抗CD147抗体制造技术

本发明专利技术解决了提供具有优异的抗肿瘤活性和优异的安全性的新型抗CD147抗体的问题。本发明专利技术还解决了提供含有这种抗体的药物的问题。本发明专利技术还解决了尤其提供其中使用所述抗体或药物的治疗肿瘤的方法的问题。本发明专利技术提供了活化CD147并表明强烈抗肿瘤作用的CD147特异性抗体。本发明专利技术提供了表明不依赖于效应子功能的强烈抗肿瘤作用的抗CD147抗体。本发明专利技术提供了含有这种抗CD147抗体的药物组合物。本发明专利技术提供了用于治疗肿瘤的方法，其中使用这种抗CD147抗体和/或药物组合物。

Anti-CD147 antibody

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗CD147抗体
本专利技术涉及表现出有效的抗肿瘤效力的抗CD147抗体，用于产生抗CD147抗体的方法，和包含所述抗CD147抗体的抗肿瘤剂。
技术介绍
用于治疗癌症的方法和补救法的进展已揭示，先前被认为无法治愈的癌症是可治疗的，并且是完全可治愈的。已开发为表现出特别优异的药物稳定性和特异性的抗体药物的CTLA4抗体和PD1抗体通过活化免疫细胞(包括T细胞)针对黑色素瘤和一些实体癌表现出高客观应答率，并且偶而治愈黑色素瘤和一些实体癌，为癌症患者带来好消息。已经尝试用这些补救法治疗大多数难治性实体癌。然而，大多数胰腺癌和肝癌等不显示对这些药物的敏感性，并且表现出高复发率，甚至当通过手术摘除治疗或基于使用常规抗癌剂治疗时。因此，诚挚地寻求可以完全治愈癌症的治疗和补救法。CD147是具有2至3个免疫球蛋白样结构域的单程跨膜蛋白，并且已知通过多种CD147蛋白之间的相互作用或通过与参与生长、侵袭和炎症的细胞外或细胞膜表面分子(诸如CD44、整联蛋白家族分子、CD98、VEGFR、CypA/B和MCT1/3/4)的相互作用来活化下游信号相关分子(诸如FAK、MEK、Erk、JAK/STAT、AKT和MAPK家族分子)，由此加速蛋白酶(诸如MMP)的产生和癌症生长、转移和侵袭。此外，已报道，高CD147表达水平导致短存活期和不良的预后。因此，CD147被认为是用于癌症治疗的靶分子之一。事实上，靶向CD147的抗体，ABX-CBL和利卡汀实际上已经在临床上施用于人。ABX-CBL抑制CD147和亲环蛋白A之间的结合，并且不仅抑制T细胞活性，而且还在血液中以补体依赖性方式表现出针对正常细胞(包括CD147阳性T细胞)的细胞毒性活性。针对作为靶标疾病的GVHD进行的临床试验已揭示不足的效力并且已导致观察到严重的肌肉疼痛，且因此该抗体尚未被批准为药物(专利文献1、非专利文献1)。利卡汀是通过向HAb18抗体的Fab'2部分添加放射性同位素碘I131而制备的生物药物，并且在中国已被批准为药物，相关的癌症类型是肝癌(非专利文献2、非专利文献3)。利卡汀缺乏用于活化免疫细胞和补体的抗体的Fc部分，并且尚未报道具有免疫介导的毒性，且尚未报道临床上完全治愈肝癌。关于靶向CD147的其他抗体，阻断与CD147相关的生物活性、诸如血管生成或产生VEGF的基质金属蛋白酶产生的抗CD147单克隆抗体(专利文献2)，抑制T细胞活化的抗CD147单克隆抗体(非专利文献4)和特征在于具有ADCC活性和CDC活性的特异性结合CD147分子的抗体(专利文献3)是已知的。然而，缺乏效应子功能且表现出抗肿瘤效力的CD147抗体是未知的。此外，通过CD147活化细胞信号转导系统和抗肿瘤效力的关联是未知的。引文列表专利文献专利文献1：WO1999/045031专利文献2：WO2010/036460专利文献3：WO2017/061602非专利文献非专利文献1：DeegH,等人,J.Blood.,2052-2058,2001非专利文献2：ChenZ,等人,Int.J.RadiationOncologyBiol.Phys.,435-444,2006非专利文献3：XuJ,等人,Hepatology,269-276,2007非专利文献4：KochC,等人,InternationalImmunology,777-786,1999。专利技术概述本专利技术待解决的问题本专利技术的目的是提供具有新型药理作用、优异安全性和高抗肿瘤效力的新型的抗CD147抗体、包含所述抗体的药物产品以及用于使用所述抗体或药物产品治疗肿瘤的方法等。解决方案作为实现上述目的的深入研究的结果，本专利技术人已首次发现通过CD147活化信号相关的分子与抗肿瘤效力相关。本专利技术人已经成功地获得活化CD147并表现出高抗肿瘤效力的CD147-特异性抗体。本专利技术的抗体具有以不依赖效应子功能的方式表现出高抗肿瘤效力的特征。已经报道以效应子功能依赖性方式表现出抗肿瘤效力的抗体。然而，本专利技术的抗体具有不作用于T细胞和PBMC并且以不依赖于效应子功能的方式表现出高抗肿瘤效力的特征，且因此是预期作为药物产品是安全的优异抗体。本专利技术的抗体在肝癌细胞中表现出比用作肝癌的标准护理药物之一的索拉非尼的效力显著更强的效力。本专利技术的抗体在胰腺癌细胞中表现出比用作胰腺癌的标准护理药物之一的吉西他滨的效力显著更强的效力。本专利技术的抗体在慢性髓性白血病细胞中表现出比用作慢性髓性白血病的标准护理药物之一的伊马替尼的效力显著更强的效力。本专利技术人已经鉴定本专利技术的CD147抗体活化癌细胞中的p38MAPK和SMAD信号转导系统。本专利技术人已经鉴定本专利技术的CD147抗体在SMAD4-阳性细胞中表现出优异的抗肿瘤效力。本申请的专利技术涵盖以下方面。[1]针对人CD147的抗体或其抗原结合片段，其与至少一种选自以下(A)至(F)的抗体竞争结合人CD147且通过CD147活化信号转导：(A)包含由SEQIDNO:71代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:69代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；(B)包含由SEQIDNO:51代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:49代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；(C)包含由SEQIDNO:61代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:59代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体，(D)包含由SEQIDNO:81代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:79代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；(E)包含由SEQIDNO:10代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:8代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；和(F)包含由SEQIDNO:20代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:18代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体。[2]针对人CD147的抗体或其抗原结合片段，其结合至少一种选自以下(A)至(F)的抗体结合的表位且通过CD147活化信号转导：(A)包含由SEQIDNO:71代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:69代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；(B)包含由SEQIDNO:51代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:49代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；(C)包含由SEQIDNO:61代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:59代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；(D)包含由SEQIDNO:81代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:79代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；(E)包含由SEQIDNO:10代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:8代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；和(F)包含由SEQIDNO:20代表的氨基本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.针对人CD147的抗体或其抗原结合片段，其与至少一种选自以下(A)至(F)的抗体竞争结合人CD147且通过CD147活化信号转导：/n(A)包含由SEQ ID NO:71代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQ ID NO:69代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；/n(B)包含由SEQ ID NO:51代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQ ID NO:49代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；/n(C)包含由SEQ ID NO:61代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQ ID NO:59代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；/n(D)包含由SEQ ID NO:81代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQ ID NO:79代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；/n(E)包含由SEQ ID NO:10代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQ ID NO:8代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；和/n(F)包含由SEQ ID NO:20代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQ ID NO:18代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170727 JP 2017-1457011.针对人CD147的抗体或其抗原结合片段，其与至少一种选自以下(A)至(F)的抗体竞争结合人CD147且通过CD147活化信号转导：
(A)包含由SEQIDNO:71代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:69代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；
(B)包含由SEQIDNO:51代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:49代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；
(C)包含由SEQIDNO:61代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:59代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；
(D)包含由SEQIDNO:81代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:79代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；
(E)包含由SEQIDNO:10代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:8代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；和
(F)包含由SEQIDNO:20代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:18代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体。


2.针对人CD147的抗体或其抗原结合片段，其结合至少一种选自以下(A)至(F)的抗体结合的表位且通过CD147活化信号转导：
(A)包含由SEQIDNO:71代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:69代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；
(B)包含由SEQIDNO:51代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:49代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；
(C)包含由SEQIDNO:61代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:59代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；
(D)包含由SEQIDNO:81代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:79代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；
(E)包含由SEQIDNO:10代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:8代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体；和
(F)包含由SEQIDNO:20代表的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQIDNO:18代表的氨基酸序列组成的轻链可变区的抗体。


3.根据权利要求1或2所述的针对人CD147的抗体或其抗原结合片段，其具有降低的ADCC活性或缺乏ADCC活性。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的针对人CD147的抗体或其抗原结合片段，其具有降低的CDC活性或缺乏CDC活性。


5.根据权利要求1至4中任一项所述的针对人CD147的抗体或其抗原结合片段，其具有降低的ADCP活性或缺乏ADCP活性。


6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其结合表位，所述表位包含SEQIDNO:3中的位置106处的精氨酸(Arg)至位置165处的甘氨酸(Gly)的残基。


7.根据权利要求1至6中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其结合表位，所述表位包含SEQIDNO:3中所示的氨基酸序列中的位置106处的精氨酸(Arg)、位置108处的赖氨酸(Lys)、位置109处的丙氨酸(Ala)、位置110处的缬氨酸(Val)、位置127处的赖氨酸(Lys)、位置128处的丝氨酸(Ser)、位置129处的谷氨酸(Glu)、位置130处的丝氨酸(Ser)、位置131处的缬氨酸(Val)、位置132处的脯氨酸(Pro)、位置133处的脯氨酸(Pro)、位置134处的缬氨酸(Val)、位置164处的谷氨酰胺(Gln)和位置165处的甘氨酸(Gly)的残基。


8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中：
在重链序列中，其包含具有CDRH1、CDRH2和CDRH3的可变区，所述CDRH1由SEQIDNO:75代表的氨基酸序列组成，所述CDRH2由SEQIDNO:76代表的氨基酸序列组成，且所述CDRH3由SEQIDNO:77代表的氨基酸序列组成；且
在轻链序列中，其包含具有CDRL1、CDRL2和CDRL3的可变区，所述CDRL1由SEQIDNO:72代表的氨基酸序列组成，所述CDRL2由SEQIDNO:73代表的氨基酸序列组成，且所述CDRL3由SEQIDNO:74代表的氨基酸序列组成。


9.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其结合表位，所述表位包含SEQIDNO:143中所示的氨基酸序列或其中在SEQIDNO:143的序列中缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列。


10.根据权利要求1至5或9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中：
在重链序列中，其包含具有CDRH1、CDRH2和CDRH3的可变区，所述CDRH1由SEQIDNO:55代表的氨基酸序列组成，所述CDRH2由SEQIDNO:56代表的氨基酸序列组成，且所述CDRH3由SEQIDNO:57代表的氨基酸序列组成；且
在轻链序列中，其包含具有CDRL1、CDRL2和CDRL3的可变区，所述CDRL1由SEQIDNO:52代表的氨基酸序列组成，所述CDRL2由SEQIDNO:53代表的氨基酸序列组成，且所述CDRL3由SEQIDNO:54代表的氨基酸序列组成。


11.根据权利要求1至5或9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中：
在重链序列中，其包含具有CDRH1、CDRH2和CDRH3的可变区，所述CDRH1由SEQIDNO:65代表的氨基酸序列组成，所述CDRH2由SEQIDNO:66代表的氨基酸序列组成，且所述CDRH3由SEQIDNO:67代表的氨基酸序列组成；且
在轻链序列中，其包含具有CDRL1、CDRL2和CDRL3的可变区，所述CDRL1由SEQIDNO:62代表的氨基酸序列组成，所述CDRL2由SEQIDNO:63代表的氨基酸序列组成，且所述CDRL3由SEQIDNO:64代表的氨基酸序列组成。


12.根据权利要求1至5或9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中：
在重链序列中，其包含具有CDRH1、CDRH2和CDRH3的可变区，所述CDRH1由SEQIDNO:85代表的氨基酸序列组成，所述CDRH2由SEQIDNO:86代表的氨基酸序列组成，且所述CDRH3由SEQIDNO:87代表的氨基酸序列组成；且
在轻链序列中，其包含具有CDRL1、CDRL2和CDRL3的可变区，所述CDRL1由SEQIDNO:82代表的氨基酸序列组成，所述CDRL2由SEQIDNO:83代表的氨基酸序列组成，且所述CDRL3由SEQIDNO:84代表的氨基酸序列组成。


13.根据权利要求1至12中任一项所述的抗体的抗原结合片段，其选自Fab、F(ab')2、Fab'和Fv。


14.根据权利要求1至12中任一项所述的抗体，其为scFv。


15.根据权利要求1至12中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其为嵌合抗体。


16.根据权利要求1至12中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其为人源化的。


17.根据权利要求1至16中任一项所述的抗体，其中所述重链包含人免疫球蛋白G1重链恒定区、人免疫球蛋白G2重链恒定区或人免疫球蛋白G4重链恒定区，且所述轻链包含人免疫球蛋白κ轻链恒定区。


18.根据权利要求17所述的抗体，其中所述重链包含人免疫球蛋白G4重链恒定区。


19.根据权利要求18所述的抗体，其中在所述人免疫球蛋白G4重链恒定区内，如通过EU索引指示的位置228处的丝氨酸(Ser)被脯氨酸(Pro)取代。


20.根据权利要求18所述的抗体，其中在所述人免疫球蛋白G4重链恒定区内，如通过EU索引指示的位置234处的苯丙氨酸(Phe)被丙氨酸(Ala)取代，且如通过EU索引指示的位置235处的亮氨酸(Leu)被丙氨酸(Ala)取代。


21.根据权利要求18所述的抗体，其中在所述人免疫球蛋白G4重链恒定区内，如通过EU索引指示的位置228处的丝氨酸(Ser)被脯氨酸(Pro)取代，如通过EU索引指示的位置234处的苯丙氨酸(Phe)被丙氨酸(Ala)取代，且如通过EU索引指示的位置235处的亮氨酸(Leu)被丙氨酸(Ala)取代。


22.根据权利要求17所述的抗体，其中所述重链包含人免疫球蛋白G2重链恒定区。


23.针对人CD147的抗体或其抗原结合片段，其包含以下(c)和(d)并通过CD147活化信号转导：
(c)选自以下(c1)至(c4)的重链可变区：
(c1)由SEQIDNO:135代表的氨基酸序列中的位置20至136处的氨基酸残基组成的重链可变区；
(c2)由SEQIDNO:147代表的氨基酸序列中的位置20至136处的氨基酸残基组成的重链可变区；
(c3)(c1)或(c2)的序列中与每个CDR序列之外的框架区的序列具有至少95%或更高序列同一性的氨基酸序列；和
(c4)其中在根据(c1)至(c3)中任一项的序列中的每个CDR序列之外的框架区的序列中缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列；和
(d)选自以下(d1)至(d5)的轻链可变区：
(d1)由SEQIDNO:137代表的氨基酸序列中的位置21至128处的氨基酸残基组成的轻链可变区；
(d2)由SEQIDNO:149代表的氨基酸序列中的位置21至128处的氨基酸残基组成的轻链可变区；
(d3)由SEQIDNO:151代表的氨基酸序列中的位置21至128处的氨基酸残基组成的轻链可变区；
(d4)根据(d1)至(d3)中任一项的序列中与每个CDR序列之外的框架区的序列具有至少95%或更高序列同一性的氨基酸序列；和
(d5)其中在根据(d1)至(d4)中任一项的序列中的每个CDR序列之外的框架区的序列中缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列。


24.根据权利要求23所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
由SEQIDNO:135代表的氨基酸序列中的位置20至136处的氨基酸残基组成的重链可变区；和
由SEQIDNO:137代表的氨基酸序列中的位置21至128处的氨基酸残基组成的轻链可变区。


25.根据权利要求23所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
由SEQIDNO:135代表的氨基酸序列中的位置20至463处的氨基酸残基组成的重链；和
由SEQIDNO:137代表的氨基酸序列中的位置21至234处的氨基酸残基组成的轻链。


26.根据权利要求23所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
由SEQIDNO:147代表的氨基酸序列中的位置20至136处的氨基酸残基组成的重链可变区；和
由SEQIDNO:149代表的氨基酸序列中的位置21至128处的氨基酸残基组成的轻链可变区。


27.根据权利要求23所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
由SEQIDNO:147代表的氨基酸序列中的位置20至463处的氨基酸残基组成的重链；和
由SEQIDNO:149代表的氨基酸序列中的位置21至234处的氨基酸残基组成的轻链。


28.根据权利要求23所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
由SEQIDNO:147代表的氨基酸序列中的位置20至136处的氨基酸残基组成的重链可变区；和
由SEQIDNO:151代表的氨基酸序列中的位置21至128处的氨基酸残基组成的轻链可变区。


29.根据权利要求23所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
由SEQIDNO:147代表的氨基酸序列中的位置20至463处的氨基酸残基组成的重链；和
由SEQIDNO:151代表的氨基酸序列中的位置21至234处的氨基酸残基组成的轻链。


30.针对人CD147的抗体或其抗原结合片段，其包含以下(a)和(b)并通过CD147活化信号转导：
(a)选自以下(a1)至(a4)的重链可变区：
(a1)由SEQIDNO:123代表的氨基酸序列中的位置20至140处的氨基酸残基组成的重链可变区；
(a2)由SEQIDNO:125代表的氨基酸序列中的位置20至140处的氨基酸残基组成的重链可变区；
(a3)(a1)或(a2)的序列中与每个CDR序列之外的框架区的序列具有至少95%或更高序列同一性的氨基酸序列；和
(a4)其中在根据(a1)至(a3)中任一项的序列中的每个CDR序列之外的框架区的序列中缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列；和
(b)选自以下(b1)至(b3)的轻链可变区：
(b1)由SEQIDNO:127代表的氨基酸序列中的位置21至128处的氨基酸残基组成的轻链可变区；
(b2)(b1)的序列中与每个CDR序列之外的框架区的序列具有至少95%或更高序列同一性的氨基酸序列；和
(b3)其中在(b1)或(b2)的序列中的每个CDR序列之外的框架区的序列中缺失、取代或添加一个或几个氨基酸的氨基酸序列。


31.根据权利要求30所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
由SEQIDNO:123代表的氨基酸序列中的位置20至140处的氨基酸残基组成的重链可变区，或由SEQIDNO:125代表的氨基酸序列中的位置20至140处的氨基酸残基组成的重链可变区；和
由SEQIDNO:127代表的氨基酸序列中的位置21至128处的氨基酸残基组成的轻链可变区。


32.根据权利要求30所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：
由SEQIDNO:123代表的氨基酸序列中的位置20至466处的氨基酸残基组...

【专利技术属性】
技术研发人员：福地圭介，七井佳代子，天野正人，米田耕三，十时悠亮，山本昌司，
申请(专利权)人：第一三共株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP