C3b灭活多肽制造技术

公开了包括C3b结合区和C3b灭活区的多肽，以及编码这样的多肽的核酸和载体。还公开的是包括这样的多肽的细胞和组合物，以及使用它们的用途和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】C3b灭活多肽本申请要求于2017年6月9日提交的GB1709222.2的优先权，为了所有目的，其内容和元素通过引用合并在本文中。专利
本专利技术涉及分子生物学、免疫学和药物领域。更具体地，本专利技术涉及一种多肽，其包括C3b结合区和C3b灭活区；编码所述多肽的核酸和载体；包括所述核酸/载体和/或产生所述多肽的细胞；包括所述多肽/核酸/载体/细胞的组合物；以及所述多肽/核酸/载体/细胞的治疗和预防用途，例如，治疗在其中病理性牵连C3b的疾病/病症。专利技术背景年龄相关性黄斑变性(age-relatedmaculardegeneration,AMD)是发达世界中失明的主要原因：据估计到2020年将有1.96亿人受到影响。疾病的早期阶段的特征在于在黄斑(对中央视敏度(centralvisualacuity)负责的视网膜的中心部分)中病变(称为脉络膜疣(drusen))的形成。这些脉络膜疣邻近于布鲁赫膜(Bruch'smembrane，BrM)形成，布鲁赫膜是将眼睛的血液供应(脉络膜(choroid))与视网膜色素上皮细胞(retinalpigmentepithelium,RPE)分开的膜，该视网膜色素上皮细胞支撑视力所必须的视杆细胞和视锥细胞。脉络膜疣引起RPE细胞功能障碍和死亡，随后引起视杆细胞和视锥细胞的死亡。AMD很大程度上是一种遗传疾病，其补体系统的基因中的突变与AMD的增加性风险强烈相关。的确，已经清楚的是，补体系统的过度活化在该疾病的发病机理中具有重要的作用。经由替代途径、标准途径和凝集素途径的补体系统的活化汇聚以形成C3转化酶。由替代途径形成的C3转化酶包括因子Bb和C3b。C3转化酶催化C3蛋白水解成C3a和C3b片段。C3b在表面上(例如，细胞/组织)的沉积启动补体级联的放大环路，最终引起细胞/组织破坏和局部炎性反应(所有这些都是早期AMD的特征)。非细胞结构、例如BrM上补体的活化由补体因子H(factorH,FH)和补体因子I(factorI,FI)来调节。因子I裂解和灭活C3b(iC3b不能与因子Bb组装成功能性C3转化酶)，因而妨碍(stopping)补体活化，但是仅可在诸如因子H的辅助因子存在情况下这样做。过去5-10年，已经研究了几种用于AMD的补体类疗法。这些已经包括了将完整补体调节物、例如因子H或截短的因子H同种型FHL-1注射到眼睛中的尝试。使用这样的疗法很少成功，主要因为这些蛋白质不能到达目标区域，即，BrM/RPE细胞界面。
技术实现思路
在一个方面中，本专利技术提供了一种多肽，其包括C3b结合区和C3b灭活区的多肽。在某些实施方式中，C3b灭活区能够蛋白水解裂解C3b。在某些实施方式中，C3b灭活区能够在位置1303和/或1320处裂解C3α'链。在某些实施方式中，C3b灭活区包括与SEQIDNO：9的氨基酸序列具有至少65％的序列同一性的氨基酸序列，或由其组成。在某些实施方式中，C3b结合区在由补体因子I的辅助因子结合的区域中结合C3b。在某些实施方式中，C3b结合区在由补体因子H、CR1、CD46、CD55或C4-结合蛋白之一结合的区域中结合C3b。在某些实施方式中，C3b结合区在由补体因子H结合的区域中、或在由补体受体1(CR1)结合的区域中结合C3b。在某些实施方式中，C3b结合区在由补体因子H补体调控蛋白(CCP)结构域1-4结合的区域中、或者在由CR1CCP结构域8-10或15-17结合的区域中结合C3b。在某些实施方式中，C3b结合区包括与SEQIDNO：11、13或14的氨基酸序列具有至少65％的序列同一性的氨基酸序列，或由其组成。在某些实施方式中，多肽能够扩散跨越布鲁赫膜(BrM)。在某些实施方式中，多肽不是糖基化的。在某些实施方式中，C3b灭活区缺乏与SEQIDNO：27的共有序列相符的氨基酸序列。在某些实施方式中，多肽包括检测序列，其中该检测序列包括蛋白水解酶的裂解位点或由其组成，并且其中利用蛋白水解酶的多肽的裂解引起非内源肽的产生。在某些实施方式中，多肽包括与SEQIDNO：32、33、34、35、36、37、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、69、70、71、72或73的氨基酸序列具有至少65％的序列同一性的氨基酸序列，或由其组成。在某些实施方式中，多肽另外包括分泌途径序列。在某些实施方式中，该分泌途径序列包括与SEQIDNO：27的共有序列相符的氨基酸序列的一个或多个拷贝，并且其中多肽另外包括用于除去分泌途径序列的裂解位点。在某些实施方式中，该用于除去分泌途径序列的裂解位点是内切蛋白酶裂解位点，例如，用于由RPE细胞表达的内切蛋白酶、例如弗林内切蛋白酶(furinendoprotease)的裂解位点。在另一个方面中，本专利技术提供了一种核酸，其编码根据本专利技术的多肽。在另一个方面中，本专利技术提供了一种载体，其包括本专利技术的核酸。在另一个方面中，本专利技术提供了一种细胞，其包括根据本专利技术的多肽、核酸或载体。在另一个方面中，本专利技术提供了一种生产多肽的方法，其包括向细胞中导入根据本专利技术的核酸或载体，以及在适合于表达多肽的条件下培养该细胞。在另一个方面中，本专利技术提供了一种细胞，其是通过根据本专利技术的生产多肽的方法所获得的或可获得的。在另一个方面中，本专利技术提供了一种药物组合物，其包括根据本专利技术的多肽、核酸、载体或细胞，以及药学可接受载体、佐剂、赋形剂或稀释剂。在另一个方面中，本专利技术提供了在治疗或预防疾病或病症的方法中使用的根据本专利技术的多肽、核酸、载体或药物组合物。在另一个方面中，本专利技术提供了根据本专利技术的多肽、核酸、载体或药物组合物在制造药物中的用途，该药物用于治疗或预防疾病或病症。在另一个方面中，本专利技术提供了一种治疗或预防疾病或病症的方法，其包括向受试者施用根据本专利技术的所述多肽、核酸、载体或药物组合物。在另一个方面中，本专利技术提供了一种治疗或预防受试者中的疾病或病症的方法，其包括修饰该受试者的至少一个细胞以表达或包括根据本专利技术的核酸或载体。在某些实施方式中，根据本专利技术的各个方面，所述疾病或病症是其中C3b或含有C3b的复合物、与C3b或含有C3b的复合物相关联的活性/响应、或者与C3b或含有C3b的复合物相关联的活性/响应的产物为病理上牵连的疾病或病症。在某些实施方式中，所述疾病或病症是年龄相关性黄斑变性(AMD)。在另一个方面中，本专利技术提供了成套的试剂盒，其包括预定量的根据本专利技术的多肽、核酸、载体、细胞、或药物组合物。在另一个方面中，本专利技术提供了一种检测样品中的多肽的方法，其包括：(i)使疑似含有本专利技术的多肽的样品接触特异于检测序列的蛋白水解裂解位点的蛋白水解酶；和(ii)检测所述非内源肽的存在。说明书本专利技术涉及一种多肽，其包含C3b结合区和C3b灭活区的多肽。多肽包含补体因子I和补体因子I的辅助因子(例如，如本文描述的，如补体因子H、补体受体1(C本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多肽，其包括C3b结合区和C3b灭活区。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170609 GB 1709222.21.一种多肽，其包括C3b结合区和C3b灭活区。


2.根据权利要求1所述的多肽，其中所述C3b灭活区能够蛋白水解裂解C3b。


3.根据权利要求1或权利要求2所述的多肽，其中所述C3b灭活区能够在位置1303和/或1320裂解C3α'链。


4.根据权利要求1到3中任一项所述的多肽，其中所述C3b灭活区包括与SEQIDNO：9的氨基酸序列具有至少65％的序列同一性的氨基酸序列，或由其组成。


5.根据权利要求1到4中任一项所述的多肽，其中所述C3b结合区在由补体因子I的辅助因子结合的区域中结合C3b。


6.根据权利要求1到5中任一项所述的多肽，其中所述C3b结合区在由补体因子H、CR1、CD46、CD55或C4结合蛋白之一结合的区域中结合C3b。


7.根据权利要求1到6中任一项所述的多肽，其中所述C3b结合区在由补体因子H结合的区域中、或在由补体受体1(CR1)结合的区域中结合C3b。


8.根据权利要求1到7中任一项所述的多肽，其中所述C3b结合区在由补体因子H补体调控蛋白(CCP)结构域1-4结合的区域中、或者在由CR1CCP结构域8-10或15-17结合的区域中结合C3b。


9.根据权利要求1到8中任一项所述的多肽，其中所述C3b结合区包括与SEQIDNO：11、13或14的氨基酸序列具有至少65％的序列同一性的氨基酸序列，或由其组成。


10.根据权利要求1到9中任一项所述的多肽，其能够扩散跨越布鲁赫膜(BrM)。


11.根据权利要求1到10中任一项所述的多肽，其中所述多肽不是糖基化的。


12.根据权利要求1到11中任一项所述的多肽，其中所述C3b灭活区缺乏与SEQIDNO：27的共有序列相符的氨基酸序列。


13.根据权利要求1到12中任一项所述的多肽，其中所述多肽包括检测序列，其中所述检测序列包括蛋白水解酶的裂解位点或由其组成，并且其中利用所述蛋白水解酶的所述多肽的裂解引起非内源肽的产生。


14.根据权利要求1到13中任一项所述的多肽，其包括与SEQIDNO：32、33、34、35、36、37、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、69、70、71、72或73的氨基酸序列具有至少65％的序列同一性的氨基酸序列，或由其组成。


15.根据权利要求1到14中任一项所述的多肽，其另外包括分泌途径序列。


16.根据权利要求15所述的多肽，其中所述分泌途径序列包括与SEQIDNO：27的共有序列相符的氨基酸序列的一个或多个拷贝，并且其中所述多肽另外包括用于除去所述分泌途径序列的裂解位点。


17.根据权利要求16所述的多肽，其中所述用于除去所述分泌途径序列的裂解位点是弗林内切蛋白酶裂解位点。...

【专利技术属性】
技术研发人员：西蒙·克拉克，理查德·昂温，保罗·比舍普，
申请(专利权)人：曼彻斯特大学，
类型：发明
国别省市：英国;GB