球蛋白结合蛋白质和使用其的亲和载体。所述免疫球蛋白结合蛋白质至少包含1个免疫球蛋白结合结构域的变异体，以及所述亲和载体包含固相载体，所述固相载体结合有该免疫球蛋白结合蛋白质。该免疫球蛋白结合结构域的变异体由与序列号1～9的任一个所示的氨基酸序列具有至少85％的同源性且具有赋予的变异的氨基酸序列构成，具有免疫球蛋白κ链结合活性。

Immunoglobulin binding proteins and their affinity carriers

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免疫球蛋白结合蛋白质和使用其的亲和载体
本专利技术涉及免疫球蛋白结合蛋白质、使用其的亲和载体以及使用该亲和载体的抗体或其片段的分离方法。
技术介绍
抗体近年来被广泛利用于研究用试剂、抗体医药等。这些试剂、医药用的抗体通常通过亲和色谱进行纯化。抗体的亲和纯化通常使用固定化有作为与免疫球蛋白特异性结合的物质的配体的柱。该配体通常使用蛋白A、蛋白G、蛋白L等免疫球蛋白结合蛋白质。抗体的亲和纯化中，一般而言，首先在中性条件下使抗体吸附于柱后，通过清洗而除去杂质，接着将柱曝露于酸性条件，使所吸附的抗体从配体解离、洗脱。对于抗体的洗脱，由于在强酸性条件下抗体有时受到变性等损伤，因此，优选尽可能在温和的酸性条件下进行。另一方面，在温和的酸性条件下时，抗体不易从柱洗脱，因此，抗体的纯化效率降低。期望改善在温和的酸性条件下抗体从亲和柱的解离行为。蛋白A是从相对较早一直使用的配体蛋白质，提高在温和的酸性条件下的抗体解离行为的技术也从较早一直在研究。例如，在专利文献1中，通过对蛋白质A的E结构域导入部位特异性突变，提高在较温和的酸性条件(pH4.5附近)下的抗体解离行为。蛋白L由于与免疫球蛋白轻链κ结构域结合，因此，使用于Fab、单链抗体(scFv)等低分子抗体的纯化。关于改变为亲和配体用的蛋白L的报告少。例如，专利文献2和3中记载了包含蛋白L的结构域或其变异体的免疫球蛋白κ链结合性多肽。专利文献4中记载了具有蛋白L的免疫球蛋白轻链κ结构域结合性肽的选自氨基酸序列的15位、16位、17位和18位中的1个以上的氨基酸残基被取代的氨基酸序列且其酸解离pH与取代导入前相比移至中性侧的免疫球蛋白κ链可变区域结合性肽。专利文献5中记载了包含在蛋白L的免疫球蛋白结合结构域的氨基酸序列中选自第7位、第13位、第22位和第29位中的部位的至少2个以上被赖氨酸以外的碱性氨基酸或具有羟基的氨基酸取代的氨基酸序列的免疫球蛋白结合结构域的碱稳定性优异。现有技术文献专利文献专利文献1：日本专利第5229888号公报专利文献2：国际公开公报第2016/096643号专利文献3：美国专利第6884629号公报专利文献4：国际公开公报第2016/121703号专利文献5：国际公开公报第2017/069158号
技术实现思路
以往的亲和载体在温和的酸性条件下抗体的纯化效率不充分，寻求一种用于作为亲和配体使用的在温和的酸性条件下的抗体解离率提高的源自蛋白L的免疫球蛋白结合结构域。本专利技术提供在温和的酸性条件下的抗体解离率提高的包含源自蛋白L的免疫球蛋白结合结构域的变异体的免疫球蛋白结合蛋白质和使用其的亲和载体。本专利技术提供以下内容。一种免疫球蛋白结合蛋白质，包含至少1个免疫球蛋白结合结构域的变异体，该免疫球蛋白结合结构域的变异体由与序列号1～9的任一个所示的氨基酸序列具有至少85％的同源性的氨基酸序列且具有选自以下的(a)～(n)中的至少1个变异的氨基酸序列构成，具有免疫球蛋白κ链结合活性：(a)相当于序列号9所示的氨基酸序列的16位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；(b)相当于序列号9所示的氨基酸序列的18位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；(c)相当于序列号9所示的氨基酸序列的20位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；(d)相当于序列号9所示的氨基酸序列的26位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；(e)相当于序列号9所示的氨基酸序列的28位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；(f)相当于序列号9所示的氨基酸序列的30位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；(g)相当于序列号9所示的氨基酸序列的32位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；(h)相当于序列号9所示的氨基酸序列的34位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；(i)相当于序列号9所示的氨基酸序列的35位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；(j)相当于序列号9所示的氨基酸序列的38位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；(k)相当于序列号9所示的氨基酸序列的42位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；(l)相当于序列号9所示的氨基酸序列的54位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；(m)相当于序列号9所示的氨基酸序列的57位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；(n)相当于序列号9所示的氨基酸序列的70位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基。另外，本专利技术提供编码所述免疫球蛋白结合蛋白质的多核苷酸。另外，本专利技术提供包含所述多核苷酸的载体。另外，本专利技术提供包含所述载体的转化体。另外，本专利技术提供包含固相载体和结合于该固相载体的所述免疫球蛋白结合蛋白质的亲和载体。另外，本专利技术提供使用所述亲和载体的抗体或其片段的分离方法。另外，本专利技术提供包括使所述免疫球蛋白结合蛋白质在所述转化体或无细胞蛋白质合成系统中表达，或者化学合成的免疫球蛋白结合蛋白质的制造方法。另外，本专利技术提供以下内容：一种方法，是免疫球蛋白结合结构域的变异体的制造方法，包括对由序列号1～9的任一个所示的氨基酸序列或与它们具有至少85％的同源性的氨基酸序列构成且具有免疫球蛋白κ链结合活性的多肽加入选自以下的(a)～(n)中的至少1个变异：(a)相当于序列号9所示的氨基酸序列的16位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；(b)相当于序列号9所示的氨基酸序列的18位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；(c)相当于序列号9所示的氨基酸序列的20位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；(d)相当于序列号9所示的氨基酸序列的26位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；(e)相当于序列号9所示的氨基酸序列的28位的位置的氨基酸残基取代为其它本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫球蛋白结合蛋白质，包含至少1个免疫球蛋白结合结构域的变异体，/n该免疫球蛋白结合结构域的变异体由与序列号1～9的任一个所示的氨基酸序列具有至少85％的同源性的氨基酸序列且具有选自以下的(a)～(n)中的至少1个变异的氨基酸序列构成，具有免疫球蛋白κ链结合活性：/n(a)相当于序列号9所示的氨基酸序列的16位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；/n(b)相当于序列号9所示的氨基酸序列的18位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；/n(c)相当于序列号9所示的氨基酸序列的20位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；/n(d)相当于序列号9所示的氨基酸序列的26位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；/n(e)相当于序列号9所示的氨基酸序列的28位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；/n(f)相当于序列号9所示的氨基酸序列的30位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；/n(g)相当于序列号9所示的氨基酸序列的32位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；/n(h)相当于序列号9所示的氨基酸序列的34位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；/n(i)相当于序列号9所示的氨基酸序列的35位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；/n(j)相当于序列号9所示的氨基酸序列的38位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；/n(k)相当于序列号9所示的氨基酸序列的42位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；/n(l)相当于序列号9所示的氨基酸序列的54位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；/n(m)相当于序列号9所示的氨基酸序列的57位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；/n(n)相当于序列号9所示的氨基酸序列的70位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基。/n...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170925 JP 2017-1841591.一种免疫球蛋白结合蛋白质，包含至少1个免疫球蛋白结合结构域的变异体，
该免疫球蛋白结合结构域的变异体由与序列号1～9的任一个所示的氨基酸序列具有至少85％的同源性的氨基酸序列且具有选自以下的(a)～(n)中的至少1个变异的氨基酸序列构成，具有免疫球蛋白κ链结合活性：
(a)相当于序列号9所示的氨基酸序列的16位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；
(b)相当于序列号9所示的氨基酸序列的18位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；
(c)相当于序列号9所示的氨基酸序列的20位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；
(d)相当于序列号9所示的氨基酸序列的26位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；
(e)相当于序列号9所示的氨基酸序列的28位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；
(f)相当于序列号9所示的氨基酸序列的30位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；
(g)相当于序列号9所示的氨基酸序列的32位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；
(h)相当于序列号9所示的氨基酸序列的34位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；
(i)相当于序列号9所示的氨基酸序列的35位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；
(j)相当于序列号9所示的氨基酸序列的38位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；
(k)相当于序列号9所示的氨基酸序列的42位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；
(l)相当于序列号9所示的氨基酸序列的54位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；
(m)相当于序列号9所示的氨基酸序列的57位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基；
(n)相当于序列号9所示的氨基酸序列的70位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基或缺失，或者在该位置之前或之后的位置插入氨基酸残基。


2.根据权利要求1所述的免疫球蛋白结合蛋白质，其中，
所述(a)的变异是相当于序列号9所示的氨基酸序列的16位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基，
所述(b)的变异是相当于序列号9所示的氨基酸序列的18位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基，
所述(c)的变异是相当于序列号9所示的氨基酸序列的20位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基，
所述(d)的变异是相当于序列号9所示的氨基酸序列的26位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基，
所述(e)的变异是相当于序列号9所示的氨基酸序列的28位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基，
所述(f)的变异是相当于序列号9所示的氨基酸序列的30位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基，
所述(g)的变异是相当于序列号9所示的氨基酸序列的32位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基，
所述(h)的变异是相当于序列号9所示的氨基酸序列的34位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基，
所述(i)的变异是相当于序列号9所示的氨基酸序列的35位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基，
所述(j)的变异是相当于序列号9所示的氨基酸序列的38位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基，
所述(k)的变异是相当于序列号9所示的氨基酸序列的42位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基，
所述(l)的变异是相当于序列号9所示的氨基酸序列的54位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基，
所述(m)的变异是相当于序列号9所示的氨基酸序列的57位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基，
所述(n)的变异是相当于序列号9所示的氨基酸序列的70位的位置的氨基酸残基取代为其它氨基酸残基。


3.根据权利要求1或2所述的免疫球蛋白结合蛋白质，其中，所述其它氨基酸残基为Gln、Asp、Lys、Arg或His。


4.根据权利要求1～3中任一项所述的免疫球蛋白结合蛋白质，其中，所述免疫球蛋白结合结构域的变异体由与序列号1～9的任一个所示的氨基酸序列具有至少85％的同源性且在选自相当于序列号9所示的氨基酸序列的16位、18位、20位、26位、28位、30位、32位、34位、35位、38位、42位、54位、57位和70位的位置中的至少1个位置具有选自Gln、Asp、Lys、Arg和His的氨基酸残基的氨基酸序列构成。


5.根据权利要求1～4中任一项所述的免疫球蛋白结合蛋白质，其中，所述免疫球蛋白结合结构域的变异体由与序列号1～9的任一个所示的氨基酸序列具有至少85％的同源性且具有以下的(a’)～(...

【专利技术属性】
技术研发人员：安冈润一，吉村贵一，芳贺智亮，
申请(专利权)人：JSR株式会社，JSR生命科学株式会社，JSR微有限公司，JSR微公司，
类型：发明
国别省市：日本;JP