检测Na/K-ATP酶介导的SRC信号转导以进行癌症的诊断和预后的方法技术

提供了用于对象中癌症的诊断或预后的方法，所述方法包括下述步骤：从对象获得生物样品；确定所述生物样品中存在的Na/K ATP酶中Y260残基处磷酸化的量；以及将所述样品中所述磷酸化的量与对照水平进行比较，从而诊断所述癌症。还提供了用于检测从氧化磷酸化向有氧糖酵解的代谢切换的方法，其中获得包括一个或多个细胞的生物样品，并在所述一个或多个细胞中确定Na/K ATP酶中Y260残基处磷酸化的量。

Detection of SRC signal transduction mediated by Na / K-ATPase for cancer diagnosis and prognosis

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】检测Na/K-ATP酶介导的SRC信号转导以进行癌症的诊断和预后的方法相关申请本申请要求2017年9月6日提交的美国临时申请系列号62/554,669的优先权，所述临时申请的全部内容通过引用并入本文。
本公开的主题内容涉及检测Na/K-ATP酶介导的Src信号转导以进行癌症的诊断和预后的方法。具体来说，本公开的主题内容的某些实施方式涉及在Na/K-ATP酶磷酸化的基础上检测Na/K-ATP酶介导的Src信号转导以进行癌症的诊断和预后的方法。
技术介绍
癌细胞为了能量利用而显示出对有氧糖酵解提高的依赖性，这种现象被称为瓦博格效应(Warburgeffect)。这种代谢切换为癌细胞提供了重要的代谢物。已知在癌细胞中原癌基因Src激酶通过将代谢酶类磷酸化驱动所述瓦博格效应，并通常在癌症中被过度活化。尽管对Src活性的结构调控了解很多，但不足以解释癌症中的这种明显的过度活化。迄今为止，尚未鉴定到Src的细胞质膜调节物，在所述细胞质膜处Src参与从多个细胞表面受体传递信号。Na/K-ATP酶是高表达的膜蛋白，并且在大多数人类细胞中细胞质膜含有超过一百万个所述酶。有趣的是，仅仅约30％的细胞质膜Na/K-ATP酶从事离子泵送。最近的研究揭示出α1Na/K-ATP酶与Src相互作用形成受体复合物，其允许内源强心性甾类(CTS)通过EGF受体/活性氧物质(ROS)途径启动蛋白质和脂类激酶级联，从而调控一系列细胞活动。然而，尚不知道这种相互作用对Src的质膜池的调控是否重要。
技术实现思路
正如在研究了本文件中提供的信息后对本领域普通技术人员来说变得显而易见的，本公开的主题内容满足一些或所有上述需求。本概述描述了本公开主题内容的几个实施方式，并且在许多情况下列出了这些相互作用的变化和排列。本概述仅仅是大量不同实施方式的示例。给定实施方式的一个或多个代表性特点的提及同样是示例性的。这种实施方式通常可以在具有或不具有提到的特点的情况下存在；同样，那些特点可以应用于本公开主题内容的其他实施方式，不论其在本概述中是否列出。为了避免过多的重复，本概述没有列出或提出这些特点的所有可能的组合。本公开的主题内容包括检测Na/K-ATP酶介导的Src信号转导以进行癌症的诊断和预后的方法。具体来说，本公开的主题内容的某些实施方式包括在Na/K-ATP酶磷酸化的基础上检测Na/K-ATP酶介导的Src信号转导以进行癌症的诊断和预后的方法。在某些实施方式中，提供了一种用于对象中癌症的诊断或预后的方法，所述方法包括下述步骤：获得生物样品；确定所述生物样品中存在的Na/KATP酶中Y260残基处的磷酸化的量；以及如果存在所述磷酸化的话将所述样品中所述磷酸化的量与所述磷酸化的对照水平进行比较，其中如果所述样品中磷酸化的量与所述对照水平相比降低，则所述对象被诊断为具有癌症或癌症风险。在某些实施方式中，所述Na/KATP酶是α1Na/KATP酶亚型。在某些实施方式中，所述癌症是前列腺癌、肾癌或乳腺癌或其他类型的癌症。在某些实施方式中，所述癌症是转移癌。就用于确定所述Y260残基的磷酸化的生物样品而言，在某些实施方式中，所述生物样品包含血液、血浆或血清。在某些实施方式中，所述生物样品包括一个或多个癌或肿瘤细胞，例如在某些实施方式中来自于肿瘤活检组织的一个或多个肿瘤细胞。在某些实施方式中，所述生物样品从对象例如人类对象获得。在某些实施方式中，确定所述Na/KATP酶中Y260残基处磷酸化的量包括使用质谱(MS)分析、免疫测定分析(例如ELISA)或上述两者或全部确定所述磷酸化的量。在某些实施方式中，可以在所确定的Y260残基的磷酸化的量的基础上选择或修改癌症治疗。在某些实施方式中，在将所述对象诊断为具有癌症或癌症风险后，可以随后向所述对象施用化疗剂或其他抗癌药剂。在某些实施方式中，作为另外的诊断或治疗指标，也可以测量所述生物样品中Src活性的量。在本公开主题内容的某些实施方式中，还提供了用于检测从氧化磷酸化向有氧糖酵解的代谢切换的方法。在某些实施方式中，这些检测方法包括下述步骤：获得包括一个或多个细胞的生物样品；以及确定所述一个或多个细胞中存在的Na/KATP酶中Y260残基的磷酸化的量。在某些实施方式中，所述检测方法还包括确定所述一个或多个细胞中产生的乳酸盐的量的步骤和/或如果存在所述磷酸化的话将所述磷酸化的量与对照水平进行比较的步骤，其中所述磷酸化的量的降低指示了所述代谢切换。在某些实施方式中，所述Na/KATP酶是α1Na/KATP酶亚型。在某些实施方式中，所述一个或多个细胞包含癌细胞，例如在某些实施方式中一个或多个细胞包含前列腺癌细胞、肾癌细胞或乳腺癌细胞。对于本领域普通技术人员来说，在研究了本文件中的描述、附图和非限制性实施例后，本公开主题内容的其他特点和优点碱改变的显而易见。附图说明图1A-1E包括的图像、表和图示出了将α1Na/K-ATP酶中的Y260鉴定为Src结合位点，包括：(图1A)示出了不同人类Na/K-ATP酶亚型的第二胞质结构域(CD2)中含有Y260的序列的比较的表；(图1B)示出了不同细胞系中CD2与Src之间的相互作用的图像，其中那个示出了代表性印迹；；(图1C)示出了哇巴因对ERK活化的影响的图像和图(*与相同细胞系的介质处理的对照相比p<0.05(Student’sT-检验)；#不同细胞系之间相比p<0.05(单向ANOVA))；(图1D)示出了CD2中Y260磷酸化的检测的图像，其中示出了代表性印迹；(图1E)示出了小鼠组织中α1Na/K-ATP酶的Y260磷酸化和表达的图像，其中示出了代表性印迹。图2A-2H包括示出了Y260磷酸化和Src的图像和图，包括：(图2A)示出了在纯化的猪肾α1Na/K-ATP酶(2μg)中Y260在2mMMg2+-ATP存在下在10分钟内被Src(4.5单位)磷酸化的图像，其中示出了代表性印迹，并且对照印迹示出了在Y418和Y529位点处被Mg2+-ATP的Src磷酸化；(图2B)示出了在LLC-PK1细胞中PP2(5μM，30分钟)对α1Na/K-ATP酶的酪氨酸磷酸化的影响的图像，其中示出了代表性免疫印迹；(图2C)示出了Src家族激酶敲除对Y260磷酸化的影响的图像，其中细胞裂解物从Src、Yes、Fyn敲除SYF和Src挽救SYF细胞制备，并示出了代表性印迹；(图2D)示出了在LLC-PK1细胞中哇巴因对Y260磷酸化的影响随时间变化的图像和图(**与介质处理的对照相比p<0.01)；(图2E)示出了在LLC-PK1细胞中不同浓度的哇巴因对Y260磷酸化的影响的图像；(图2F和2G)示出了在LLC-PK1细胞中重组EGF以时间(图2F)和剂量(图2G)依赖性方式影响Y260磷酸化的图像，其中示出了代表性免疫印迹，和(图2H)示出了整合蛋白信号转导对Y260磷酸化的影响的图像，其中细胞附着诱导的整合蛋白信号转导通过将细胞在纤连蛋白包被的板上铺板来测量，并示出了代表性印迹。图本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于对象中癌症的诊断或预后的方法，所述方法包括：/n获得生物样品；/n确定所述生物样品中存在的Na/K ATP酶中Y260残基处磷酸化的量；以及/n如果存在所述磷酸化的话将所述样品中所述磷酸化的量与所述磷酸化的对照水平进行比较，其中如果所述样品中所述磷酸化的量与所述对照水平相比降低，则所述对象被诊断为具有癌症或癌症风险。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170906 US 62/554,6691.一种用于对象中癌症的诊断或预后的方法，所述方法包括：
获得生物样品；
确定所述生物样品中存在的Na/KATP酶中Y260残基处磷酸化的量；以及
如果存在所述磷酸化的话将所述样品中所述磷酸化的量与所述磷酸化的对照水平进行比较，其中如果所述样品中所述磷酸化的量与所述对照水平相比降低，则所述对象被诊断为具有癌症或癌症风险。


2.根据权利要求1所述的方法，其中所述Na/KATP酶是α1Na/KATP酶亚型。


3.根据权利要求1所述的方法，其中所述生物样品包括一个或多个癌细胞。


4.根据权利要求1所述的方法，其中所述生物样品包含肿瘤活检组织。


5.根据权利要求1所述的方法，其中所述癌症是前列腺癌或乳腺癌。


6.根据权利要求1所述的方法，其中所述癌症是转移癌。


7.根据权利要求1所述的方法，其中确定Y260残基处磷酸化的量包括使用质谱(MS)分析、免疫测定分析或两者来确定磷酸化的量。


8.根据权利要求1所述的方法，其中所述生物样品是从对象获得的。


9.根据权利要求8所述的方法，其中所述对象是人类。


10.根据权利要求1所述的方法，其还包括在所确定的所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：穆米塔·班纳吉，崔晓语，谢子建，
申请(专利权)人：马歇尔大学科研协会，
类型：发明
国别省市：美国;US