一种增强稗草平脐蠕胞菌孢子除草毒力的方法技术

一种增强稗草平脐蠕胞菌孢子除草毒力的方法，属于微生物技术领域。该稗草平脐蠕胞菌孢子是经过循环接种稗草种子8‑12次驯化培养得到。本发明专利技术方法提高了稗草平脐蠕胞菌孢子对多种稗草的致病性，尤其是对长芒稗、紫穗稗和湖南稗子的致病性增加明显。在驯化过程中没有显著改变孢子对主要作物的安全性，并对产孢和孢子的耐热性能和产孢特性没有显著影响。本发明专利技术产品在除草毒力上相比未经过驯化的稗草平脐蠕胞菌孢子具有更好的优势。

A method to enhance the herbicidal virulence of spores of Echinochloa crudgrass

【技术实现步骤摘要】
一种增强稗草平脐蠕胞菌孢子除草毒力的方法
本专利技术属于微生物
，具体涉及一种增强稗草平脐蠕胞菌孢子除草毒力的方法。
技术介绍
水稻是重要的粮食作物，在生产过程中水稻产量和品质易受杂草的影响。目前生产上主要依赖化学除草剂防治。化学除草剂长期大量应用已造成稻田抗药性生物型杂草急剧增加，局部地区农田和水环境被污染，对环境和生态安全以及农业可持续发展构成潜在威胁。相反，微生物农药对环境友好，选择性强，可用于生产无公害食品等，是稻田化学除草的一种有效补充或替代，同时有利于保护稻区环境安全和生物多样性。杂草病原菌是微生物除草剂主要来源之一，具有安全且不易产生抗药性等优点。迄今为止，我国尚未有商品化的微生物除草剂产品应用于稻田杂草防治。但文献报道有几种具有除草毒力的潜力菌株，包括画眉草弯孢菌(Curvulariaeragrostidis)、禾长蠕孢菌（Helminthosporiumgramineum）、新月弯孢菌(Culvularialunata)、尖角突脐孢菌（Exserohilummonoceras）、齐整小核菌（Sclerotiumrolfsii）、和假隔链格孢菌(Nimbyaalternantherae)等。稗草平脐蠕胞菌（Bipolarisgraminus）是从自然感病的稗草植株上分离筛选到的除草毒力菌株，生产性状好、对稗草等稻田杂草具有高致病性，但田间除草毒力不能满足生产要求。本方法通过不断驯化的方法提高了稗草平脐蠕胞菌的致病性和除草毒性，以利于生产应用。
技术实现思路
针对上述现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于设计提供一种增强稗草平脐蠕胞菌孢子除草毒力的方法。本专利技术产品增强除草毒力的稗草平脐蠕胞菌孢子经过循环接种稗草种子8-12次驯化培养得到，提高了稗草平脐蠕胞菌的致病性和除草毒力。为了实现上述目的，采用以下技术方案：一种增强除草毒力的稗草平脐蠕胞菌孢子，其特征在于该稗草平脐蠕胞菌孢子是经过循环接种稗草种子8-12次驯化培养得到。所述的一种增强除草毒力的稗草平脐蠕胞菌孢子，其特征在于具体通过以下步骤得到：（1）将稗草平脐蠕胞菌接种到PDA平板上，25℃-28℃黑暗倒置培养10-14d后，采用无菌0.05%Tween-20溶液洗脱孢子，配制成浓度1×105-5×105个/mL的孢子悬浮液，备用；（2）将20-25g稗草种子置于三角瓶中，121℃灭菌30min，冷却后接种上一步骤得到的孢子悬浮液，进行25℃-28℃恒温黑暗培养10-12d，收集孢子悬浮液；（3）重复步骤（2）8-12次，得到驯化后的孢子悬浮液；（4）取步骤（3）得到的驯化后的孢子悬浮液50-100μL滴加到PDA平板上，采用接种环划线后，进行25℃-28℃恒温培养4-5d；（5）挑选步骤（4）得到的平板上的稗草平脐蠕胞菌单菌落，取其边缘带有菌丝体的菌块，转接至新鲜PDB培养基内，25℃-28℃振荡培养3-4d后将菌丝体粉碎，制成菌悬液备用；（6）以玻化微珠为底物基质，添加稗种豆粕粉混合培养基质、Na3PO4·12H2O、MgSO4和水，搅拌均匀后于121℃灭菌30min，得到培养基，冷却后接种步骤（5）所得到的菌悬液，搅拌均匀后25℃-28℃恒温黑暗培养12-14d，收集稗草平脐蠕胞菌孢子，配制得到0.05%Tween-20孢子悬浮液。所述的一种增强除草毒力的稗草平脐蠕胞菌孢子，其特征在于所述步骤（6）中培养基中玻化微珠、稗种豆粕粉混合培养基质、Na3PO4·12H2O4g、MgSO4和水的质量比为140:100:4:2:800，所述稗种豆粕粉混合培养基质包括稗种粉、豆粕粉和稗草茎杆粉质量比为1:1:8。所述的一种增强除草毒力的稗草平脐蠕胞菌孢子，其特征在于所述步骤（6）中所述菌悬液接种量为150～170g/L。一种增强稗草平脐蠕胞菌孢子除草毒力的方法，其特征在于将稗草平脐蠕胞菌孢子经循环接种稗草种子进行8-12次驯化，以增强稗草平脐蠕胞菌孢子除草毒力。所述的一种增强稗草平脐蠕胞菌孢子除草毒力的方法，其特征在于具体包括以下步骤：（1）将稗草平脐蠕胞菌接种到PDA平板上，25℃-28℃黑暗倒置培养10-14d后，采用无菌0.05%Tween-20溶液洗脱孢子，配制成浓度1×105-5×105个/mL的孢子悬浮液，备用；（2）将20-25g稗草种子置于三角瓶中，121℃灭菌30min，冷却后接种上一步骤得到的孢子悬浮液，进行25℃-28℃恒温黑暗培养10-12d，收集孢子悬浮液；（3）重复步骤（2）8-12次，得到驯化后的孢子悬浮液；（4）取步骤（3）得到的驯化后的孢子悬浮液50-100μL滴加到PDA平板上，采用接种环划线后，进行25℃-28℃恒温培养4-5d；（5）挑选步骤（4）得到的平板上的稗草平脐蠕胞菌单菌落，取其边缘带有菌丝体的菌块，转接至新鲜PDB培养基内，25℃-28℃振荡培养3-4d后将菌丝体粉碎，制成菌悬液备用；（6）以玻化微珠为底物基质，添加稗种豆粕粉混合培养基质、Na3PO4·12H2O、MgSO4和水，搅拌均匀后于121℃灭菌30min，得到培养基，冷却后接种步骤（5）所得到的菌悬液，搅拌均匀后25℃-28℃恒温黑暗培养12-14d，收集稗草平脐蠕胞菌孢子，配制得到0.05%Tween-20孢子悬浮液。所述的一种增强稗草平脐蠕胞菌孢子除草毒力的方法，其特征在于所述步骤（6）中培养基中玻化微珠、稗种豆粕粉混合培养基质、Na3PO4·12H2O4g、MgSO4和水的质量比为140:100:4:2:800，所述稗种豆粕粉混合培养基质包括稗种粉、豆粕粉和稗草茎杆粉质量比为1:1:8。所述的一种增强稗草平脐蠕胞菌孢子除草毒力的方法，其特征在于所述步骤（6）中所述菌悬液接种量为150～170g/L。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术方法提高了稗草平脐蠕胞菌孢子对多种稗草的致病性，尤其是对长芒稗、紫穗稗和湖南稗子的致病性增加明显。在驯化过程中没有显著改变孢子对主要作物的安全性，并对产孢和孢子的耐热性能和产孢特性没有显著影响。本专利技术产品在除草毒力上相比未经过驯化的稗草平脐蠕胞菌孢子具有更好的优势。具体实施方式以下将结合实施例对本专利技术做进一步说明。实施例1：（1）将稗草平脐蠕胞菌接种在PDA平板上，28℃黑暗倒置培养14d后，用无菌0.05%Tween-20溶液洗下孢子，配成浓度为1×105个/mL孢子悬浮液。（2）将25g无芒稗种子置于250mL三角瓶内，121℃灭菌30min，冷却后接种步骤（1）得到的孢子悬浮液，每瓶10mL，接种3瓶。（3）将三角瓶置于培养箱内，28℃恒温黑暗培养10d后，收集孢子循环接种无芒稗种子10次进行驯化。（4）取驯化10次后的孢子悬浮液50μL滴于PDA平板上，用接种环划线后，28℃恒温培养5d。（5）挑选培养皿上划线培养出的稗草平脐蠕胞菌单菌落，取其边缘带本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种增强除草毒力的稗草平脐蠕胞菌孢子，其特征在于该稗草平脐蠕胞菌孢子是经过循环接种稗草种子8-12次驯化培养得到。/n

【技术特征摘要】
1.一种增强除草毒力的稗草平脐蠕胞菌孢子，其特征在于该稗草平脐蠕胞菌孢子是经过循环接种稗草种子8-12次驯化培养得到。


2.如权利要求1所述的一种增强除草毒力的稗草平脐蠕胞菌孢子，其特征在于具体通过以下步骤得到：
（1）将稗草平脐蠕胞菌接种到PDA平板上，25℃-28℃黑暗倒置培养10-14d后，采用无菌0.05%Tween-20溶液洗脱孢子，配制成浓度1×105-5×105个/mL的孢子悬浮液，备用；
（2）将20-25g稗草种子置于三角瓶中，121℃灭菌30min，冷却后接种上一步骤得到的孢子悬浮液，进行25℃-28℃恒温黑暗培养10-12d，收集孢子悬浮液；
（3）重复步骤（2）8-12次，得到驯化后的孢子悬浮液；
（4）取步骤（3）得到的驯化后的孢子悬浮液50-100μL滴加到PDA平板上，采用接种环划线后，进行25℃-28℃恒温培养4-5d；
（5）挑选步骤（4）得到的平板上的稗草平脐蠕胞菌单菌落，取其边缘带有菌丝体的菌块，转接至新鲜PDB培养基内，25℃-28℃振荡培养3-4d后将菌丝体粉碎，制成菌悬液备用；
（6）以玻化微珠为底物基质，添加稗种豆粕粉混合培养基质、Na3PO4·12H2O、MgSO4和水，搅拌均匀后于121℃灭菌30min，得到培养基，冷却后接种步骤（5）所得到的菌悬液，搅拌均匀后25℃-28℃恒温黑暗培养12-14d，收集稗草平脐蠕胞菌孢子，配制得到0.05%Tween-20孢子悬浮液。


3.如权利要求2所述的一种增强除草毒力的稗草平脐蠕胞菌孢子，其特征在于所述步骤（6）中培养基中玻化微珠、稗种豆粕粉混合培养基质、Na3PO4·12H2O4g、MgSO4和水的质量比为140:100:4:2:800，所述稗种豆粕粉混合培养基质包括稗种粉、豆粕粉和稗草茎杆粉质量比为1:1:8。


4.如权利要求2所述的一种增强除草毒力的稗草平脐蠕胞菌孢子，其特征在于所述步骤（6）中所述菌悬液接种量为150-170g/L。


5.一...

【专利技术属性】
技术研发人员：张建萍，陆永良，余柳青，
申请(专利权)人：中国水稻研究所，
类型：发明
国别省市：浙江;33