一株在高盐环境下增强木麻黄抗氧化能力的内生真菌Y6制造技术

本发明专利技术公开了一种在高盐环境下增加木麻黄抗氧化能力的内生真菌Y6，属于微生物技术领域。该内生真菌Y6的分类命名为炭团菌（

【技术实现步骤摘要】
一株在高盐环境下增强木麻黄抗氧化能力的内生真菌Y6
本专利技术属于微生物
，具体涉及一株能在高盐环境下增加木麻黄抗氧化能力的内生真菌Y6。
技术介绍
盐胁迫严重影响着农作物以及林地植物的生长发育，是世界范围内主要的非生物胁迫。过量的盐分离子，如Na+、K+、Cl-等被植物摄取后会使得植物细胞内离子浓度增高，而植物细胞内的各种生物酶只能在较狭窄范围离子浓度才具有活性，如对Na+离子和Cl-离子要求低于50mM，对于K+离子而言则是0.1-0.2M。因此，离子浓度的改变影响生物酶活性，从而影响植物的生长。盐胁迫亦能通过影响细胞质膜的组分、透性、运输等一系列的变化，使植物细胞膜功能受损，从而在一定程度上破坏细胞的代谢以及各种生理功能。短枝木麻黄（CasuarinaequisetifoliaL.）是世界各国引种最早且人工栽培面积最大的木麻黄科树种，目前也是我国华南和东南沿海最主要的造林树种。现有研究都表明，木麻黄本身具有一定的耐盐能力，但其抗盐性的提高有助于发挥更大的生态作用。因此，如何增加木麻黄耐盐能力，提高生态适应性是将来研究的重点。前人的一系列研究都表明植物内生真菌与宿主的共生体有利于宿主本身应对不利环境，同时还促进植物的生长发育，但这方面的研究大部分集中在禾草科植物，而木本植物内生真菌研究较少。从木麻黄组织中分离鉴定其内生真菌，寻找具有促生效果且具有一定耐盐性的内生真菌，建立木麻黄-内生真菌共生体系，提高木麻黄在高盐胁迫下的生长，可为丰富木本植物内生真菌的菌种信息以及为木麻黄工林经营制造生物菌肥提供数据基础和参考依据。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株在高盐环境下增强木麻黄抗氧化能力的内生真菌Y6。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一株在高盐环境下增强木麻黄抗氧化能力的内生真菌Y6，该内生真菌Y6的分类命名为炭团菌（Hypoxylonsp.），已于2019年11月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNO.18814。内生真菌Y6在土豆葡萄糖培养基（PDA培养基）上培养时，初期菌落成白色，气生菌丝茂盛，培养后期菌落中间颜色逐渐变深，逐渐呈墨绿色至黑色。上述内生真菌Y6菌株是从木麻黄的种子中分离纯化得到的，其可制备成菌液，通过根际土壤浇施或苗木直接接种的方式用于高盐环境下木麻黄苗木的种植。所述菌液的制备方法为：将所述菌株接入液体培养基中，摇床恒温培养72h后，将所得培养液用无菌水混合稀释，稀释后菌液浓度为8.75×105cfu/mL。所述液体培养基为PDB。本专利技术的优点在于：所得菌株能够缓解盐胁迫条件对植株生长的制约，能够在高盐环境下促进木麻黄抗氧化酶的增加，从而缓解盐胁迫对植株的伤害。附图说明：图1内生真菌Y6菌丝、菌落形态图。图2不同浓度NaCl胁迫对木麻黄EF和木麻黄EI小枝SOD含量的影响。不同大写字母表示同一NaCl水平下不同处理水平上差异显著(Duncanetest,P＜0.05)，不同小写字母表示同一处理水平下不同NaCl水平上差异显著(Duncantest,P＜0.05)。图3不同浓度NaCl胁迫对木麻黄EF和木麻黄EI小枝POD含量的影响。不同大写字母表示同一NaCl水平下不同处理水平上差异显著(Duncanetest,P＜0.05)，不同小写字母表示同一处理水平下不同NaCl水平上差异显著(Duncantest,P＜0.05)。图4不同浓度NaCl胁迫对木麻黄EF和木麻黄EI小枝MDA含量的影响。不同大写字母表示同一NaCl水平下不同处理水平上差异显著(Duncanetest,P＜0.05)，不同小写字母表示同一处理水平下不同NaCl水平上差异显著(Duncantest,P＜0.05)。图5不同浓度NaCl胁迫对木麻黄EF和木麻黄EI小枝CAT含量的影响。不同大写字母表示同一NaCl水平下不同处理水平上差异显著(Duncanetest,P＜0.05)，不同小写字母表示同一处理水平下不同NaCl水平上差异显著(Duncantest,P＜0.05)。图6不同浓度NaCl胁迫对木麻黄EF和木麻黄EI小枝H2O2含量的影响。不同大写字母表示同一NaCl水平下不同处理水平上差异显著(Duncanetest,P＜0.05)，不同小写字母表示同一处理水平下不同NaCl水平上差异显著(Duncantest,P＜0.05)。具体实施方式为了使本专利技术所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本专利技术所述的技术方案做进一步的说明，但是本专利技术不仅限于此实施例1木荷内生真菌的分离1.主要仪器设备AX224ZH电子天平(OHAUS)、LS-75HD高压蒸汽灭菌锅（济南来宝医疗器械有限公司）、JB-CJ-1500FX超净工作台（苏州佳宝净化工程设备有限公司）、DNP-9162恒温培养箱(上海精宏)、ZHWY2111B恒温震荡培养箱(上海智城)、Beckman超速离心机（美国）等。菌株鉴定主要仪器：FQD-48APCR扩增仪(BIOER)、EPS-100核酸电泳仪(上海天能科技)、SeqStudioDNA测序仪(美国)，研钵，冰袋，泡沫盒，移液器（Thermo），1.5ml和2mlEP管（Axygen）。2.主要试剂和培养基试剂：70%酒精、次氯酸钠、马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基、马铃薯葡萄糖(PDB)培养基、NaCl，Taq酶及PCR相关试剂、引物（ITS1/ITS4），OMEGA真菌基因组试剂盒，液氮，乙醇（天津大茂化学试剂厂），去离子水。3.内生真菌的分离（1）采用组织分离法，将木麻黄样本根据其的根、茎、叶、以及种子不同组织分成四个个部分，经流水冲洗干净阴干后于超净台内进行组织表面消毒。操作流程为：70%酒精浸泡30s→无菌水清洗3次→10%次氯酸钠浸泡7min→无菌水清洗3次。将木麻黄样品分别用手术刀切开，平放于已经灭菌过的平板培养基中后，于28︒C恒温培养箱内培养5-7天。（2）消毒效果的验证：将消毒最后一步清洗样品的无菌水涂布于未使用的PDA培养基上，28℃恒温培养4~7d，若无菌体长出则为消毒干净。采用组织印迹法，将消毒后的样本组织于未使用的PDA培养基上轻轻滚动或紧贴培养基放置5min后取走做对照，28℃恒温培养4~7d，如无菌体长出则为消毒干净。各对照重复3次。4.内生真菌的纯化待平板培养基上的组织材料培养3~5d后，用接种针挑取组织周围菌落生长良好的菌丝，分别于新的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基上采用划线法进行菌株纯化，倒置于恒温培养箱内，28℃恒温避光培养4~7d。反复纯化3~4次，得到纯化菌株。将纯化后的菌株接入斜面培养基，于4℃保存。5.内生真菌的筛选（1）平板初筛：采用三点接种法，将活化后的纯化菌株接种于含有不同浓度（1%、3%、5%、10%）NaCl的马本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株在高盐环境下增强木麻黄抗氧化能力的内生真菌Y6，其特征在于：所述内生真菌Y6的分类命名为炭团菌（

【技术特征摘要】
1.一株在高盐环境下增强木麻黄抗氧化能力的内生真菌Y6，其特征在于：所述内生真菌Y6的分类命名为炭团菌（Hypoxylonsp.），已于2019年11月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.18814。

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【专利技术属性】
技术研发人员：李键，龙凤，林勇明，洪滔，陈灿，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建;35