一种用于啤酒中呕吐毒素的模型建立方法及其应用技术

本发明专利技术公开一种用于啤酒中呕吐毒素的模型建立方法及其应用，包括以下步骤：S1、样品模版DNA制备；S2、引物合成；S3、qPCR反应体系；S4、qPCR定量；S5、预测微生物学模型的建立。本发明专利技术将qPCR技术检测镰刀菌生物量、HPLC检测DON含量与食品预测微生中物学相结合，构建啤酒酿造过程DON的生成模型，是研究啤酒中DON污染机制潜力策略。而且，根据模型方程，设定镰刀菌生物量和DON含量的阈值，计算安全的啤酒原料污染水平以及酿造工艺参数值，可初步用于预警。

A method for modeling vomitus in beer and its application

【技术实现步骤摘要】
一种用于啤酒中呕吐毒素的模型建立方法及其应用
本专利技术涉及检测方法
，具体是一种用于啤酒中呕吐毒素的模型建立方法及其应用。
技术介绍
呕吐毒素，学名为脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,简称DON)，由易于侵染田间生长的大麦、小麦、玉米等谷物的多种镰刀菌(Fusariumspp.)产生。DON具有耐热和水溶两大特性，在食品加工过程中不易被破坏，被联合国粮农组织和世界卫生组织(FAO/WHO)确定为最危险的自然发生食品污染物之一，并提出每人每日最大摄入量1μg/Kg体重。我国《GB2761-2011食品中真菌毒素限量》规定，食品加工用小麦、大麦、玉米中DON的限量标准为1mg/kg。研究表明，DON从大麦原料经酿造过程进入成品啤酒的途径有两种：一，啤酒大麦在田间生长阶段原始积累的DON，在啤酒生产过程中不能被破坏或通过麦糟除去的部分经过发酵液带到成品啤酒中；二，存留在啤酒原料籽粒内部的产毒镰刀菌，在啤酒生产过程中，主要是麦芽制造阶段，再次产生的DON也会一起进入成品啤酒中。而后者是主要途径，因为啤酒大麦发芽之前的浸泡本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于啤酒中呕吐毒素的模型建立方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、样品模版DNA制备：采用微生物DNA提取试剂盒，从小麦或麦芽样品中提取微生物总DNA，其中包含镰刀菌的产毒DNA；/nS2、引物合成：从NCBI数据库检索到镰刀菌cDNA序列中控制DON合成的特异序列tri5，设计并合成PCR的引物；/nS3、qPCR反应体系：将每个样品的模版DNA、引物和Taqman荧光探针加入Powermix反应体系溶液，进行PCR扩增，并对PCR反应程序进行优化，得到产毒镰刀菌DNA的单一扩增峰、峰型对称、标准DNA定量线性关系良好的qPCR程序；/nS4、qPCR定量：PCR反应每经过一个循...

【技术特征摘要】
1.一种用于啤酒中呕吐毒素的模型建立方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、样品模版DNA制备：采用微生物DNA提取试剂盒，从小麦或麦芽样品中提取微生物总DNA，其中包含镰刀菌的产毒DNA；
S2、引物合成：从NCBI数据库检索到镰刀菌cDNA序列中控制DON合成的特异序列tri5，设计并合成PCR的引物；
S3、qPCR反应体系：将每个样品的模版DNA、引物和Taqman荧光探针加入Powermix反应体系溶液，进行PCR扩增，并对PCR反应程序进行优化，得到产毒镰刀菌DNA的单一扩增峰、峰型对称、标准DNA定量线性关系良好的qPCR程序；
S4、qPCR定量：PCR反应每经过一个循环，增加一个荧光信号，当荧光信号达到荧光阈值时所经历的循环次数CT值与起始模板的量呈线性关系，由于禾谷镰刀菌是最常见的DON产生菌，所以将从小麦样品中分离纯化得到的禾谷镰刀菌DNA作为标准品进行不同浓度的qPCR反应，制定与CT值之间的标准曲线，最后通过每个未知样品qPCR的CT值对其产DON镰刀菌DNA的浓度进行定量检测；
S5、预测微生物学模型的建立：采用L18-Hunter结合Plackett-Burman设计，以发芽时间、温度、湿度、小麦原料中起始DON含量和产毒镰刀菌生物量为参数，以DON含量和产毒镰刀菌生物量为响应值...

【专利技术属性】
技术研发人员：李锋，
申请(专利权)人：南通科技职业学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32